【推荐3】聚乳酸（PLA）具有良好的生物可降解性与相容性，其机械性能及物理性能良好，被认为是传统石化来源类塑料的环保替代品。PLA可以以三种立体结构存在：聚L—乳酸（PLLA）、聚D—乳酸（PDLA）和聚DL—乳酸（PDLLA），它们分别是L—乳酸、D—乳酸和DL-乳酸的聚合物。几乎所有的乳酸菌都同时具有L—乳酸脱氢酶（L—LDH）和D—乳酸脱氢酶（D—LDH）。
(1)已知乳酸芽孢杆菌可生产纯度相对较高的D—乳酸，其在无氧情况下，能将葡萄糖分解为乳酸，反应简式为______________________________。
(2)为得到足够浓度的乳酸芽孢杆菌，研究者对其进行富集培养，并且每间隔一段时间采用________________法进行活菌计数。某次实验时，甲、乙两组研究者分别吸取经稀释10倍的菌液0.1mL进行涂布后计数，甲组统计的菌落数分别为45、40、37，乙组统计的菌落数分别为280、350、295，请计算出此时培养液中乳酸芽孢杆菌浓度为________（保留小数点后一位）个/mL。
(3)为增加D—乳酸的产量，科学家对乳酸芽孢杆菌的D—LDH基因特定位点进行了定点突变，以增强D-LDH的活性。重叠延伸PCR技术是常见的定点突变手段之一，其过程如下图所示：
      
①科学家从乳酸芽孢杆菌中获取D—LDH基因并定向突变后，构建表达载体需要用到的工具酶是________。将构建好的表达载体导入乳酸芽孢杆菌细胞中，需要用________处理乳酸芽孢杆菌细胞。
②在第一阶段，引物2和引物3不可置于同一个反应体系中同时进行PCR扩增，原因是_____________________。