【推荐2】巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor， MIF)是一种在进化中高度保守的蛋白质，具有重要的生物学功能。研究发现，MIF在哺乳类动物生殖系统各器官和母胎界面均有表达，参与了生殖过程的多个环节，包括胚胎早期发育、胚胎植入、 胎盘发育和妊娠维持。为进一步阐明MIF蛋白在哺乳动物早期胚胎发育中的作用提供理论支持，通过现代生物技术对MIF在牛胚胎早期发育中的表达模式和功能进行初探。回答下 列问题：
(1)根据研究目标，要获得特定的牛胚胎细胞，先采用___的方法大量收集牛卵母细胞，牛卵母细胞培养到___（填时期）再与解冻并___处理的精子结合，完成体外受精。
(2)体外受精得到的受精卵需要在___中保温培养。所要维持的气体条件中包含5%的CO₂，CO₂的作用是___。进行早期胚胎的体外培养时，培养液中除了含有各种有机盐类、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还要添加___和__。
(3)为探究MIF对牛胚胎早期发育率的影响，采用显微注射MIF抗体的方法来干扰MIF蛋白的表达。研究人员采用___技术得到特异性强、纯度高的MIF单克隆抗体。该技术需要一些特殊的诱导因素处理，如___、___和电流刺激等。
(4)用RT-PCR技术（将RNA的逆转录和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术）探究MIF在胚胎早期发育过程中的表达模式。完善实验思路：
I．提取不同发育时期牛胚胎中mRNA，逆转录成cDNA作为PCR扩增的___。
Ⅱ．在PCR反应体系中加入___、___，以___作为原料，开始扩增。
Ⅲ．PCR扩增后通过仪器观察，初步判断MIF表达量的变化。