1 . 纤维素是厨余垃圾中占比较多的一种成分，纤维素分解菌能产生纤维素酶分解纤维素。某生物兴趣小组欲从牛的瘤胃内容物中分离并筛选出能高效降解纤维素的纤维素分解菌，如图1所示。请回答下列问题：

(1)常规微生物实验中，下列物品及其消毒或灭菌方法错误的是______（填编号）。

编号	①	②	③	④
物品	培养基	超净工作台	涂布器	培养皿
消毒或灭菌方法	干热灭菌	紫外线照射	灼烧灭菌	干热灭菌

(2)初选候选菌时使用的培养基中除含有水、无机盐、氮源等营养物质，还要以______为唯一碳源。
(3)为了获得能高效分解纤维素的细菌，过程③应选择残余纤维素浓度______（填“最高”或“最低”）的培养瓶中的微生物进一步接种。
(4)小组的甲、乙两位同学利用稀释涂布平板法测定提取的瘤胃样品中纤维素分解菌的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：甲同学在该浓度下涂布了1个平板，统计的菌落数为56；乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为43、54、266，然后取其平均值121作为统计结果。请判断这两位同学的实验结果是否有效，并说出理由：①甲同学：______。②乙同学：______。
(5)该小组又利用筛选到的纤维素分解菌获取纤维素酶进行了相关研究，结果如图2。（注：A酶和B酶分别是两种微生物分泌的纤维素酶。）该小组判断______酶更适合用来处理厨余垃圾，依据是______。

2 . 家禽的谷物饲料中富含纤维素，但家禽消化道中缺少能降解纤维素的酶，降低了家禽对饲料的吸收与利用。乳酸杆菌是动物胃肠道中的优势有益菌之一，枯草芽孢杆菌可产生降解纤维素的一种酶，这种酶由W基因编码。研究人员将W基因转入乳酸杆菌，规模化生产后将其添加于饲料，以提高家禽的养殖效率。
(1)培养乳酸杆菌时培养基中除添加主要营养物质外还需要添加__________以满足其生长对特殊营养物质的需求。农牧业上常将以制糖工业的废液为原料通过发酵获得的__________制成微生物饲料提高饲料的品质。
(2)枯草芽孢杆菌的W基因可编码一种可高效降解纤维素的酶，已知图中W基因转录方向是从左往右。为使乳酸杆菌产生该酶，以图中质粒为载体，进行转基因。

限制酶	BamHⅠ	EcoRⅠ	MfeⅠ	KpnⅠ	HindⅢ
识别序列和切割位点（5′→3′）	G↓GATTC	G↓AATTC	C↓AATTG	GGTAC↓C	A↓AGCTT

①限制酶主要是从__________中分离纯化出来的。应使用限制酶__________切割图中质粒，以获得能正确表达W基因的重组质粒。
②W基因转录的模板链是__________。利用PCR技术对W基因进行扩增时子链延伸的方向是__________。
(3)在仅添加氨苄青霉素的培养基上筛选出的细胞不一定是目的细胞，请说明理由：__________。为确定导入重组质粒的乳酸杆菌是否具有分解纤维素的能力，研究人员将导入了重组质粒的乳酸杆菌接种在__________固体鉴别培养基上，若出现__________现象，则证明导入成功。

3 . 农作物秸秆中的纤维素可作为酒精发酵的原材料。酵母菌不能直接利用纤维素，纤维素需被其他微生物（如好氧型细菌）水解为葡萄糖后才能被酵母菌利用。为了筛选获得高产纤维素酶的纤维素分解菌﹐研究人员以某玉米地土壤为样品，使用刚果红平板法筛选获得目的菌株，该方法的原理是：刚果红与纤维素形成红色复合物，若纤维素被分解，刚果红无法与纤维素的分解产物结合，培养基中的菌落周围会形成透明圈。下列相关叙述错误的是（       ）

A．该平板以纤维素作为提供能量的碳源，属于固体培养基

B．操作中对土壤溶液进行振荡培养，其目的是增加目标菌株的数量

C．可用稀释涂布平板法进行纯化和计数

D．菌落直径与透明圈直径的比值越大，该菌分解纤维素的能力越强

4 . 下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方，请根据表格和所学知识回答下列相关问题。

成分	含量
蛋白胨	10.0g
乳糖	5.0g
蔗糖	5.0g
K2HPO4	2.0g
显色剂（伊红·美蓝）	0.2g
琼脂	12.0g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL

(1)在微生物的实验室培养中，获得纯净培养物的关键是______，因此需对培养基进行______（填具体方法）。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、________。
(2)根据用途划分，该培养基属于________（填“选择”或“鉴别”）培养基，若要分离能分解纤维素的细菌需将培养基中________换成_______，若要鉴定分解纤维素的细菌还需将伊红·美蓝换成________。
(3)培养大肠杆菌时，可以对细菌进行计数的接种方法是_______。通过上述方法可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，称为________。通过该方法统计的菌落数往往比活菌数要________，原因是________。
(4)在实验中，研究者每隔24小时统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止_________。实验结果为6号试管涂布的三个平板的菌落数为550、501、688，7号试管涂布的三个平板的菌落数为58、73、97，8号试管涂布的三个平板的菌落数为8、15、28.该10ml原液样品中含有大肠杆菌的估算数目是_____个。

5 . 纤维素分解菌是一种新型饲料添加剂，能够提高粗纤维饲料的转化率，为养殖业提供更多的饲料来源。研究人员从反刍动物粪便中分离筛选纤维素分解菌，步骤如下：

关于上述实验的分析正确的是（　　）

A．丙中透明圈越小说明细菌分解纤维素能力越强

B．通过③④可实现将聚集的微生物分散成单个细胞

C．培养基B中应加入纤维素作为唯一氮源

D．可采用干热灭菌法对培养基A、B进行灭菌

6 . 进行土壤中尿素分解菌的选择培养时，利用的培养基组分及含量如表所示。下列分析错误的是（       ）

组分	KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4·7H2O	葡萄糖	尿素	琼脂糖	H2O
含量	1.4g	2.1g	0.2g	10.0g	1.0g	15.0g	定容1000mL

A．KH2PO4和Na2HPO4既可为菌体提供无机盐，又可调节培养基的pH

B．尿素既可为尿素分解菌提供氮源，又可对培养基中的微生物起选择作用

C．琼脂糖可以为尿素分解菌提供碳源，不仅仅只起到凝固剂的作用

D．在上述培养基中加入酚红指示剂可进一步鉴定出尿素分解菌

7 . 家禽的饲料中富含谷物，纤维素是谷物的重要成分，但家禽消化道中缺少降解纤维素的酶，如果将其添加到饲料中，能提高家禽养殖效率。枯草芽孢杆菌能分泌降解纤维素的酶，由W等相关基因控制合成，纤维素与刚果红结合形成红色物质，纤维素水解产物不能与刚果红结合形成红色物质。科研人员欲利用图1的质粒作为载体、图2的W基因为目的基因进行转基因操作。回答下列问题：

(1)常用刚果红染色法（固体培养基）筛选分泌纤维素酶效率高的枯草芽孢杆菌，其原理为：____。
(2)利用PCR技术获取并扩增W基因的片段时，需用耐高温的DNA聚合酶的步骤称为____。扩增30轮，共消耗引物____对（可用计算式表示），扩增后还需利用琼脂糖凝胶电泳法来鉴定PCR的产物，其电泳速率与凝胶浓度呈____（填“正相关”或“负相关”）。
(3)W基因以乙链为转录模板链，转录时mRNA自身延伸的方向为5'→3'。下表是几种限制酶的识别序列及切割位点，图1、图2标注了相关限制酶的识别序列和酶切位点。为获得能正确表达W基因的重组质粒，最好使用____限制酶切割质粒，同时使用____限制酶切割W基因的DNA片段。

EcoRⅠ	BamHⅠ	KpnⅠ	MfeⅠ	HindⅠⅠⅠ
5'-G↓AATTC-3'	5'-G↓GATCC-3'	5'-G↓GTACC-3'	5'-C↓AATTG-3'	5'-A↓AGCTT-3'

8 . 纤维素分解菌产生的纤维素酶能将纤维素水解成小分子物质。刚果红可与纤维素结合形成红色复合物，但不能与纤维素的水解产物反应。如图为纤维素分解菌在含刚果红的培养基中形成的透明圈。下列相关叙述错误的是（       ）

   

A．纤维素可为纤维素分解菌直接提供能量

B．制备图示培养基时，需向其中加入琼脂

C．实验时所用接种方法是稀释涂布平板法

D．据图分析，d中菌落分解纤维素的能力较强

9 . 纤维素被纤维素分解菌分解后可以用来生产乙醇。实验室中常用刚果红培养基鉴别纤维素分解菌，其原理是在含纤维素的培养基中添加刚果红，刚果红会与纤维素形成红色复合物，若纤维素被分解，则不能形成该复合物，培养基中就会出现以这些菌落为中心的透明圈。下列相关叙述正确的是（　　）

A．刚果红培养基中除了纤维素、刚果红，还必须添加足量碳源物质

B．实验中需要将富集培养后的待测菌液直接涂布在刚果红培养基中

C．应选择菌落直径与周围透明圈直径比值大的菌落进行纯化培养

D．在刚果红培养基上长出的菌落需要进一步确定其产纤维素酶的能力

10 . 在筛选纤维素分解菌的培养基中加入刚果红染料，研究者观察到几个有透明圈的菌落。据图分析错误的是（       ）

A．透明圈内的刚果红染料已被分解	B．菌落①中的菌株降解纤维素能力最强
C．图中菌落可能是细菌也可能是真菌	D．图中培养基以纤维素为唯一碳源