【推荐1】土壤农杆菌能将自身Ti质粒的T-DNA整合到植物染色体DNA上，诱发植物形成肿瘤。T-DNA中含有植物生长素合成酶基因（S）和细胞分裂素合成酶基因（R），如图1所示，它们的表达与否能影响相应植物激素的含量，进而调节肿瘤组织的生长与分化。基因工程常用Ti质粒作为运载体，图2表示抗虫棉培育中使用的三种限制酶A、B、C的识别序列以及Ti质粒上限制酶切割位点的分布，抗虫基因内部不含切割位点，两侧标明序列为切割区域。请分析回答下列问题：

(1)酶C切割DNA后形成的黏性末端是__________。
(2)据图2分析，切取抗虫基因时，使用限制酶______，切割Ti质粒时，使用限制酶________。
(3)为了获得重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合并加入________酶。成功构建的重组质粒中含有限制酶A的识别位点__________个，若用酶C处理该重组质粒，将得到________个DNA片段。
(4)若抗虫基因插入的位置在R基因内部，筛选出________植株即是成功导入抗虫基因的棉花植株。

【推荐2】回答基因工程和生态工程有关问题
（1）肺炎双球菌转化实验证明DNA是遗传物质，这一工作为基因工程理论的建立提供的启示是______。
（2）要通过基因工程生产白细胞介素-2，可以从人的______中提取的mRNA，通过逆转录法得到DNA构建基因文库，然后获得相应基因。要让目的基因在宿主细胞中表达不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是______（答出一点即可），用质粒为载体，宿主细胞一般选择______。
（3）如图为庭院生态工程中各成分的组成和相互关系的示意图，据图回答：

庭院生态工程通过发酵技术产生沼气为农户提供能源，与利用煤炭相比，突出的优点是______。进行经济效益分析时要计算对该庭院生态系统的投入和产出，系统的实际消费，就是来自______，就是该庭院生态系统的投入；系统的有效贡献，就是这个庭院生态系统对______，就是该庭院生态系统的总产出。

【推荐3】下图1表示利用生物技术制备抗 X的单克隆抗体的过程；图2表示培育优质奶牛的过程。请据图回答下列问题：

（1）图 1中注射到小鼠体内的物质是_。融合后的细胞经过多次筛选才能获得理想细胞，此类细胞的特点是_。该过程所用的生物技术有_。
（2）重组细胞①和②中，_（填“①”或“②”）实现了基因的重组。
（3）若将早期胚胎分离成若干个胚胎细胞，让其分别发育成小牛，这些小牛的基因型_（填“相同”或“不同”），此项技术称为_。

【推荐1】近年来，生物柴油作为新型能源已经成为世界上应用最广泛、发展迅猛的可再生能源之一。研究人员利用基因工程的方法将油料作物紫苏DGAT1基因导入四尾栅藻（操作过程如图），获得转基因的产油四尾栅藻，并利用地热废水培养，不仅能生产生物柴油，还能治理地热废水。请回答：

注：LacZ基因可使细菌利用加入培养基的物质X-gal，从而使菌落显现出蓝色。若无该基因或者该基因被破坏，则菌落呈白色）
(1)将经过处理的连接产物导入到经CaCl₂处理后的处于感受态的大肠杆菌细胞，并接种到添加_______       的培养基上培养，一段时间后，出现颜色为________和________的菌落分别由含有质粒PMD19-DGAT1和质粒pMD19的大肠杆菌形成。
(2)如果DGAT1基因序列两端无限制酶酶切位点，由上图推测扩增DGAT1 基因时所用一对引物的一端需要分别加上____________________限制酶的识别序列以防止其出现白身环化等问题。
(3)研究人员利用地热废水培养转基因四尾栅藻并检测其油脂含量，结果如图。结果显示_______________。

（3）为检测转基因四尾栅藻对地热废水的去污能力，研究人员设计实验并得到相应实验结果如下表。

指标	总氮（mg／L）	总磷（mg／L）	氟化物（mg／L）
废水培养基	23.2	4.32	4.56
培养转基因四尾栅藻11天后	1.9	0.45	0.84

该实验不能说明转DGAT1基因显著提高了四尾栅藻的去污能力。请进一步完善实验设计
____________________________________________________________________________________________。

【推荐2】我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛，下图是利用基因工程方法生产重组人生长激素的示意图。图中质粒表示基因工程中经常选用的载体—pBR322质粒，Amp^r表示青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因。根据上图回答下列问题（限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）：

（1）过程②必需的酶是_____，过程④必需的酶是_____。⑤过程中为提高成功率，常用___________溶液处理大肠杆菌。
（2）如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对质粒pBR322进行切割，用一种酶、两种酶和三种酶分别切割时，则形成的DNA片段共_____种，其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段的比例是_____。
（3）如果只用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌（不含Amp^r、Tet^r抗性质粒）先接种到甲培养基上，形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落，分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。接种到甲培养基上的目的是筛选____的大肠杆菌，含有目的基因的大肠杆菌在乙、丙培养基上的存活状态分别是_____，____。

【推荐3】2020年10月7日，瑞典皇家科学院已决定将2020年诺贝尔化学奖授予德国马克斯·普朗克病原学研究所的Emmanuelle Charpentier博士以及美国加州大学伯克利分校的Jennifer A． Doudna博士，以表彰她们在基因组编辑领域的贡献。在人工设计的条件下，通过sgRNA与基因组靶序列的特异性结合，引导Cas9蛋白“切割”基因组DNA (如卜图所示)。请回答下列问题。

(1)sgRNA与基因组靶序列可以特异性结合的原因是___________，Cas9核酸酶可以在sgRNA的引导下打开目标基因中的_______键，使得基因组DNA断裂。在_____酶的作用下，断裂的DNA可重新拼接。
(2)有研究者利用该技术，敲除了大鼠胰岛素受体底物1 (Irsl)基因，获得了糖尿病模型动物。流程如下：
根据已知Irs1基因的______， 设计两种sgRNA；构建含有两种sgRNA基因和______基因的表达载体；利用__________法，将上述基因的体外表达产物RNA，导入大鼠的_____(细胞)。
(3)提取转基因大鼠DNA，用PCR的方法检测Irs1编辑情况，结果如下图。其中WT为_____大鼠，由图可知2号大鼠比野生型大鼠的PCR产物短95bp，研究者据此确定其为阳性结果，即Irsl 被敲除失活，因为____________对应序列在Irsl基因上的位置相距95bp。

（4）2号大鼠P与野生型WT大鼠杂交，提取后代DNA，用相同引物进行PCR，结果如上图。_________________属于杂交后代， 说明基因编辑结果______稳定遗传。

【推荐1】科研人员利用现代生物技术培育出双转基因奶牛新品种，以便通过乳腺生物反应器生产人乳铁蛋白肽（抗细菌）和人干扰素（抗病毒）。下图1为重组质粒，图2为培育流程。

（1）构建重组质粒时，若人干扰素基因的序列是已知的，则可以通过_________获得该基因，然后再利用_________技术进行扩增。
（2）据图可知，人干扰素基因与_________基因可同时转录。人乳铁蛋白肽基因能在转基因奶牛的乳腺细胞中表达，人干扰素基因则可在全身细胞表达，这与构建重组质粒时_________的选择不同有关。
（3）通常利用_________（方法）将重组质粒导入③，在导入前需用_________将②进行分散处理培养。
（4）④过程涉及到的现代生物技术有_________、胚胎体外培养等。
（5）在培育转基因奶牛⑦时，下列有关叙述正确的是_________
A. 需从表达人干扰素基因的人体细胞中获取目的基因
B. 获得的重组胚胎需要进行性别鉴定才能进行⑤过程
C. 奶牛⑥为一般品种，需进行同期发情处理并未经配种
D. 通常利用DNA分子杂交技术检测转基因奶牛培育是否成功

【推荐2】虫草中的超氧化物歧化酶(PSSOD)具有抗衰老作用。研究人员培育了能合成PSSOD的转基因酵母菌。请结合下图回答问题:
   
注::Hind Ⅲ和ApaLⅠ是两种限制酶,箭头表示酶的切割位点。
(1)将图中的重组DNA分子用:Hind Ⅲ和ApaLⅠ完全酶切后,可得到__________种DNA片段。图示的表达载体存在氨苄青霉素抗性基因,不能导入用于食品生产的酵母菌中,据图分析,可用__________切除该抗性基因的部分片段使其失效,再用DNA连接酶使表达载体重新连接起来。
(2)作为受体细胞的酵母菌缺失URA3基因,必须在含有尿嘧啶的培养基中才能存活,因此,图示表达载体上的URA3基因可作为__________,供鉴定和选择;为了筛选出成功导入表达载体的酵母菌,所使用的培养基__________(填“需要”或“不需要”)添加尿嘧啶。
(3)目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程,称为__________。

【推荐3】甜玉米与普通玉米相比，甜玉米中可溶性糖向淀粉的转化较慢，含可溶性糖量高，汁多质脆，富含多种维生素。为了使甜玉米更富有生产应用价值，科研人员通过转基因技术培育出了超量表达P蛋白转基因甜玉米。在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图所示。
说明：强启动子是一段有特殊结构的DNA片段；BamHI、HindⅢ、EcoRI、NotI、SacI代表不同的限制酶；T-DNA是农杆菌的Ti质粒上的DNA片段。

(1)为了特异性扩增P基因序列，可采用___________的方法，一般要加入的原料为___________。
(2)强启动子是一段有特殊结构的DNA片段，能被___________识别并结合，驱动基因的持续转录。
(3)构建能超量表达P基因的载体，需选用___________限制酶的组合和DNA连接酶。将重组Ti质粒转入农杆菌，需先将农杆菌用___________处理。
(4)将玉米愈伤组织经农杆菌液浸泡，超量表达P基因会随T-DNA___________，从而获得转基因植物细胞。继而进行植物组织培养，培养基中需加入___________进行筛选，筛选出的愈伤组织经___________过程形成丛芽，然后在___________（填激素名称）较多的培养基上形成根，最终获得多个玉米株系。发现某株系的P蛋白表达量较低，请对该现象作出合理的解释：______________________。