24. 啤酒生产需经过制麦、糖化、发酵等主要环节。糖化主要是将麦芽中的淀粉等有机物水解为小分子的过程。主要工艺流程如下图所示,请回答下列问题:
(1)大麦是啤酒发酵的重要碳源,针对制麦及糖化步骤,下列说法正确的有
_________(填序号)。
①大麦萌发时仅产生淀粉酶,几乎不产生蛋白酶
②用赤霉素处理大麦,可诱导淀粉酶的合成
③酵母不能直接利用淀粉,需要淀粉酶等将淀粉转化成酵母可利用的糖
④糖化采用的温度越高,淀粉水解速度越快
(2)啤酒发酵时具有活力的酵母需达到一定的数量,故在菌种活化的过程中,需定时取样,检测酵母的生长状况。若某次样品经2次10倍稀释后,经台盼蓝染色(体积不计),在25×16型血细胞计数板上计数
_________色细胞,5个中格中的细胞数为244个,该样品中活酵母细胞的密度为
_________个细胞/mL。(注:每个小格长1mm,宽1mm,高0.1mm)
(3)敲除酿酒酵母中的蛋白酶基因,减少发酵液中蛋白的水解,有助于增强啤酒泡沫的稳定性,从而改善啤酒的品质。以下是某科研小组的实验:
①已知编码酵母蛋白酶A(PEP4)的基因序列如下(为非模板链):
Cas9蛋白可在人为设定的RNA序列(gRNA)引导下,在选定位点切断相应的DNA链(如图),在DNA自我连接的修复过程中产生突变。DNA序列中含NGG的位点具有较高的编辑效率(N为任意碱基)。
上述PEP4序列中有
________处可作为Cas9的优选剪切位点。Cas9的剪切位点在其NGG识别位点的
________________侧。(填“5'”或“3'”)
②用酪蛋白固体培养基筛选突变体,野生型可以水解酪蛋白,在菌落周围形成透明圈。需要筛选透明圈
________的菌落,表明其蛋白酶活性
__________。