半乳糖血症是单基因遗传病,科学家将正常基因D导入该病患者的细胞,以治疗该病。图甲为A、B、C三种质粒,图乙为含有目的基因D的DNA片段,图丙为重组载体的示意图。Ap为氨苄青霉素抗性基因,Tc为四环素抗性基因,lacZ为蓝色显色基因,其表达产物可以将无色化合物X-gal转化成蓝色物质,使菌落呈蓝色,EcoRI(0.6Kb)、PvuI(0.8Kb)为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离。请回答:_________________ 。图甲中三种质粒适宜作为运载体的是质粒___________ ,与另外两种质粒相比,其作为载体的优点是__________ 。
(2)为了提高实验成功率,需要通过_________ 技术扩增目的基因,以获得目的基因的大量拷贝,该技术原理为_____________ 。
(3)获取目的基因D时应选择乙图中的___________ 对其所在的DNA进行切割。将目的基因D和甲图中相应质粒连接后,得到图丙中三种方式。为选出正向连接的重组质粒,使用___________ 对质粒完全酶切后,进行电泳分析。若是正向连接载体,电泳图谱中出现长度为_________ Kb和5.5 Kb两条带。
(2)为了提高实验成功率,需要通过
(3)获取目的基因D时应选择乙图中的
更新时间:2024-05-27 09:14:44
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【知识点】 基因工程的操作程序综合
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名校
【推荐1】科研人员探究S蛋白在水稻减数分裂过程中的作用。
(1)减数分裂Ⅰ的主要特征是:________ (写出一条)。
(2)为确定S蛋白的作用位点,科研人员将红色荧光标记的S蛋白抗体与绿色荧光标记的着丝粒特异性蛋白抗体加入到野生型水稻花粉母细胞样品中,若荧光显微镜下观察到红色荧光位点与绿色荧光位点________ ,则表明S蛋白作用于染色体的着丝粒处。
(3)为探究S蛋白的作用,研究人员构建使S蛋白基因沉默的转基因水稻。
①提取野生型水稻的总RNA,获取大量S基因(目的基因)的方法为:通过________ 过程获得cDNA,设计与________ 的引物,进而通过PCR扩增S基因。
②将S基因反向接入质粒,构建表达载体,利用________ 法将其导入受体细胞,获得转基因水稻植株。
③利用________ 技术检测水稻体内S蛋白表达情况,判断图1中植株B为转基因水稻,植株B的S蛋白表达量低的原因是S基因反向接入后,________ ,导致S蛋白条带变暗。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2021/11/11/2849243046010880/2849891937648640/STEM/7742f4a35a304bb3adbd6b95a9c2c2dc.png?resizew=548)
(4)对转基因水稻和野生型水稻减数分裂Ⅱ后期的染色体行为进行观察,科研人员发现转基因水稻在减数分裂Ⅱ后期姐妹染色单体提前分离,染色体散乱排列(如图2),据此推测S蛋白的作用是________ ,从而保证细胞两极的两套染色体形态和数目完全相同。
(1)减数分裂Ⅰ的主要特征是:
(2)为确定S蛋白的作用位点,科研人员将红色荧光标记的S蛋白抗体与绿色荧光标记的着丝粒特异性蛋白抗体加入到野生型水稻花粉母细胞样品中,若荧光显微镜下观察到红色荧光位点与绿色荧光位点
(3)为探究S蛋白的作用,研究人员构建使S蛋白基因沉默的转基因水稻。
①提取野生型水稻的总RNA,获取大量S基因(目的基因)的方法为:通过
②将S基因反向接入质粒,构建表达载体,利用
③利用
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2021/11/11/2849243046010880/2849891937648640/STEM/7742f4a35a304bb3adbd6b95a9c2c2dc.png?resizew=548)
(4)对转基因水稻和野生型水稻减数分裂Ⅱ后期的染色体行为进行观察,科研人员发现转基因水稻在减数分裂Ⅱ后期姐妹染色单体提前分离,染色体散乱排列(如图2),据此推测S蛋白的作用是
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【推荐2】请回答下列有关基因工程及其应用的问题:
(1)多种限制酶、__________________ 及逆转录酶的发现为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。
(2)基因工程的核心步骤是___________________________ ;重组Ti质粒载体结构中T-DNA的作用是_________ 。
(3)科学家设法使烟草细胞形成微创伤,受伤部位细胞产生的乙酰丁香酮可吸引农杆菌向受伤部位集中,这时农杆菌可携带某种目的基因进入烟草细胞。获得的转基因烟草细胞通过___________ 技术最终获得转基因烟草,检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因的方法是________________ 。
(4)利用_____________ 处理植物体细胞可得到原生质体,将目的基因导入原生质体的方法中,除题(3)所述方法外,还可采用______________________ 。
(1)多种限制酶、
(2)基因工程的核心步骤是
(3)科学家设法使烟草细胞形成微创伤,受伤部位细胞产生的乙酰丁香酮可吸引农杆菌向受伤部位集中,这时农杆菌可携带某种目的基因进入烟草细胞。获得的转基因烟草细胞通过
(4)利用
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【推荐3】请根据材料回答下列问题:
材料一:S蛋白是新冠病毒感染机体的关键组分,也是研制新冠疫苗的关键起点。可以利用基因工程生产基因工程疫苗,制备途径如下:S蛋白基因→基因表达载体→大肠杆菌→S蛋白→人体。
材料二:英国科学家米尔斯坦和柯勒提出单克隆抗体制备技术的实验方案,即把-种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行诱导融合,使融合细胞既能大量增殖,又能产生足够数量的特定抗体。
(1)在材料一中,s蛋白基因的体外扩增常采用_____ 技术,扩增的前提是_____ ,以便合成引物。构建的基因表达载体中应含有启动子,启动子是_____ 。
(2)在材料二中,涉及的生物技术有动物细胞融合和_____ ,诱导细胞融合时常用的化学试剂是_____ ,融合细胞要经过两次筛选、克隆化培养和_____ ,以得到足够数量的符合要求的杂交瘤细胞。材料二中选择骨髓瘤细胞进行融合的原因是_____ 。
材料一:S蛋白是新冠病毒感染机体的关键组分,也是研制新冠疫苗的关键起点。可以利用基因工程生产基因工程疫苗,制备途径如下:S蛋白基因→基因表达载体→大肠杆菌→S蛋白→人体。
材料二:英国科学家米尔斯坦和柯勒提出单克隆抗体制备技术的实验方案,即把-种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行诱导融合,使融合细胞既能大量增殖,又能产生足够数量的特定抗体。
(1)在材料一中,s蛋白基因的体外扩增常采用
(2)在材料二中,涉及的生物技术有动物细胞融合和
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