2 . 镰状细胞贫血是一种单基因遗传病，由正常血红蛋白基因(HbA)突变为异常血红蛋白基因(Hbs)引起，它们的某片段如图甲。现对一胎儿进行基因检测，主要原理：限制酶MstⅡ处理扩增后的DNA，加热使酶切片段解旋后用荧光标记的 CTGACTCCT 序列与其杂交，最后电泳分离。图乙为电泳后荧光出现的三种可能性。下列叙述不正确的是（       ）

A．提取胎儿DNA 样品后，扩增DNA 需要添加特定的引物

B．若该胎儿检测结果为图乙一b，则其为镰状细胞贫血患者

C．荧光标记序列越长，图乙-c中两个 DNA 条带间的距离越大

D．用限制酶MstⅡ处理 DNA不充分，可能把正常人误判为携带者

3 . 人绒毛膜促性腺激素（hCGβ）是胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，近年研究发现，结肠癌等多种恶性肿瘤细胞的hCGβ基因也有表达，hCGβ与肿瘤的发生、发展及转移有一定关系。研发抗hCGβ疫苗已成为近年来肿瘤生物治疗新的热点，下图为其制备的基本方案。回答下列问题：

注：甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔；AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子，只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达；各种限制酶对应的线条所指为其识别序列。
(1)图示hCGβ基因是人工合成的目的基因，在设计引物对其扩增时，为防止目的基因与质粒的自身环化并保证连接的方向性，可在其两端添加___限制酶的识别序列。经实验得知该基因扩增引物长度为10个核苷酸时特异性强、效率高，已知目的基因①处的碱基序列为CCTTTCAGCTCA—，则设计该端对应引物的序列是5＇___-3＇。
(2)图示 hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因，其目的是___。从生产控制的角度分析，选用AOX1作为hCGβ基因启动子的优点是___。
(3)阶段Ⅱ大肠杆菌作为受体菌是利用了大肠杆菌___的特点，从而实现重组DNA的扩增，然后在含有___的培养基中筛选得到含hCGβ基因表达载体的大肠杆菌后进一步进行扩增。
(4)阶段Ⅳ需将处理后的酵母菌接种在培养基上培养，该培养基不需要添加以下哪些成分___（a.氨苄青霉紫b.组氨酸c.无机盐d.琼脂），可在此培养基上生长的酵母菌即为含有hCGβ基因表达载体的目的菌株。将此菌株扩大培养后，离心取上清液，依据___原理进行检测。若上清液中能检测到hCGβ蛋白，则说明hCGβ基因得以表达。

4 . 反向PCR是一种通过已知序列设计引物对未知序列进行扩增的技术，其过程如下图所示。下列叙述错误的是（       ）

A．应选择引物1和引物4进行PCR扩增

B．设计的引物中GC碱基含量越高，复性的温度越高

C．PCR产物是包含所有已知序列和未知序列的环状DNA分子

D．整个过程需用到限制酶、DNA连接酶、耐高温DNA聚合酶及逆转录酶

5 . 下列有关DNA片段的扩增及电泳鉴定实验的叙述，正确的是（       ）

A．PCR缓冲液中一般要加Mg2＋，用于激活RNA聚合酶

B．琼脂糖熔化后加入适量的核酸染料混匀，用来指示DNA迁移的位置

C．在凝胶中的DNA分子的迁移速率只与DNA分子大小有关

D．电泳缓冲液加入电泳槽时，需要没过凝胶1mm为宜

8 . 葡萄酒中的氨基甲酸乙酯（EthylCarbamate，EC）是一种潜在致癌物，主要由尿素和乙醇反应生成。通过在亲本酿酒酵母菌株中，敲除一个拷贝的精氨酸酶基因CAR1，同时选用强启动子PGK1过表达脲基酰胺酶基因DUR1、2，来获得低产EC的重组酿酒酵母菌株。与亲本菌株相比，重组酿酒酵母菌株发酵性能及风味物质不受影响，尿素和EC的含量分别降低了40.38%和34.45%。满足葡萄酒相关领域对酵母的较高要求，有广泛的应用前景。

   

(1)下图为目的基因脲基酰胺酶基因DUR1、2的部分序列：
模板链3'-TACTGTCAATCA……ATGACGGCCACT-5'
编码链5'-ATGACAGTTAGT……TACTGCCGGTGA-3'
利用PCR扩增目的基因应选择的一对引物是____

A．5'-TACTGCCGGTGA-3'

B．5'-ATGACAGTTAGT-3'

C．5'-TCACCGGCAGTA-3'

D．5'-ACTAACTGTCAT-3'

(2)如图所示，构建基因表达载体时为避免反向拼接应选择____（填写酶的具体名称）识别并切割质粒，再用DNA连接酶连接。氨苄青霉素抗性基因的作用是____。
(3)已知目的基因上无相关酶切位点，应在引物的____（填5'或3'）端设计酶切序列，目的基因上游设计的酶切序列+引物序列为5'-____-3'。
(4)已知DUR1、2基因的转录模板链为A链，如果采用一定方法将目的基因与质粒进行反向连接，构建出反义DUR1、2基因，则其转录模板链为____链。将其导入之前的转基因工程菌中，其结果无法获得低EC产品，推测其原因可能是____。

9 . In—Fusion是一项新型的无缝克隆技术。技术关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列（即同源序列），经In—Fusion酶（能从线性DNA分子链的末端按3'→5'的方向顺次水解若干个磷酸二酯键）处理后可实现无缝连接，基本过程如图所示，其中Amp'表示氨苄青霉素抗性基因。回答下列问题：

(1)过程①中引物1、2设计的依据是_____，除引物外，反应体系中还需添加的物质有_____。
(2)过程①和②通常不能在同一反应体系中进行，主要原因是两对引物之间会发生_____。过程②所获得的线性化质粒含有_____个游离磷酸基团。
(3)过程③中，DNA片段先经In—Fusion酶处理形成_____，降温后通过碱基互补配对而形成“结合体”。过程④需用_____处理大肠杆菌，以便重组质粒导入受体细胞。导入后的重组质粒利用大肠杆菌细胞中的_____酶，实现完全环化。
(4)转化后，利用含_____的选择培养基初筛获得目标大肠杆菌，提取细胞内的DNA，经_____（方法）进一步鉴定与验证重组质粒。
(5)与传统构建重组质粒的方法相比，In-Fusion技术的优势主要有_____。

10 . 镰刀菌会造成小麦赤霉病，受感染的麦穗出现红色霉层，不仅造成减产，还会产生霉素，造成食品安全方面的问题。我国科学家从小麦近缘属植物长穗偃麦草中首次克隆出主效抗赤霉病基因Fhb7（编码一种谷胱甘肽S一转移酶），为解决小麦赤霉病的世界性难题提供了“金钥匙”。研究发现，用光诱导型启动子（PrbcS）能够使Fhb7基因表达，其结合T基因后能使Fhb7基因更高水平表达。
(1)Fhb7基因可在不同种的禾谷类作物细胞中转录并翻译出相同的谷胱甘肽转移酶，这说明_______（答出2点即可）。
(2)PrbcS是一段有特殊结构的DNA片段，能被______识别并结合，驱动基因的持续______过程。
(3)通过PCR技术可从长穗偃草中获得Fhb7基因并大量扩增，首先要根据已知的核酸序列，设计具有特异性的______，使______酶能够从其______端开始连接脱氧核苷酸。
(4)如图，甲、乙均为Fhb7基因表达载体构建过程中的中间载体。区别含有中间载体甲与含有重组载体丙的微生物的方法是______。经酶切后凝胶电泳，测得含2B基因片段长度为0.3kb，经图示信息分析，含光诱导型启动子一T基因的片段长度约为_______。据图分析，形成重组载体丙，需要使用_______限制酶切割中间载体甲和乙，图中重组载体丙问号处有______种限制酶的酶切位点。