【推荐1】马铃薯块茎含有大量的淀粉，富含多种维生素和无机盐，我国已将马铃薯作为主粮产品进行产业化开发。下图是转基因抗盐马铃薯的培育过程，请分析回答问题：

（1）为获取抗盐基因，可以从碱蓬细胞研磨液中提取抗盐基因的_____来合成cDNA。
（2）上图构建基因表达载体时，最好选用_______________酶切割含目的基因的外源DNA和质粒，以防止目的基因、质粒自身环化，但不能使用Sma l切割的原因是___________。构建好的重组质粒在抗盐基因前要加上特殊的启动子，启动子是一段有特殊序列的________片段。
（3）将基因表达载体导入农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA上的原因是____________。通过农杆菌的转化作用，使抗盐基因插入到马铃薯细胞中的染色体DNA上，从而使抗盐基因的遗传特性得以_______________。
（4）上图转基因抗盐马铃薯培育过程中，属于脱分化阶段的是___（填序号）。从个体生物学水平上检验转基因抗盐马铃薯是否培育成功的方法是_____________。

【推荐2】研究人员利用最新基因编辑工具CRISPR/Cas9，成功敲除了比格犬的载脂蛋白E（APOE）基因，培育出动脉粥样硬化疾病模型犬“苹果”。利用“苹果”腹部皮肤体细胞作为样本，建立细胞系，取其细胞核注入比格犬去核卵母细胞中，形成早期胚胎后进行胚胎移植，得到了我国首只克隆犬“龙龙”。如图为克隆犬“龙龙”诞生的流程图，回答下列问题：

   

(1)CRISPR/Cas9系统是由Cas9蛋白和sgRNA构成的RNA-蛋白复合体，其中的______________负责识别并结合特定DNA序列，引导Cas9蛋白对目的基因进行编辑，在实践中发现该系统有时存在编辑对象出错而造成“脱靶”的现象，实验发现sgRNA的序列长短影响成功率，sgRNA序列越长脱靶率越_______________（填“高”或“低”）。
(2)取“苹果”的皮肤细胞，并进行体细胞建系。皮肤细胞在培养过程中，首先应保证其处于无菌、无毒的环境，除了适宜的营养物质、温度等条件外，还需要一定的气体环境是_______________。
(3)为了获得较多的卵母细胞，需要对供体实验比格犬注射_______________，获得的卵母细胞应在体外培养到_______________期。
(4)克隆本质上是一种无性繁殖，该过程的最后一道工序是胚胎移植，其实质是无性繁殖。胚胎移植前，需对供、受体犬进行_______________处理，为供体胚胎移入受体提供相同的生理环境。重构胚通常需要发育到_______________阶段才能进行胚胎移植。

【推荐3】金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：

（1）从高表达MT 蛋白的生物组织中提取mRNA，通过______________获得______________用于PCR扩增。
（2）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物（引物1和引物2），为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的______________位点。设计引物时需要避免引物之间形成______________，而造成引物自连。
（3）图中步骤1代表______________，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。
（4）PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏_________的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但____________的引物需要设定更高的退火温度。
（5）如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有___________（填序号：①升高退火温度       ②降低退火温度       ③重新设计引物）。

【推荐1】乙烯具有促进果实成熟的作用，ACC氧化酶和ACC合成酶是番茄细胞内合成乙烯的两个关键酶。利用反义基因技术（原理如图1），可以形成互补双链RNA，使RNA不能与核糖体结合，或者被RNA酶降解，从而抑制上述两个基因的表达，使番茄具有耐储存、宜运输的优点。图2为ACC氧化酶和ACC合成酶的反义融合基因表达载体的结构示意图。

(1)图2中的2A11为特异性启动子，该反义基因基因表达载体中还应该具有____原件。
(2)合成出的ACC氧化酶基因两端分别含限制酶BamHI和XbaI的酶切位点，ACC合成酶基因两端含SacI和XbaI的酶切位点，构建反义基因表达载体时，可以先用限制酶____对上述两个基因进行切割后，再将它们拼接成融合基因，之后相应的质粒和融合基因均使用限制酶____进行切割，以确保融合基因能够正确插入载体中。
(3)为了实现图1中反义基因的效果，应将融合基因____（填“正向”或“反向”）插入启动子2A11的下游。
(4)构建好的基因表达载体通常用____法导入番茄细胞中。
(5)在检测番茄细胞中是否存在反义融合基因时，____（填“能”或“不能”）用放射性物质标记的ACC氧化（合成）酶基因片段作探针进行检测，理由是____。

【推荐2】启动子可分为组成型启动子和诱导型启动子。组成型启动子能够持续、高效地启动目的基因在植物各种组织中表达，但往往也会阻碍植物的生长发育；诱导型启动子能与抗逆基因结合，从而使转基因植物更好地适应逆境。沙冬青脱水素基因（AmDHN基因）能使植株具有较强的抗旱作用。科研人员构建Rd29A启动子驱动AmDHN基因表达的载体，过程如下图，再利用某种方法转化“敖汉苜蓿”培育耐旱新品种，以期在干旱地区发展苜蓿产业。neo「是新霉素抗性基因，aadA是链霉素抗性基因。回答下列问题。

限制酶	BclI	Sac I	BamH I	Pst I	Sma I
识别序列和切割位点	T↓GATCA	GAGCT↓C	G↓GATCC	CTGCA↓G	CCC↓GGG

(1)Rd29A启动子是_____（填“组成型”或“诱导型”）启动子，其基本单位是_____，能识别Rd29A启动子的酶是_____。
(2)下图是科研人员扩增Rd29A启动子所设计的引物，根据引物的碱基序列及限制酶的识别序列分析，构建载体2时选用的限制酶是_____。
上游引物P1：5'-GACCCGGGTTTCCAAAGATTTTTTTC-3'
下游引物P2：5'-GAGAGCTCTGGGGTTTTGCTTTTGAATGT-3'
(3)构建载体3时，选用_____酶切割载体1、2成功率较高。 载体5需先转入_____后再转化苜蓿，转化后应在培养基中添加_____筛选转化成功的愈伤组织。
(4)为检测转基因苜蓿中AmDHN基因的转录水平，挑选10株转基因植株，平均分成2组，利用自来水和20%PEG（模拟干旱条件） 处理8h, 提取植株的_____通过RT-PCR检测AmDHN基因和MtActin基因（一种骨架蛋白基因，在各种细胞中表达都相对恒定）的表达水平，扩增产物常用_____技术进行检测，检测结果如下图：

该图中，自来水处理和20%PEG条件下的AmDHN基因表达水平的差异说明_____。

【推荐3】图1表示利用基因工程制备某种病毒单克隆抗体的操作流程，过程①的 mRNA序列为5'-AUCUAUGCUCAUCAG···（中间省略 3n个核苷酸序列）···CGCAGCAGUAGCG-3'。图2 表示遗传信息传递过程中发生碱基配对的部分片段示意图。请回答下列问题：

(1)图1中，过程①所用的mRNA只能从病毒感染者的________细胞中提取。过程②需要的酶是________。在重组质粒中，目的基因两侧必须具有________的核苷酸序列，以保证目的基因在受体细胞中成功表达。
(2)图1中的mRNA碱基总数是（34+3n），其中A+U占全部碱基的比例为40%，则以一个目的基因为模板，经PCR扩增三次循环，在此过程中消耗的胞嘧啶脱氧核苷酸数目是________（请用计算式表达）。
(3)科研人员发现，某次制备获得的单克隆抗体氨基酸数目比 nRNA正常编码的氨基酸数少了2个。检测发现，目的基因在复制过程中有一对碱基发生了替换，该对碱基对应于mRNA的上述已知序列中，则目的基因中发生了替换的碱基对是________（请将转录模板链碱基写在前面，已知起始密码子是AUG，终止密码子是UAA、UAG、UGA）。
(4)图2所示物质彻底水解，可获得________种不同的小分子物质。

【推荐1】我国是世界最大的棉花消费国、第二大棉花生产国。利用基因工程技术获得的转基因抗虫棉投入种植生产已经非常成熟，尤其是我国独创的花粉管通道法更是一种十分简便经济的方法，为推动基因工程技术的发展也做出了贡献。
（1）花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后滴加_____（填“目的基因”或“含目的基因的表达载体”），使目的基因借助花粉管通道进入_____。
（2）目的基因导入后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过_____才能知道。为确定转基因棉花的DNA上是否插入了目的基因和转基因棉花的目的基因是否成功转录，都会用到分子杂交技术，但两者从杂交对象上的区别是_____。
（3）为检验棉花植株是否被赋予抗虫特性，可以在个体水平上做_____实验。如果抗虫基因导入成功，且与某一条染色体的DNA整合起来，该转基因抗虫棉可视为杂合子，将该转基因抗虫棉自交一代，预计后代中抗虫植株的比例占_____。
（4）基因工程在原则上只能生产自然界_____（选填“已存在”或“不存在”）的蛋白质，这些蛋白质不一定完全符合人类生产和生活的需求。因此，在基因工程基础上产生了蛋白质工程，通过_____，对现有蛋白质进行改造，或制造新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。

【推荐2】fat-1基因源于秀丽隐杆线虫，其编码的脂肪酸脱氢酶是合成n-3多不饱和脂肪酸最后一步所必需的酶，该酶在生物体内有重要作用。科研人员欲利用fat-1基因培育转基因家兔，其部分流程如图一所示。

(1)在构建PEBf质粒时，为确保fat-1基因按正确方向插入，需要进行双酶切，还需对fat-1基因的引物进行进一步的设计。已知fat-1基因转录的模板链为b链，若在与b链结合的引物的5′端添加了限制酶识别序列GAATTC，则需要在引物_______的_______端添加的限制酶识别序列为_______。
(2)PCR扩增过程中，最早经过_______轮循环后，便可获得两端均携带限制酶识别序列的所需双链目的基因。PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。为了能在波长为300nm紫外灯下检测出DNA分子，需要在琼脂糖溶液中加入适量的_______。
(3)为了获得转基因家兔，需利用_______（方法）将目的基因导入动物的受精卵中，该过程发生的变异类型为_______。
(4)为了获得转基因动物，还需要将含有目的基因的受精卵发育形成的胚胎移植到受体子宫内。在胚胎移植前要对受体进行_______处理，原因是_______。

【推荐3】绞股蓝又名七叶胆，是一种含有中草药成分的天然植物。具有清心提神、抗疲劳、清热解毒、祛痰止咳、降低胆固醇和血脂等功效。不仅如此、绞股蓝细胞中还含有抗烟草花叶病毒（TMV）的基因，可以合成一种抗TMV蛋白，使其叶片对TMV具有抗感染特性。烟草是具有经济价值的双子叶植物，TMV的感染会导致烟草大幅度减产。科研人员利用基因工程技术培育出了抗TMV的烟草。主要流程如图所示。

（1）从绞股蓝细胞中提取抗TMV基因转录的RNA，然后合成目的基因。图中①过程需要_____酶。在体外通过_____技术可以获得较多的目的基因。
（2）图中能体现基因工程核心的是_____过程（用图中的数字表示），该过程要用到的酶是_____。
（3）④过程表示将重组Ti质粒导入烟草体细胞，常用方法是_____。
（4）由图分析，在③过程构建的重组Ti质粒上应该含有的标记基因是_____基因。
（5）⑤过程中，烟草体细胞经过_____形成愈伤组织，然后经过再分化形成再生植株。
（6）在个体水平上检验获得的烟草能否抗TMV的方法是_____。

【推荐1】一位科学家正在使用氨苄青霉素敏感型菌株进行研究，该菌株不能利用乳酸，这是因为它的乳糖操纵基因异常。该科学家有两种质粒，一种含有正常的乳糖操纵基因，另一种含有氨苄青霉素抗性基因。她运用限制酶和DNA连接酶，获得了一些含有这两个基因的重组质粒。然后在一个仅以葡萄糖为唯一能源的培养基中培养该细菌，并向其中加入高浓度的重组质粒。使细菌增殖。再将实验组细菌（含重组质粒）和对照组细菌（不含重组质粒）放入下表所示环境中让其生长。请回答下列问题：

（1）在基因工程的基本操作程序中，___________是基因工程的核心。限制酶是基因工程中常用的工具，若要提取限制酶，可选择的生物是__________（举出一例）。本实验中使用限制酶的作用是：__________。
（2）在以葡萄糖为唯一能源的培养基中加入高浓度的质粒，为了促进细菌更好的吸收重组质粒，还应用______处理细菌，使细菌处于_______。该培养基以葡萄糖为能源是因为_________。
（3）若没有新的突变发生，细菌最有可能在哪些培养基上生长出菌落(     )
A．只有1，2和4号          B．只有3，5和6号
C．只有1，2，3和4号     D．只有4，5和6号
（4）如果在准备制作重组质粒时未使用DNA连接酶，则细菌最可能在________号和_______号平板上长出菌落。
（5）若该科学家用该培养基进行另一项实验如表2，在该培养基中用乳糖为唯一能源，则细菌能在哪一培养基中长出菌落_____________。
A．只有10号        B．只有8号          C．7号和8号            D．8号和10号

【推荐2】如图表示利用基因工程制备抗体的基本途径，据图回答下列问题是：

（1）上图中的细胞①是_________细胞，过程②是________过程。
（2）抗体基因可以通过PCR技术扩增获得。首先从基因组数据库中查询需合成的抗体基因mRNA的核苷酸序列，以便根据这一序列设计合成________________，并以上图中的______________为模板直接进行PCR扩增。若下图为第一轮循环产生的产物，请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物 ________________。（要求：在产物中标出a、b链和引物的种类）
（3）图中将目的基因导入大肠杆菌的过程中，________（填“要”或“不需要”）利用Ca处理大肠杆菌制备感受态细胞，原因__________________________________________。
（4）为检测目的基因在大肠杆菌中是否翻译，可从大肠杆菌中提取___________，进行_______杂交实验。

【推荐3】乙烯具有促进果实成熟的作用，ACC 氧化酶和 ACC 合成酶是番茄细胞合成乙烯的两个关键酶。利用反义 DNA 技术（原理如图 1），可以抑制这两个基因的表达，从而使番茄具有耐储存、宜运输的优点。图 2 为融合 ACC 氧化酶基因和 ACC 合成酶基因的反义表达载体结构示意图。

（1）图 2 中的 2A11 为特异性启动子，则 2A11 应在番茄的 _____（器官）中表达。
（2）从番茄成熟果实中提取_____为模板，利用反转录法合成 ACC 氧化酶基因和ACC 合成酶基因，以进行拼接构成融合基因并扩增。
（3）合成出的 ACC 氧化酶基因两端分别含限制酶 BamHⅠ和 XbaⅠ的酶切位点，ACC合成酶基因两端含 SacⅠ和 XbaⅠ的酶切位点，用限制酶_____对上述两个基因进行酶切，再串联成融合基因，相应的 Ti 质粒应用限制酶_____进行切割，确保融合基因能够插入载体中。
（4）为了实现图 1 中反义基因的效果，应将融合基因反向插入在启动子 2A11的下游即可构成反义融合基因。将表达载体与农杆菌菌液混合后，接种在含有_____的培养基中，以筛选出含有反义融合基因的农杆菌，再利用农杆菌转化法获得转基因番茄。
（5）在检测番茄细胞中是否存在反义融合基因时，_____（填“能”/“不能”）用放射性物质标记的 ACC 氧化（合成）酶基因片段做探针进行检测，理由是_____。