【推荐1】下图是某科研所以小鼠为材料制备实验克隆体和某抗原的单克隆抗体及研究胚胎干细胞分化条件的流程图。请回答下列相关问题：

（1）图中去核卵母细胞是通过___________________________法去除卵母细胞中的核得到的。B细胞应选择_____________期细胞，原因________________________________________。
（2）③过程需要向培养液中加入_____________，如牛磺酸、丁酰环腺苷酸等化学物质，从而诱导胚胎干细胞向不同类型的组织细胞分化。
（3）④过程常用的生物诱导因素是_______________。④过程中产生的两两融合细胞的类型有___________________________（用X、Y细胞表述）。
（4）⑤过程中要进行两次筛选，第一次筛选目的：__________________________。

【推荐2】阅读如下资料，回答以下问题：
资料甲：科学家将生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”。
资料乙：科学家通过对鼠和人控制抗体产生的基因进行拼接，实现了对鼠源杂交瘤抗体的改造，生产出对人体的不良反应减少、效果更好的鼠﹣人嵌合抗体，用于癌症治疗。
资料丙：治疗性克隆是指把患者体细胞移植到去核卵母细胞中，构建形成重组胚胎，体外培养到一定时期分离出ES细胞，获得的ES细胞定向分化为所需的特定类型细胞（如神经细胞、肌肉细胞和血细胞），用于治疗。
(1)资料甲属于基因工程的范畴。构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生 _____ 末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生 __（相同、不同）黏性末端的限制酶。
(2)将基因表达载体导入小鼠受精卵内常用______法。
(3)资料乙属于基因工程和细胞工程的范畴。鼠源杂交瘤抗体就是从免疫小鼠的脾脏细胞中获取B淋巴细胞，在诱导剂的作用下与______融合，形成杂交瘤细胞，并通过体内培养或体外培养生产单克隆抗体。这种抗体与普通血清抗体相比较，最主要的优点是______，可大量制备。
(4)ES细胞可从重组胚胎培养到囊胚时期的__中分离。在培养液中加入_____可诱导ES细胞定向分化成所需的各种特定类型细胞。

【推荐3】人体内天然产生的激素含量都很少，科学家欲用基因工程的方法获取大量的生长激素。回答下列问题：
(1)利用基因工程的方法获取生长激素时，需要构建生长激素基因表达载体，构建基因表达载体的目的是_____（答出一点）；基因表达载体中，启动子的作用是_____。
(2)PCR技术是获得目的基因的方法之一，扩增目的基因需要引物，请在下图中正确标出引物的位置及方向；根据DNA中存在的引物类型，不考虑DNA片段的大小，最终扩增出的DNA片段有_____种；对PCR扩增产物进行电泳鉴定时，发现有许多种相对分子质量比目的基因小的DNA片段，推测原因可能是_____（答出一点）。

   

(3)科学家欲让生长激素基因在哺乳动物的乳腺细胞中表达，制成乳腺生物反应器，请写出大致的设计思路：_____。

【推荐1】1965年中国科学家人工合成了具有生物活性的结晶牛胰岛素，摘取了人工合成蛋白质的桂冠，人胰岛素基因表达的最初产物是一条肽链构成的前胰岛素原，经图1所示的过程形成具生物活性的胰岛素。此后科学家又提出了利用基因工程改造大肠杆菌生产人胰岛素的两种方法：AB法是根据胰岛素AB两条肽链的氨基酸序列人工合成两种DNA片段，利用工程菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素；BCA法是利用胰岛B细胞中的mRNA得到胰岛素基因，表达出胰岛素原后再用特定酶切掉C肽段。这两种方法使用同一种质粒作为载体。请分析并回答下列问题：
      
(1)在人体胰岛B细胞内，图1中前胰岛素原形成具生物活性的胰岛素过程中参与的细胞器有_________。
(2)由于密码子具有_________，AB法中人工合成的两种DNA片段均有多种可能的序列。__________（填“AB”“BCA”或“AB和BCA”）法获取的目的基因中不含人胰岛素基因启动子
(3)图2是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。为使目的基因与载体正确连接，在设计PCR引物时，在胰岛素基因两端可添加限制酶__________的识别序列。
(4)对重组表达载体进行酶切鉴定，若选择限制酶Sal I，假设所有对应切割位点均能切割，则溶液中最多能获得__________种大小不同的DNA片段。
(5)β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。经Ca²⁺处理的大肠杆菌与重组质粒混合培养一段时间后，采用__________法将大肠杆菌接种到添加了__________的培养基上筛选出__________色的菌落即为工程菌种。
(6)科学家利用蛋白质工程技术，研制出了赖脯胰岛素，与天然胰岛素相比，其皮下注射后易吸收、起效快。获得赖脯胰岛素基因的途径是：从预期的蛋白质功能出发→__________→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列。

【推荐2】MseⅠ、PstⅠ、EcoRⅠ三种限制酶的识别序列及切割位点分别是GAAT↓TAATTC、C↓TGCAG、G↓AATTC，如图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切点。图3表示利用基因工程生产胰岛素的三种途径。图4表示改造哺乳动物遗传特性的三种途径。请据图回答问题。

（1）若要用如图1和图2中的质粒和外源DNA构建重组质粒，需要对质粒进行改造，构建新的限制酶切位点。在构建新的限制酶切位点的过程中需要使用哪些工具酶___________________。
（2）图3中催化过程①的DNA连接酶的作用是促使形成_________________，导入受体细胞B常用方法_______________，④过程也可以培养到______________，再从培养液中提取。导入受体细胞C首先使用Ca²⁺处理使其吸收周围的DNA分子，之后将细胞C与图中M溶于_____________________中，完成转化过程。
（3）获得动物1的受体细胞通常是受精卵，哺乳动物卵原细胞减数分裂形成成熟卵子的过程中，注射促性腺激素后还需_______________的诱导下才能完成。动物2体内各体细胞的基因种类________________。上述动物的获得均需运用_________________________技术。
（4）干细胞科技发展至今，已进入以脐带、胎盘等组织为主要干细胞来源的全新时代。目前国内干细胞临床研究超过半数采用脐带或胎盘干细胞。胎盘干细胞由囊胚的________________细胞发育而来，利用胎盘干细胞具有发育全能性的特点，所以临床上可以用于__________________，从而挽救器官衰竭的患者的生命。

【推荐3】下图是制备抗埃博拉病毒VP40蛋白的单克隆抗体的过程

（1）过程①中选用EcoRⅠ和XhoⅠ两种限制酶切割的优点是_________，此外还要用到________酶。
（2）过程②中首先需要用Ca^2＋处理大肠杆菌，使其处于感受态，VP40基因进入大肠杆菌后维持稳定并表达的过程称为______。
（3）与植物原生质体融合相比，过程④特有的方法是用________处理。通常在选择培养基中需加入抗生素，目的是________________________。选择培养基上存活的杂交瘤细胞产生的抗体________(填“是”或“不是”)单克隆抗体。
（4）图示过程应用的生物技术有______________________________________
（5）细胞融合完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有_________。体系中出现多种类型细胞的原因是__________________________________。
（6）单克隆抗体主要的用途有：________________________________(至少答出两点)。