1 . 研究低温条件下番茄细胞WHYI 基因对光合作用的影响，对于温度敏感型蔬菜作物的栽培具有重要的实践意义。回答下列问题：
(1)研究人员利用重组DNA 技术，将克隆的WHYI 基因与外源高效启动子连接，导入番茄基因组中构建WHYI 基因的过表达植株（W⁺），如图1所示。启动子是识别、结合___________酶的部位。若限制酶切割WHYI 基因和番茄基因组后形成相同的黏性末端（即图中Ⅰ、Ⅱ处），则会出现__________（答出2点）等情况，从而导致构建过表达植株的成功率下降。

   

(2)PCR 的产物一般通过电泳来鉴定，结果如图2所示。1号泳道为标准，2号泳道为阳性对照（提纯的相关蛋白基因片段），3号泳道为实验组。1 号泳道的条带实质为__________，若3号泳道有杂带（非目的 DNA 片段）出现，则原因可能是__________（答出2 点）。

   

(3)小干扰 RNA（siRNA）能诱导特定基因转录出的 mRNA降解，导致基因沉默。研究人员据此构建了 WHYI 基因的沉默植株（W⁻），siRNA 因阻断了__________过程而关闭了WHYI 基因。进一步研究发现，番茄细胞WHYI 基因影响光反应阶段 D1 蛋白（可捕捉光能）的含量，且与温度有关。研究人员用特定抗体检测D1蛋白在叶绿体内的含量，结果如表所示。该实验中的自变量为__________，对比三种番茄的D1蛋白含量可得到的结论是__________。

温度	25 ℃			4℃
植株类型	W+	W	W-	W+	W	W-
D1 蛋白含量

3 . 细胞色素C是细胞中普遍含有的一种蛋白质。利用DNA分子杂交技术和测定DNA的热稳定性可以判断生物亲缘关系的远近。实验思路如图所示，下列有关说法错误的是（       ）

A．DNA的提取利用了DNA与蛋白质等物质在物理和化学性质方面存在差异的特点

B．获得的杂合双链DNA分子，配对的碱基对越多，结构越稳定，变性温度越高

C．T甲-甲-T甲-丙大于0说明甲和丙的DNA序列不同，但甲与丙细胞色素C的结构可能相同

D．由上述结果可以推测，甲与乙的亲缘关系比甲与丙的亲缘关系近

4 . 防治新冠肺炎疫情，疫苗可能是实现群体免疫力最有力的终极武器之一、如图为制备病毒疫苗的三种途径，请回答下列有关问题：

(1)想要获得大量的病毒_____（填“可以”或“不可以”）直接通过牛肉膏蛋白胨培养基培养。通过减毒或灭活病毒制备的第一代疫苗，其特点是容易制备，但成分较复杂，可能产生的安全隐患是_____，因此第一代疫苗必须经过多次试验，才可应用于生产。
(2)制备第二代疫苗时，外衣壳蛋白基因A进入酵母菌细胞内，并在细胞内维持稳定和表达的过程，称为_____。我国在新冠病毒第二代疫苗研发中利用改造过的复制缺陷型腺病毒作为载体能提高疫苗的安全性，理由是_____。
(3)制备第三代疫苗时，为获得大量的外衣壳蛋白基因A，可采用_____技术，其原理是_____。
(4)健康人接种疫苗后，疫苗的有效性可以通过检测_____来判断。

5 . 基因工程中PCR扩增产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。下列关于PCR 及电泳鉴定的叙述，错误的是（       ）

A．PCR通过调节温度来控制DNA 双链的解聚及模板与引物的结合

B．DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度有关，与DNA分子的大小和构象无关

C．因 DNA分子在凝胶载样缓冲液中带正电荷或负电荷，可用于电泳

D．采用PCR技术对一个DNA进行扩增，若每个DNA分子的每条链都做模板，则第n次循环共需要引物2n个

6 . 科研人员想利用发绿色荧光的大肠杆菌来快捷检测出水中的毒物，将毒物诱导型启动子S插入图示质粒的P区，构建基因表达载体前需要利用PCR技术扩增启动子S。据图分析，下列叙述错误的是（       ）

A．扩增启动子S时，所用引物I上最好有限制酶XhoI的识别序列

B．若该重组质粒能随大肠杆菌稳定遗传，则图示质粒还应有复制原点

C．为了便于筛选，所选用大肠杆菌原本不能具有抗氨苄青霉素的特性

D．启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，两者的结合不受外因影响

7 . 凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶，它能水解多肽链中苯丙氨酸和甲硫氨酸之间的肽键以促使牛奶凝结来生产奶酪；提取凝乳酶的传统方法是从未断奶小牛的胃黏膜里提取，此方法产量低且昂贵。如今科学家运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中，实现了牛凝乳酶的批量生产。图1和图2表示质粒和凝乳酶基因的结构示意图，如表为不同限制酶识别的碱基序列及切割位点。回答下列相关问题：

限制酶	PvitⅡ	KpnI	EcoRI	PstI	BamHI	Sau3AI
识别序列	CAG↓CTG	G↓GTACC	G↓AATTC	CTGC↓AG	G↓GATCC	↓GATC

(1)获取小牛胃黏膜的单细胞需要将剪碎的小牛胃黏膜用____处理；对获得的单细胞进行培养时需要定期更换培养液，目的是____。从培养的牛胃黏膜细胞中提取____，再逆转录形成DNA，再以此DNA为模板利用PCR技术获得凝乳酶基因。
(2)将图2中的凝乳酶基因与图1质粒构建基因表达载体时，最好选择____切割目的基因和质粒，并利用____（只写1种）连接酶进行连接。若将该基因表达载体导入受体细胞后，凝乳酶基因能稳定存在但不能表达，原因可能是____。
(3)若将凝乳酶基因导入酵母菌细胞，并利用发酵工程生产凝乳酶，进行该工程时，应先对含有凝乳酶基因的酵母菌进行____，再进行接种，发酵过程要严格控制____（写出1点）等发酵条件。

8 . 生物胺是一种存在于发酵食品中的含氮小分子有机化合物，是合成核酸、蛋白质、生物碱等的前体物质。人体自身合成的生物胺可促进正常生理活动，若通过食物摄入过量生物胺则会引起头疼、腹部痉挛、呕吐等不良反应，严重时可能危及生命。利用酶解法降解是减少发酵食品中生物胺含量、保障食品安全的有效方法之一。科研人员成功地筛选获得具有降解生物胺能力的多铜氧化酶（MCO）基因，并转入大肠杆菌中实现了高效表达。请回答下列问题：
(1)基因工程常用大肠杆菌作为受体细胞，一般需用____处理大肠杆菌细胞，使之处于____，以便将重组质粒导入其中。
(2)为构建重组载体，需先设计引物，通过PCR特异性扩增MCO基因。用于扩增MCO基因的两种引物需分别与两条模板链____（填“3′”或“5′”）端的碱基序列互补配对。为使PCR产物能被限制酶切割，需在引物的____（填“3′”或“5′”）端添加相应的限制酶识别序列。由图可知在MCO基因的两端应添加____和____两种不同限制酶的识别序列。这样就方便后面用这两种限制酶进行酶切，相比用同一种酶，该方法的优点在于____（答出2点）。经过这两种酶酶切的MCO基因和载体连接时，应选用____（填“E.coli DNA”或“T4 DNA”）连接酶。

   

名称	识别序列及切割位点	名称	识别序列及切割位点
Hind Ⅲ		EcoR I
Pvit Ⅱ		Pst I
Kpn I		BamH I

(3)若要通过实验检测MCO基因能否在大肠杆菌中翻译，具体的检测方法是____。

9 . 微滴式数字PCR（ddPCR）是一种检测RNA病毒等病原体的手段，原理如图所示，分为样本分散、PCR扩增、检测三个过程。下列有关叙述错误的是（       ）

A．RNA病毒样本在进行ddPCR检测时，需要先进行逆转录处理

B．多孔板中如果某个孔没有核酸分子，就不需要加入引物和Taq酶

C．检测时只要有一个孔出现阳性结果，就可以说明原样本中有病毒核酸

D．相对于传统手段，ddPCR更加灵敏，更容易检测出微量病毒

10 . THP9基因是野生玉米中控制高蛋白含量的优良基因，研究者利用基因工程技术将THP9基因转到玉米细胞内，从而获得转基因高蛋白玉米新品种。已知图中THP9基因转录的方向为从左往右。下列相关叙述正确的是（       ）

EcoRⅠ	BamHⅠ	KpnⅠ	MfeⅠ	HindⅢ

A．若采用PCR技术对一个THP9基因进行扩增，则第n代复制共需要引物2n-1个

B．构建基因表达载体时，用Mfe Ⅰ、Hind Ⅲ切割质粒，用EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ切割目的基因

C．利用PCR技术获取THP9基因时应选择引物1和引物4

D．PCR过程中用到了缓冲液，缓冲液中一般要添加Mg2+用于激活RNA聚合酶