1 . 甘蓝型油菜是由白菜和甘蓝杂交后染色体数目加倍形成的异源四倍体，引入我国历史较短，其遗传基础狭隘。菘蓝（别名“板蓝根”）是传统中药材，具有广谱抗病毒特性。研究人员利用甘蓝型油菜（体细胞中染色体数为38）与菘蓝（体细胞中染色体数为14）进行体细胞杂交，培育抗病毒的甘蓝型油菜—菘蓝单体附加系，过程如图1：

(1)甘蓝型油菜与菘蓝的体细胞经__________处理后获得原生质体，再经诱导获得融合细胞。融合细胞接种到含有营养物质和_________的培养基上，经___________过程形成愈伤组织，进而发育形成完整的再生植株F₁。植物体细胞杂交技术依据的生物学原理有：__________________。（答出两个）
(2)将F₁与甘蓝型油菜回交，获得BC₁，其染色体组成为____________（只用字母表示）。用BC₁与甘蓝型油菜再一次回交，得到的BC₂植株群体的染色体数目范围是_________。
(3)研究人员从BC₂筛选出7种只含有1条菘蓝染色体的甘蓝型油菜—菘蓝单体附加系（A、B、C、D、E、F、G）。为探究甘蓝型油菜—菘蓝单体附加系在抗新冠病毒（SARS-CoV-2）中的作用，研究人员用其提取物处理动物细胞，24h后感染新冠病毒，一段时间后收集病毒细胞培养液，通过免疫印记法检测病毒的含量，结果如图2：

注：GAPDH基因是一种管家基因，GAPDH蛋白的表达量在各个组织中相对稳定。
①免疫印记法可以检测蛋白质的表达情况。各组作为标准参考的GADPH蛋白表达量_________，可排除无关变量对实验结果的影响。
②实验结果表明：甘蓝型油菜—菘蓝单体附加系_________能有效抑制新冠病毒。

2 . 甘蓝型油菜引入我国历史较短，其遗传基础狭隘。菘蓝（别名“板蓝根”）是传统中药材，具有广谱抗病毒特性。研究人员利用甘蓝型油菜（体细胞中染色体数为38）与菘蓝（体细胞中染色体数为14）进行体细胞杂交，培育抗病毒的甘蓝型油菜-菘蓝单体附加系，过程如图1。

(1)甘蓝型油菜与菘蓝的体细胞经__________酶处理后获得原生质体，再经__________诱导获得融合细胞。融合细胞接种到含有营养物质和__________的培养基上，经__________过程形成愈伤组织，发育形成完整的再生植株F₁。
(2)将F₁与甘蓝型油菜回交，获得BC₁，其染色体组成为__________（只用字母表示）。用BC₁与甘蓝型油菜再一次回交，得到的BC₂植株群体的染色体数目范围是_______。
(3)研究人员从BC₂筛选出7种只含有1条菘蓝染色体的甘蓝型油菜-菘蓝单体附加系（A、B、C、D、E、F、G）。为探究甘蓝型油菜-菘蓝单体附加系在抗新冠病毒（SARS-CoV-2）中的作用，研究人员用其提取物处理动物细胞，24h后感染新冠病毒，一段时间后收集病毒细胞培养液，检测病毒的含量，结果如图2。

       

①作为标准参考的GADPH蛋白表达量__________，可排除无关变量对实验结果的影响。
②结果表明：__________。
③尝试说出建立甘蓝型油菜-菘蓝单体附加系在育种方面的意义：__________。（答出两个方面）
Ⅱ.母源因子是初级卵母细胞在减数分裂Ⅰ前期的后段开始产生并积累的mRNA和蛋白质，其对于调控动物早期胚胎的发育十分重要。为研究不同母源因子的功能，相应母源突变体的培育显得尤为重要。
(4)母源因子由母源效应基因通过基因__________过程产生，其产生并积累的时期由于同源染色体未分离，因此只有纯合突变的雌性个体的后代才是母源突变体。
(5)传统交配筛选的方法存在耗时长、纯合的合子突变体的致死率高等缺陷。为了解决上述问题，科学家在CRISPR/Cas9基因编辑系统的基础上进行了改进。
①sgRNA编码序列能与相应靶基因序列发生碱基互补配对。为构建含有sgRNA编码序列的重组质粒，需对含有特定sgRNA编码序列的DNA用__________处理，然后将其插到经相同酶处理过的质粒上。斑马鱼的卵母细胞与精子受精前停滞在减数分裂Ⅰ前期，此时还未开始合成母源因子，在此阶段前对卵母细胞进行基因敲除可避免母源因子的积累。
②为了实现卵母细胞中基因的特异性敲除，如图2所示，科学家将含有3个不同的但靶向相同基因的sgRNA编码基因的重组质粒组装到具有特殊元件的载体上，形成新的重组质粒后导入卵母细胞。

注：eflap—能够驱动基因广泛表达的启动子；EGFP—增强型绿色荧光蛋白基因；I-SecI一归位内切酶，可将质粒随机插到斑马鱼的基因组中。
从理论上分析，一个sgRNA便能实现靶基因的敲除，请分析3个sgRNA串联有何优势，请答出2点__________。

3 . 毛花猕猴桃果实大，维生素C含量高；软枣猕猴桃极耐寒，在-40℃下可安全越冬。某农科所利用这两种猕猴桃体细胞，通过细胞工程的方法培育出了猕猴桃新品种，其过程如图所示。下列有关叙述不正确的是（       ）   

A．图中①过程可使用纤维素酶和果胶酶进行处理，得到原生质体a、b

B．过程②可采用PEG融合法、电融合法等方法

C．获得的原生质体应置于蒸馏水浸泡备用，这样可维持原生质体的活性

D．获得杂种细胞后需进行筛选，再通过植物组织培养获得杂种植株

4 . 图1为甘蓝与萝卜体细胞杂交的原生质体融合过程示意图。图2为图1的①过程中不同酶解时间下萝卜细胞原生质体数量统计。请回答下列相关问题。   

(1)据图2判断，①过程对萝卜细胞处理的最佳时间为___h，从细胞结构的角度分析，对甘蓝细胞处理的最佳时间和对萝卜细胞处理的最佳时间相近，推测理由是___。
(2)②过程采取的化学法有___（填一种）。
(3)图1中②过程成功的标志是___，主要与___（填细胞器）有关。接下来培育成一个完整植株采用的技术手段是___。该技术手段包括的两大过程是___（按顺序填写），原理是___。最后得到的杂种植株并未表现出预期的性状，请从基因表达调控的角度分析可能的原因是___。
(4)从新品种培育的角度分析，植物体细胞杂交技术最大的优点是___。

5 . 下图为玉米组织培养的相关研究，亲本植物的基因型为Aa，A、B、C表示以亲本植物为材料进行的三种人工繁殖过程，图中融合细胞只考虑两两融合。下列叙述正确的是（       ）

A．B过程离体细胞需将其先用体积分数为70%的酒精消毒30s后，再用次氯酸钠处理30min，最后用无菌水清洗2~3次

B．A过程获得的植株可以显著提高变异频率，是进行体细胞诱变育种和研究遗传突变的理想材料

C．B过程中，与形成薄壁细胞不同，在配制分化芽培养基时需降低2，4-D的浓度

D．若让C过程获得的植株和亲本植株杂交，其后代中基因纯合的类型所占比例为1/3

6 . 如图为细胞融合示意图（只考虑细胞两两融合），若A、B分别是基因型为Hhrr、hhRr两个烟草品种的花粉原生质体，两对基因独立遗传，由于一对隐性纯合基因（rr或hh）的作用，在光照强度大于800lx时，都不能生长。下列叙述正确的有几项（       ）

①诱导植物原生质体融合的方法可以是用灭活的病毒处理，原理是细胞膜的流动性
②实验开始时必须用纤维素酶和果胶酶除去不利于原生质体融合的结构
③在大于800lx光照下培养，可淘汰5种融合细胞，筛选出基因型为HhRr的杂种细胞
④利用植物体细胞杂交育种可以定向改变生物性状
⑤图示D细胞有四个染色体组

A．1项

B．2项

C．3项

D．4项

7 . 下列生物工程技术中，一定要来自同一个物种的是（　　）

A．基因工程中的限制酶和DNA连接酶

B．动物细胞融合中的两个细胞

C．牛胚胎移植中胚胎的供体与受体

D．植物体细胞杂交中两个体细胞

9 . 下图为某生物工程操作流程模式图，①、②为相应过程。下列叙述正确的是（       ）   

A．若此图表示转基因抗虫棉的培育，则①为该技术的核心工作

B．若此图表示单克隆抗体的制备，则②过程用选择培养基筛选

C．若此图表示试管牛的培育，则①过程发生的场所是输卵管

D．若此图表示植物体细胞杂交，则②过程可用PEG诱导细胞壁再生

10 . 土地盐渍化制约农作物的生长，影响农作物的产量。我国科学家用普通小麦与耐盐偃麦草进行体细胞杂交获得耐盐小麦新品种“山融3号”，培育过程如图所示（序号代表结构）。

(1)植物体细胞杂交之前需要用____酶去除细胞壁获得原生质体。除图中所示方法外还可用____（物理法）促进原生质体融合，此过程涉及的原理是____。
(2)①经过____过程形成愈伤组织，由愈伤组织到②过程应降低培养基中____（填激素）的比例有利于促进根的形成，此过程还需要光照处理，其作用是____。
(3)与传统杂交育种相比，植物体细胞杂交育种的优点是____。