组卷网 > 高中生物综合库 > 生物技术与工程 > 细胞工程 > 动物细胞的培养和核移植技术 > 动物细胞培养技术
题型:非选择题-解答题 难度:0.85 引用次数:100 题号:22952927
某小组为构建含有双标记基因的通用型动物转基因载体(质粒b),将1种标记基因(Neo基因)插入到质粒a中。但Neo基因两端无相应的限制酶识别序列,因此需要先设计一对引物,让Neo基因的两端分别增加相应的序列,然后通过PCR扩增得到DNA序列1,再经过酶切和连接后得到质粒b。构建动物转基因载体的过程如下图所示。(其中扩增DNA序列1的引物为:P1 5'-TATGTCGAC……3';P2 5'-TATATCGAT……3'。限制酶及其识别序列为Hind Ⅲ: AAGCTT、Sal Ⅰ:GTCGAC、ClaⅠ: ATCGAT NheⅠ : GCTGGC)回答下列问题:   

(1)根据引物分析,应使用______________(填限制酶名称)对DNA序列1和质粒a进行切割,经_______酶连接后得到质粒 b。
(2)含有Neo基因的细胞对G418 (一种抗生素)具有抗性,可用含G418的培养基筛选转基因细胞。为检测质粒b是否成功插入了Neo基因,首先将质粒b转染羊成纤维细胞,然后对细胞进行抗性检测。
①培养成纤维细胞的过程中,需要用_______________处理贴壁细胞,使之分散成单个细胞,离心收集后再进行传代培养。
②将转染质粒b的成纤维细胞分为两组(T1、T2),CTR组为未转染质粒b的成纤维细胞,进行细胞培养,结果如下表,T2组的细胞生长情况为________________时说明质粒b成功插入了Neo基因,理由是___________________________________________________________

组别

T1

T2

CTR

培养基

不含G418

含G418

含G418

细胞生长情况

未死亡

全部死亡

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