某小组为构建含有双标记基因的通用型动物转基因载体(质粒b),将1种标记基因(Neo基因)插入到质粒a中。但Neo基因两端无相应的限制酶识别序列,因此需要先设计一对引物,让Neo基因的两端分别增加相应的序列,然后通过PCR扩增得到DNA序列1,再经过酶切和连接后得到质粒b。构建动物转基因载体的过程如下图所示。(其中扩增DNA序列1的引物为:P1 5'-TATGTCGAC……3';P2 5'-TATATCGAT……3'。限制酶及其识别序列为Hind Ⅲ: A↓AGCTT、Sal Ⅰ:G↓TCGAC、ClaⅠ: AT↓CGAT NheⅠ : G↓CTGGC)回答下列问题:
(1)根据引物分析,应使用______________ (填限制酶名称)对DNA序列1和质粒a进行切割,经_______ 酶连接后得到质粒 b。
(2)含有Neo基因的细胞对G418 (一种抗生素)具有抗性,可用含G418的培养基筛选转基因细胞。为检测质粒b是否成功插入了Neo基因,首先将质粒b转染羊成纤维细胞,然后对细胞进行抗性检测。
①培养成纤维细胞的过程中,需要用_______________ 处理贴壁细胞,使之分散成单个细胞,离心收集后再进行传代培养。
②将转染质粒b的成纤维细胞分为两组(T1、T2),CTR组为未转染质粒b的成纤维细胞,进行细胞培养,结果如下表,T2组的细胞生长情况为________________ 时说明质粒b成功插入了Neo基因,理由是___________________________________________________________ 。
(1)根据引物分析,应使用
(2)含有Neo基因的细胞对G418 (一种抗生素)具有抗性,可用含G418的培养基筛选转基因细胞。为检测质粒b是否成功插入了Neo基因,首先将质粒b转染羊成纤维细胞,然后对细胞进行抗性检测。
①培养成纤维细胞的过程中,需要用
②将转染质粒b的成纤维细胞分为两组(T1、T2),CTR组为未转染质粒b的成纤维细胞,进行细胞培养,结果如下表,T2组的细胞生长情况为
组别 | T1 | T2 | CTR |
培养基 | 不含G418 | 含G418 | 含G418 |
细胞生长情况 | 未死亡 | ? | 全部死亡 |
更新时间:2024-05-25 23:21:54
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【推荐1】人体血清白蛋白在肝脏中合成,是血浆中含量最丰富的蛋白质,在临床上有着广泛的用途。如图为利用乳腺生物反应器和工程菌生产人血清白蛋白的操作流程。请回答下列问题:
(1)①过程中,将人血清白蛋白基因导入绵羊受精卵和大肠杆菌所用的载体____________________ (填“完全相同”“不完全相同”或“完全不相同”)。除血清白蛋白基因外,图中的基因表达载体还必须含有__________________________________ (至少答出3个结构名称)。
(2)进行④操作之前,需要对早期胚胎进行性别鉴定,常选取取囊胚期的__________ 细胞做DNA分析。对挑选出的雌性胚胎还可以采用__________ 技术提高胚胎利用率。上图中涉及的胚胎工程技术有_______
(3)利用①⑥过程生产人血清白蛋白时,常用反转录法获取目的基因,请写出用此法获取人血清白蛋白基因的操作流程:_________________________________ 。由此获得的蛋白B与蛋白A活性是否相同?请作出判断并说明理由:__________ ,_____________________ 。
(1)①过程中,将人血清白蛋白基因导入绵羊受精卵和大肠杆菌所用的载体
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【推荐2】下图为动物细胞培养过程中,动物细胞增殖情况的变化曲线(图中B、D两点表示经筛选后继续培养)。据图回答下列问题。
(1)AB段可能发生了______ 现象,常需要用____ 酶处理使组织细胞分散开来。动物细胞培养和植物组织培养过程中,就细胞增殖、分化来说,动植物细胞都要进行细胞增殖,不同的是植物细胞还要进行______ 。
(2)为制备单克隆抗体,需将特定的抗原注射到小鼠体内, 以获取_____ 细胞,同时可选取图中______ 点的细胞与该细胞融合形成杂交细胞。
(1)AB段可能发生了
(2)为制备单克隆抗体,需将特定的抗原注射到小鼠体内, 以获取
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【推荐3】抗体是一种由浆细胞分泌,被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的一类蛋白质。下列是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图。回答下列问题:
(1)在制备抗体1的过程中,先给小鼠注射一种纯化的抗原蛋白,一段时间后,从小鼠的___________ (填“骨髓”或“脾脏”)中获取B淋巴细胞,将获得的细胞与___________ 细胞融合,再经过筛选、检测,最终可获得所需的Y细胞。此过程中需要多次给小鼠注射抗原蛋白的原因是__________ 。
(2)过程①的原理是__________ ,过程②在动物细胞培养时,培养箱充入CO2的主要作用是__________ 。
(3)导入到大肠杆菌细胞中的鼠基因能够表达出相应的蛋白质,原因是__________ 。
(4)将V1基因与质粒经某种限制酶切割连接并成功导入大肠杆菌细胞后,发现仍有部分细胞不能表达出抗体2,最可能的原因是___________ 。为避免上述情况的发生,最好用__________ (填“一”或“两”)种限制酶切割V1基因和质粒。
(1)在制备抗体1的过程中,先给小鼠注射一种纯化的抗原蛋白,一段时间后,从小鼠的
(2)过程①的原理是
(3)导入到大肠杆菌细胞中的鼠基因能够表达出相应的蛋白质,原因是
(4)将V1基因与质粒经某种限制酶切割连接并成功导入大肠杆菌细胞后,发现仍有部分细胞不能表达出抗体2,最可能的原因是
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【推荐1】埃博拉病毒(EBO)呈纤维状,EBO衣壳外有包膜,包膜上有5种蛋白棘突(VP系列蛋白和GP蛋白),其中GP蛋白最为关键,能被宿主细胞强烈识别。请回答下列问题:
(1)基因疫苗指的是DNA疫苗,要获得编码GP蛋白抗原的基因疫苗,首先要提取出病原体的RNA,并以RNA为模板通过___________ 法合成DNA。
(2)以GP蛋白作为疫苗比基因疫苗更安全,其原因是GP蛋白自身没有感染力,但保留有________ 的特性。为了从牛分泌的乳汁中生产GP蛋白,在基因导入牛的受体细胞前,基因的首端必须含有使其特异性表达的________ ,才能驱动转录过程,这种通过分泌乳汁来生产所需要的药品的转基因动物称为________________ 。转基因牛是否能成功表达,可以通过________ 技术从分子水平进行检测。
(3)为了获得纯净的针对EBO的单一抗体,科研人员利用经EBO免疫后小鼠的________ 与鼠的骨髓瘤细胞进行融合,需要通过两次筛选后才能得到所需要的细胞,其中第二次筛选的目的是为了得到能够产生________ 细胞,通过这种方法获得的抗体,其特点是________ ,可以用此抗体与药物制成“生物导弹”,抗击EBO。
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【推荐2】血管内皮生长因子(VEGF)是在肿瘤细胞中通过表达,分泌到血液中的蛋白类生长因子,促进肿瘤血管的生成,进而为肿瘤组织生长提供足够的氧气和营养物质。研究人员利用pVAX1质粒和VEGF基因构建了pVAX1—VEGF的DNA疫苗,为肿瘤免疫治疗奠定基础。回答下列问题:
(1)首先从人的肺癌细胞株A549中提取mRNA,通过____________________ 法获得VEGF基因。
(2)对获取的VEGF基因进行PCR扩增前,需要根据VEGF基因序列设计两种引物,设计两种引物的原因是____________________________________________ 。为便于VEGF基因与质粒pVAX1连接,引物中要增加适当的________________________________________ 。
(3)构建的pVAX1—VEGF上应含有特定的_____________________ (填“复制原点”“启动子”或“标记基因”),它能被受体细胞的______________________ 所识别,以便于催化转录过程。
(4)DNA疫苗制备简单,价格低廉,且免疫强度高,应答持久,但同时也可能存在着不可忽视的潜在危险。你认为可能存在的潜在危险是_________________________
(1)首先从人的肺癌细胞株A549中提取mRNA,通过
(2)对获取的VEGF基因进行PCR扩增前,需要根据VEGF基因序列设计两种引物,设计两种引物的原因是
(3)构建的pVAX1—VEGF上应含有特定的
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【推荐3】1997年,科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组,并且在大肠杆菌中表达成功。请据图完成下列问题:
(1)此图表示的是采取________ 合成基因的方法获取________ 基因的过程。
(2)图中①DNA是以________ 为模板,形成单链DNA,在酶的作用下合成双链DNA,从而获得了所需要的基因。
(3)图中③代表________ ,它往往含________ 基因,以便对目的基因的检测。
(4)图中④表示________ ,为使此过程顺利进行,一般需将大肠杆菌用氯化钙处理,以增大其细胞壁的________ ,使得细胞成为感受态细胞。
(5)图中⑤表示目的基因随大肠杆菌的繁殖而进行增殖,此基因在大肠杆菌内表达的标志是________________ 。
(1)此图表示的是采取
(2)图中①DNA是以
(3)图中③代表
(4)图中④表示
(5)图中⑤表示目的基因随大肠杆菌的繁殖而进行增殖,此基因在大肠杆菌内表达的标志是
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