1 . 某细菌DNA分子上有4个Sau3AⅠ的酶切位点，经Sau3AⅠ处理后会形成4个大小不同的DNA片段。若是用BamHⅠ处理，则只会形成2个大小不同的DNA片段。Sau3AⅠ和BamHⅠ的识别序列及切割位点如表所示。下列叙述正确的是（       ）

限制酶名称	识别序列及切割位点
BamHⅠ	G↓GATCC
Sau3AⅠ	↓GATC

A．上述两种限制酶切割后可形成相同的黏性末端

B．该DNA分子上有一个BamHI的酶切位点

C．黏性末端能通过T4DNA连接酶连接

D．若用两种酶共同处理，会形成6个大小不同的DNA片段

2 . CRISPR/Cas9系统主要由向导RNA（SgRNA）和Cas9蛋白两部分组成，SgRNA可引导Cas9蛋白到特定基因位点进行切割，其机制如图所示。下列叙述正确的是（       ）

   

A．Cas9蛋白相当于限制酶，能作用于脱氧核糖和碱基之间的磷酸二酯键

B．对不同目标DNA进行编辑时，可使用相同的Cas9蛋白和SgRNA进行基因编辑

C．SgRNA可以在逆转录酶的催化下合成，合成的原料包括四种核糖核苷酸

D．其他DNA序列含有与SgRNA互补配对的序列，造成SgRNA错误结合而脱靶

3 . 下列有关目的基因导入受体细胞和检测的叙述，正确的是（       ）

A．将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是花粉管通道法

B．将某种药用蛋白基因导入动物乳腺细胞中可获得乳腺生物反应器

C．对目的基因进行扩增时，通过荧光标记技术实时定量测定产物的量

D．验证转基因抗虫棉是否成功时，通过RNA分子标记检测目的基因是否表达

4 . 基因工程操作离不开三种工具，下列有关说法不正确的是（       ）

A．用相同的限制性核酸内切酶处理目的基因和质粒，可获得相同的黏性末端

B．常用载体质粒的基本单位是脱氧核糖核苷酸，另外两种工具的基本单位是氨基酸

C．DNA聚合酶能够催化形成磷酸二酯键，是基因工程中的“分子缝合针”

D．限制性核酸内切酶主要从原核生物中分离获得，具有识别特定核苷酸序列的能力

5 . 下图为抗除草剂基因和质粒的结构示意图，科研人员将抗除草剂基因导入玉米细胞，获得了抗除草剂玉米。

(1)在质粒上，启动子应位于目的基因的______（填上游或下游）其作用是______，图中质粒未标出的必需元件是______。
(2)用PCR技术扩增抗除草剂基因时，需在引物1上设计限制酶的酶切位点，即______，限制酶的作用可催化______（化学键名称）水解，抗除草剂基因的______链为转录的模板链。
(3)在构建抗除草剂基因表达载体时，为将抗除草剂基因正向连接在质粒上需要双酶切，用于切割质粒的限制酶是______，不选择MboI的理由是______。
(4)在分子水平上，检测抗除草剂基因是否导入玉米基因组的方法有______。在个体水平上，检测转抗除草剂基因玉米是否成功的方法是______。

7 . 自然界中很少出现蓝色的花，天然蓝色花出现的主要原因是花瓣细胞液泡中的花青素在碱性条件下显蓝色。我国科学家利用链霉菌的靛蓝合成酶基因（idgS）及其激活基因（sfp）构建了基因表达载体（如图），通过农杆菌转化法将上述基因导入白玫瑰，在细胞质基质中形成稳定显色的靛蓝。下列相关叙述错误的是（       ）

注：PmeI、BamHI、SpeI、SacI为不同限制酶。

A．不同限制酶的识别序列都是由6个脱氧核苷酸组成的

B．将idgS基因插入Ti质粒时使用的限制酶是SpeI和BamHI

C．将sfp基因插入Ti质粒时使用的限制酶是PmeⅠ和BamHⅠ

D．启动子和终止子不表达出蛋白质，都属于基因的调控序列

8 . 2019年新冠疫情爆发以来，疫情防控成为社会关注的热点问题。下图所示某科研团队运用基因工程研制新冠病毒疫苗的过程。质粒中lacZ基因编码的酶可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。回答下列问题：

   

(1)获取目的基因时，首先提取新冠病毒的RNA，再通过____过程获得cDNA（互补DNA），然后借助特异性引物进行扩增，PCR体外扩增的原理是____，其中PCR需要____酶。
(2)图中过程①有两种限制酶选择方案（注：图中几种限制酶切割产生的末端不同）：方案一：选用一种限制酶____；方案二：选用____两种限制酶；方案二优于方案一的原因是____。
(3)若将重组质粒导入大肠杆菌，需要用一定浓度的____（离子）处理大肠杆菌，使细胞处于能吸收周围DNA分子的生理状态；若将重组质粒导入双子叶植物细胞和裸子植物，则最常用的方法是____。
(4)筛选含重组质粒的大肠杆菌时，须在培养大肠杆菌的通用培养基中加入____，培养一段时间后，挑选出____色的菌落进一步培养获得大量目的菌。若想在分子水平上检测目的基因是否翻译为蛋白质，则通常采用____方法。

9 . 下图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。下列相关叙述正确的是（       ）

A．②的构建需要限制性内切核酸酶和DNA聚合酶参与

B．③导入④后，重组Ti质粒整合到④的染色体DNA上

C．②到③过程，需要钙离子处理，有助于促进重组Ti质粒转化到农杆菌细胞中

D．⑤只要表现出抗虫性状就表明植株发生了不可遗传变异

10 . 如图显示了存在于4kb（1kb=1000个碱基对）长的环状DNA片段上的限制性内切核酸酶识别位点。为在分离凝胶上产生行进最远的条带，应一起使用的两种限制性内切核酸酶是（       ）

A．Nde I和Pst I

B．Nde I和EcoR I

C．Sac I和Bam H I

D．EcoR I和Hind Ⅲ