1 . 原位杂交是利用标记的已知核酸探针，在组织、细胞及染色体上检测相应的DNA或RNA序列的一种技术，现多用原位杂交技术进行基因的染色体定位。下列有关说法正确的是（       ）

A．萨顿提出并证明了基因在染色体上

B．进行基因定位的核酸探针只能是DNA序列

C．DNA或RNA都能与探针结合，因此探针不具有特异性

D．细胞分裂时，一条染色体上可能同时存在两个相同基因

2 . 人绒毛膜促性腺激素（hCGβ）是胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，近年研究发现，结肠癌等多种恶性肿瘤细胞的hCGβ基因也有表达，hCGβ与肿瘤的发生、发展及转移有一定关系。研发抗hCGβ疫苗已成为近年来肿瘤生物治疗新的热点，下图为其制备的基本方案。回答下列问题：

注：甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔；AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子，只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达；各种限制酶对应的线条所指为其识别序列。
(1)图示hCGβ基因是人工合成的目的基因，在设计引物对其扩增时，为防止目的基因与质粒的自身环化并保证连接的方向性，可在其两端添加___限制酶的识别序列。经实验得知该基因扩增引物长度为10个核苷酸时特异性强、效率高，已知目的基因①处的碱基序列为CCTTTCAGCTCA—，则设计该端对应引物的序列是5＇___-3＇。
(2)图示 hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因，其目的是___。从生产控制的角度分析，选用AOX1作为hCGβ基因启动子的优点是___。
(3)阶段Ⅱ大肠杆菌作为受体菌是利用了大肠杆菌___的特点，从而实现重组DNA的扩增，然后在含有___的培养基中筛选得到含hCGβ基因表达载体的大肠杆菌后进一步进行扩增。
(4)阶段Ⅳ需将处理后的酵母菌接种在培养基上培养，该培养基不需要添加以下哪些成分___（a.氨苄青霉紫b.组氨酸c.无机盐d.琼脂），可在此培养基上生长的酵母菌即为含有hCGβ基因表达载体的目的菌株。将此菌株扩大培养后，离心取上清液，依据___原理进行检测。若上清液中能检测到hCGβ蛋白，则说明hCGβ基因得以表达。

3 . 下列有关目的基因导入受体细胞和检测的叙述，正确的是（       ）

A．将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是花粉管通道法

B．将某种药用蛋白基因导入动物乳腺细胞中可获得乳腺生物反应器

C．对目的基因进行扩增时，通过荧光标记技术实时定量测定产物的量

D．验证转基因抗虫棉是否成功时，通过RNA分子标记检测目的基因是否表达

4 . 下列有关DNA片段的扩增及电泳鉴定实验的叙述，正确的是（       ）

A．PCR缓冲液中一般要加Mg2＋，用于激活RNA聚合酶

B．琼脂糖熔化后加入适量的核酸染料混匀，用来指示DNA迁移的位置

C．在凝胶中的DNA分子的迁移速率只与DNA分子大小有关

D．电泳缓冲液加入电泳槽时，需要没过凝胶1mm为宜

6 . 下图为抗除草剂基因和质粒的结构示意图，科研人员将抗除草剂基因导入玉米细胞，获得了抗除草剂玉米。

(1)在质粒上，启动子应位于目的基因的______（填上游或下游）其作用是______，图中质粒未标出的必需元件是______。
(2)用PCR技术扩增抗除草剂基因时，需在引物1上设计限制酶的酶切位点，即______，限制酶的作用可催化______（化学键名称）水解，抗除草剂基因的______链为转录的模板链。
(3)在构建抗除草剂基因表达载体时，为将抗除草剂基因正向连接在质粒上需要双酶切，用于切割质粒的限制酶是______，不选择MboI的理由是______。
(4)在分子水平上，检测抗除草剂基因是否导入玉米基因组的方法有______。在个体水平上，检测转抗除草剂基因玉米是否成功的方法是______。

7 . 葡萄酒中的氨基甲酸乙酯（EthylCarbamate，EC）是一种潜在致癌物，主要由尿素和乙醇反应生成。通过在亲本酿酒酵母菌株中，敲除一个拷贝的精氨酸酶基因CAR1，同时选用强启动子PGK1过表达脲基酰胺酶基因DUR1、2，来获得低产EC的重组酿酒酵母菌株。与亲本菌株相比，重组酿酒酵母菌株发酵性能及风味物质不受影响，尿素和EC的含量分别降低了40.38%和34.45%。满足葡萄酒相关领域对酵母的较高要求，有广泛的应用前景。

   

(1)下图为目的基因脲基酰胺酶基因DUR1、2的部分序列：
模板链3'-TACTGTCAATCA……ATGACGGCCACT-5'
编码链5'-ATGACAGTTAGT……TACTGCCGGTGA-3'
利用PCR扩增目的基因应选择的一对引物是____

A．5'-TACTGCCGGTGA-3'

B．5'-ATGACAGTTAGT-3'

C．5'-TCACCGGCAGTA-3'

D．5'-ACTAACTGTCAT-3'

(2)如图所示，构建基因表达载体时为避免反向拼接应选择____（填写酶的具体名称）识别并切割质粒，再用DNA连接酶连接。氨苄青霉素抗性基因的作用是____。
(3)已知目的基因上无相关酶切位点，应在引物的____（填5'或3'）端设计酶切序列，目的基因上游设计的酶切序列+引物序列为5'-____-3'。
(4)已知DUR1、2基因的转录模板链为A链，如果采用一定方法将目的基因与质粒进行反向连接，构建出反义DUR1、2基因，则其转录模板链为____链。将其导入之前的转基因工程菌中，其结果无法获得低EC产品，推测其原因可能是____。

8 . In—Fusion是一项新型的无缝克隆技术。技术关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列（即同源序列），经In—Fusion酶（能从线性DNA分子链的末端按3'→5'的方向顺次水解若干个磷酸二酯键）处理后可实现无缝连接，基本过程如图所示，其中Amp'表示氨苄青霉素抗性基因。回答下列问题：

(1)过程①中引物1、2设计的依据是_____，除引物外，反应体系中还需添加的物质有_____。
(2)过程①和②通常不能在同一反应体系中进行，主要原因是两对引物之间会发生_____。过程②所获得的线性化质粒含有_____个游离磷酸基团。
(3)过程③中，DNA片段先经In—Fusion酶处理形成_____，降温后通过碱基互补配对而形成“结合体”。过程④需用_____处理大肠杆菌，以便重组质粒导入受体细胞。导入后的重组质粒利用大肠杆菌细胞中的_____酶，实现完全环化。
(4)转化后，利用含_____的选择培养基初筛获得目标大肠杆菌，提取细胞内的DNA，经_____（方法）进一步鉴定与验证重组质粒。
(5)与传统构建重组质粒的方法相比，In-Fusion技术的优势主要有_____。

10 . 2019年新冠疫情爆发以来，疫情防控成为社会关注的热点问题。下图所示某科研团队运用基因工程研制新冠病毒疫苗的过程。质粒中lacZ基因编码的酶可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。回答下列问题：

   

(1)获取目的基因时，首先提取新冠病毒的RNA，再通过____过程获得cDNA（互补DNA），然后借助特异性引物进行扩增，PCR体外扩增的原理是____，其中PCR需要____酶。
(2)图中过程①有两种限制酶选择方案（注：图中几种限制酶切割产生的末端不同）：方案一：选用一种限制酶____；方案二：选用____两种限制酶；方案二优于方案一的原因是____。
(3)若将重组质粒导入大肠杆菌，需要用一定浓度的____（离子）处理大肠杆菌，使细胞处于能吸收周围DNA分子的生理状态；若将重组质粒导入双子叶植物细胞和裸子植物，则最常用的方法是____。
(4)筛选含重组质粒的大肠杆菌时，须在培养大肠杆菌的通用培养基中加入____，培养一段时间后，挑选出____色的菌落进一步培养获得大量目的菌。若想在分子水平上检测目的基因是否翻译为蛋白质，则通常采用____方法。