1 . 基因工程是在生物化学、分子生物学和微生物学等学科的基础上发展起来的。下列哪些成果为基因工程的诞生奠定了基础（       ）
①科学家完成人类基因组的测序工作
②穆里斯等人发明快速扩增目的基因的PCR技术
③科学家证明质粒可将外源基因导入受体细胞并成功表达
④肺炎链球菌转化实验证明了遗传物质DNA可在同种生物不同个体间转移

A．①②

B．②③

C．①④

D．③④

2 . 下列关于基因工程基本工具的叙述，正确的是（       ）

A．限制酶能特异性地识别6个核苷酸序列

B．限制酶切割DNA分子一次可断开2个磷酸二酯键，产生2个游离的磷酸基团

C．有些DNA连接酶既能连接双链DNA片段互补的黏性末端，又能连接双链DNA片段的平末端，从而恢复被限制酶切开的氢键

D．用做分子运输车的质粒常有特殊的抗生素合成基因，便于重组DNA分子的筛选

3 . 7岁的哈桑患有交界型大疱性表皮松解症(JEB)，该病的病因是编码层黏连蛋白332的基因之一LAMB3发生了突变，导致表皮和真皮很容易脱离，进而产生水疱和糜烂，并伴有多种炎症威胁其生命。科学家实施了表皮干细胞基因疗法拯救了哈桑，治疗过程如下图：

(1)用改造过的病毒作运载体，有利于提高基因治疗成功率，下列可能的原因有_____(填字母)。
a.感染率高        b.对宿主细胞没有毒性        c.更易于感染处在分裂状态的细胞
(2)改造病毒在宿主细胞中能够合成某种“整合酶”，它能切开DNA双链的特定区域，便于目的基因与宿主DNA整合，由此可推测整合酶的作用类似于基因工程工具中的________。感染过的细胞的后代就有了正确的LAMB3基因，经过___________过程可以制造正常的层黏连蛋白332。
(3)图中过程③所涉及的技术属于生物工程中的____________。过程③需要在_____（设备）中进行。三种克隆都能培养成单层细胞，因为细胞分裂生长具有______________的特点。
(4)干细胞移植和基因治疗最大的风险就在于导致癌症。原因是载体病毒会把基因______插入基因组里，如果破坏了一些____________________，那么就有可能导致细胞癌变。
(5)当患者全身的皮肤细胞大概更新过4轮时，科学家发现，绝大部分移植的细胞存活了，却没有复制留下自己的后代。由此可推测，人体皮肤是________________(选填“所有细胞”或“少数皮肤干细胞”) 负责复制、分化、更新所有的皮肤。

4 . 若某种限制性核酸内切酶的识别序列是CCTAGG，它在C和C之间切断线性DNA。下图表示用该酶处理某基因后产生的片段。下列有关叙述正确的是（       ）

A．该正常基因中有3个CCTAGG序列

B．产生的DNA片段可用DNA聚合酶连接起来

C．用该酶处理得到图示基因片段要水解3个磷酸二酯键

D．若该基因某处有一个CCTACG突变为CCTAGG，用该酶处理后将产生5个片段

5 . 细胞中NF-κB蛋白的活性水平与肿瘤的发展呈正相关。为了高效地筛选出以NF-κB为靶点的抗肿瘤药物，研究人员利用基因工程构建了NF-κB-GFP的报告基因载体。具体原理为把已确定的NF-κB基因与报告基因GFP（其表达产物荧光蛋白可被实时检测）正确连接，使报告基因能与NF-κB基因同步表达，其工作模式见下图1。回答下列问题：

(1)构建NF-κB-GFP报告基因载体时，首先利用PCR技术扩增GFP基因序列，能否准确扩增出GFP基因的关键是__________。降温至50℃时，PCR反应体系中完成的反应主要是__________。
(2)GFP基因所在DNA分子上有3种限制酶（BamHI、EcoRI、HindⅢ）的识别序列；如下图2所示。限制酶BamHI在碱基G和G之间进行切割，画出其切割后产生的黏性末端（体现出限制酶的切割位点）__________。应使用限制酶__________对GFP基因所在的DNA进行切割，再连接到质粒上，该方法的优点是__________。最后得到NF-κB-GFP报告基因载体，该载体中GFP基因和NF-κB基因表达时使用的启动子__________（填“相同”或“不同”）。

(3)将NF-κB-GFP报告基因载体导入肿瘤细胞常用的方法是__________。体外培养肿瘤细胞需要提供__________（答出2点即可）条件；再放入气体具体组成成分为___________的培养箱中进行培养。
(4)将导入成功的肿瘤细胞置于含待检测抗肿瘤药物的培养基中培养一段时间，并检测细胞中GFP蛋白表达量的变化。若药物抗肿瘤效果显著，可观测到的现象为__________。

6 . CRISPR/Cas9系统主要由向导RNA（SgRNA）和Cas9蛋白两部分组成，SgRNA可引导Cas9蛋白到特定基因位点进行切割，其机制如图所示。下列叙述正确的是（       ）

   

A．Cas9蛋白相当于限制酶，能作用于脱氧核糖和碱基之间的磷酸二酯键

B．对不同目标DNA进行编辑时，可使用相同的Cas9蛋白和SgRNA进行基因编辑

C．SgRNA可以在逆转录酶的催化下合成，合成的原料包括四种核糖核苷酸

D．其他DNA序列含有与SgRNA互补配对的序列，造成SgRNA错误结合而脱靶

7 . 下图为获得抗虫棉的技术流程。有关叙述正确的是（       ）

   

A．形成转基因抗虫植株的变异类型属于染色体变异

B．卡那霉素抗性基因中应含有相关限制酶的识别位点

C．重组质粒构建过程中需要限制酶和DNA连接酶

D．转基因抗虫棉有性生殖的后代都能表现出抗虫性状

8 . 下表是几种限制酶识别序列及切制位点，图1为某质粒的示意图，图2是一段含有目的基因的DNA片段。请回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	EcoRⅠ
识别序列及切割位点	G↓GATCC CCTAG↑G	T↓GATCA ACTAG↑T	↓GATC CTAG↑	G↓AATTC CTTAA↑G

(1)质粒的化学本质是______。
(2)下列有关限制酶的叙述正确的是      

A．限制酶也能切割烟草花叶病毒的遗传物质

B．限制酶的活性受温度、pH的影响

C．一种限制酶切割不同的双链DNA分子能产生相同的末端

D．限制酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率越小

(3)为了使目的基因定向拼接到质粒中，应选用限制酶______和______同时切割图中质粒和目的基因，酶切后的DNA片段之间可以通过______酶的作用连接起来。
(4)图中的四环素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因属于基因工程中的______。筛选的含有重组质粒的大肠杆菌对四环紧和氨苄青霉素的抗性表现应该是______
A对四环素和氨苄青霉素均不具有抗性       
B.对四环有抗性、对氨苄青霉素不具有抗性
C.对四环素和氨苄青霉素均具有抗性       
D.对四环素不具有抗性、氨苄青霉素有抗性
(5)BamHⅠ酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接部位的6个碱基对序列为：______

(6)图1所示的质粒，被限制酶Sau3AI充分切割，可获得______种大小不同的DNA片段。

9 . β－葡萄糖苷酶（BglB）是工业生产中降解纤维素的关键酶，研究人员利用基因工程技术，将编码BglB的基因转移到了大肠杆菌的细胞中并使之表达。下图1～3分别表示Bgl Ⅱ、BamHI两种限制酶的识别序列和酶切位点，及其在质粒和含凝乳酶基因的外源DNA片段上的切割位点。其中，质粒含有leu2基因可用于合成亮氨酸，目的基因含有卡那霉素抗性基因KanR。bp为碱基对。回答下列问题：

(1)在基因工程中，质粒和目的基因构建重组质粒时必需的工具酶有______。
(2)根据图1分别写出Bgl Ⅱ与BamHⅠ酶切后形成的黏性末端为______、______。
(3)Bgl Ⅱ酶切后的质粒与BamHⅠ酶切后的目的基因能够连接的原因是______。
(4)将连接后的产物转入某种大肠杆菌，该细菌对卡那霉素敏感，且不能在缺乏亮氨酸的培养基中培养。若使用Bgl Ⅱ处理重组质粒（目的基因和质粒连接后形成的），可以得到长度为______的_____（填“线性”或“环状”）的DNA。若要筛选含有重组质粒的大肠杆菌，应选择______的培养基进行培养。
(5)大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为______。

10 . 下列相关叙述，哪一项不是基因工程中的载体所必需具备的特征（       ）

A．具有多种限制酶切割位点，以便目的基因的插入

B．能在受体细胞中稳定保存，使目的基因能在受体细胞中稳定保存

C．对受体细胞无害，且易从供体细胞分离出来

D．必需要有青霉素抗性基团，以便对重组DNA进行筛选