15. 研究者拟构建高效筛选系统,将改进的苯丙氨酸合成关键酶基因P1导入谷氨酸棒杆菌,以提高苯丙氨酸产量。
(1)如图是该高效筛选系统载体的构建过程。载体1中含有Kan
R(卡那霉素抗性基因)和SacB两个标记基因,为去除筛选效率较低的SacB,应选择引物
________和
________,并在引物的
________(5'∕3')端引入XhoⅠ酶识别序列,进行PCR扩增,产物经酶切、连接后环化成载体2。
(2)PCR扩增载体3中筛选效率较高的标记基因RpsL(链霉素敏感基因)时,引物应包含
___________(EcoRⅠ∕HindⅢ∕XhoⅠ)酶识别序列,产物经单酶切后连接到载体2构建高效筛选载体4。
(3)将改进的P1基因整合到载体4构建载体5。将载体5导入链霉素不敏感(由RpsL突变造成)、卡那霉素敏感的受体菌。为获得成功导入载体5的菌株,应采用含有
__________的平板进行初步筛选。
(4)用一定的方法筛选出如下菌株:P1基因脱离载体5并整合到受体菌拟核DNA,且载体5上其他DNA片段全部丢失。该菌的表型为__________。
A.卡那霉素不敏感、链霉素敏感 |
B.卡那霉素敏感、链霉素不敏感 |
C.卡那霉素和链霉素都敏感 |
D.卡那霉素和链霉素都不敏感 |
(5)可采用
__________技术鉴定成功整合P1基因的菌株。之后以发酵法检测苯丙氨酸产量。