1 . 与普通玉米相比，甜玉米细胞中可溶性糖向淀粉的转化较慢，从而导致可溶性糖含量高，汁多质脆，研究发现这与甜玉米G蛋白含量较高有关。为提高甜玉米的商品价值，科研人员培育出了超量表达G蛋白的转基因甜玉米新品种。在超量表达G基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图1、2所示。

(1)图1中，强启动子是一段在特殊序列结构的DNA片段。位于基因的_______驱动基因持续转录，该转录过程中模板链的5’端位于________（填“M”或“N”）端。
(2)图2所示载体为农杆菌的Ti质粒，当农杆菌侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的________转移到被侵染的细胞，并且将其整合到_______。
(3)结合图1和图2，为使DNA片段能定向插入Ti质粒中，可用PCR技术在DNA片段的两端添加限制酶识别序列，M、N端添加的序列分别是限制酶__________的识别序列。
(4)外植体经脱分化过程形成的愈伤组织放入农杆菌液（含重组Ti质粒）浸泡后，进行植物组织培养时培养基中需加入_________进行筛选，最终获得玉米植株Y1、Y2、Y3.通过对3个植株的G蛋白表达量和还原糖的含量进行测定，发现Y3植株的G蛋白表达量最多，但却不是还原糖含量最多的植株，原因可能是_______。
(5)下图为淀粉合成酶基因片段，其转录后形成的前体RNA需通过剪接（切去内含子对应序列）和加工后方能用于翻译。科研人员希望通过降低淀粉合成酶基因的表达，进一步提高甜玉米中可溶性糖的含量，将吗啉反义寡核苷酸（RNA剪接抑制剂）导入玉米受精卵中，发现其基因表达受阻。科研人员对其作用机制提出一种假说：吗啉反义寡核苷酸可能导致RNA前体上内含子1和外显子2的对应序列同时被剪切，而不是内含子1对应序列被单独剪切。（外显子：基因中编码蛋白质氨基酸的片段。内含子：基因中不编码蛋白质氨基酸的片段。）

为证明该假说，设置两组实验，一组玉米受精卵中导入吗啉反义寡核苷酸，另一组不导入。提取两组受精卵中的RNA，逆转录合成DNA（即cDNA）：
①以cDNA为模板，选择图示引物________进行PCR，产物进行电泳鉴定，根据是否有扩增产物及产物大小判断该假说是否成立。
②若某次电泳结果发现实验组和对照组均没有出现任何条带，从PCR反应成分的角度分析，
可能的原因是__________（至少写出1点）。

3 . 下图表示获得抗除草剂转基因玉米的技术路线，其中含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达，其产物能使某种能被细胞吸收的无色物质K呈现蓝色。回答下列问题：

(1)基因工程的核心是____________，该步骤中通常选用两种不同的限制酶，其优点是___________。
(2)图示过程中选用农杆菌，是因其Ti质粒上有一段包含报告基因的T-DNA序列，该片段能进入植物细胞并_____________，从而使其携带的目的基因的遗传遵循孟德尔遗传定律。
(3)农杆菌转化愈伤组织的过程中，常残留在愈伤组织表面，可能会导致未转化的愈伤组织在含除草剂的培养基中生长。因此，进行筛选2时，应在培养基中添加____________，并挑选___________的愈伤组织细胞，用于植物组织培养。
(4)通过PCR技术扩增G基因，需要以____________为原料，扩增6次需要两种引物各____________个。为了将获得的C基因准确连接至质粒上，需要在两种引物的________（填“5′”或“3′”）端分别添加相应限制酶的识别序列；同时G基因必须正确插入到____________和___________之间，其中后者是位于基因前端的片段，其作用是___________。

4 . 人绒毛膜促性腺激素（hCGβ）是胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，近年研究发现，结肠癌等多种恶性肿瘤细胞的hCGβ基因也有表达，hCGβ与肿瘤的发生、发展及转移有一定关系。研发抗hCGβ疫苗已成为近年来肿瘤生物治疗新的热点，下图为其制备的基本方案。回答下列问题：

注：甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔；AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子，只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达；各种限制酶对应的线条所指为其识别序列。
(1)图示hCGβ基因是人工合成的目的基因，在设计引物对其扩增时，为防止目的基因与质粒的自身环化并保证连接的方向性，可在其两端添加___限制酶的识别序列。经实验得知该基因扩增引物长度为10个核苷酸时特异性强、效率高，已知目的基因①处的碱基序列为CCTTTCAGCTCA—，则设计该端对应引物的序列是5＇___-3＇。
(2)图示 hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因，其目的是___。从生产控制的角度分析，选用AOX1作为hCGβ基因启动子的优点是___。
(3)阶段Ⅱ大肠杆菌作为受体菌是利用了大肠杆菌___的特点，从而实现重组DNA的扩增，然后在含有___的培养基中筛选得到含hCGβ基因表达载体的大肠杆菌后进一步进行扩增。
(4)阶段Ⅳ需将处理后的酵母菌接种在培养基上培养，该培养基不需要添加以下哪些成分___（a.氨苄青霉紫b.组氨酸c.无机盐d.琼脂），可在此培养基上生长的酵母菌即为含有hCGβ基因表达载体的目的菌株。将此菌株扩大培养后，离心取上清液，依据___原理进行检测。若上清液中能检测到hCGβ蛋白，则说明hCGβ基因得以表达。

5 . 下列生物技术操作不会达成预期目标的是（       ）

A．将胰岛素基因表达质粒转入酵母菌，筛选获得产胰岛素工程菌

B．将肠乳糖酶基因导入奶牛乳腺细胞，培育产低乳糖牛乳的奶牛

C．将体外改造后能识别特定癌细胞的T细胞回输患者，进行癌症治疗

D．将花青素代谢相关基因导入植物体细胞，获得具有特定花色的植株

6 . 下列有关目的基因导入受体细胞和检测的叙述，正确的是（       ）

A．将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是花粉管通道法

B．将某种药用蛋白基因导入动物乳腺细胞中可获得乳腺生物反应器

C．对目的基因进行扩增时，通过荧光标记技术实时定量测定产物的量

D．验证转基因抗虫棉是否成功时，通过RNA分子标记检测目的基因是否表达

9 . 下图为抗除草剂基因和质粒的结构示意图，科研人员将抗除草剂基因导入玉米细胞，获得了抗除草剂玉米。

(1)在质粒上，启动子应位于目的基因的______（填上游或下游）其作用是______，图中质粒未标出的必需元件是______。
(2)用PCR技术扩增抗除草剂基因时，需在引物1上设计限制酶的酶切位点，即______，限制酶的作用可催化______（化学键名称）水解，抗除草剂基因的______链为转录的模板链。
(3)在构建抗除草剂基因表达载体时，为将抗除草剂基因正向连接在质粒上需要双酶切，用于切割质粒的限制酶是______，不选择MboI的理由是______。
(4)在分子水平上，检测抗除草剂基因是否导入玉米基因组的方法有______。在个体水平上，检测转抗除草剂基因玉米是否成功的方法是______。

10 . “杂交水稻之父”袁隆平利用雄性不育野生稻改写了世界水稻育种史，杂交水稻研究团队不断刷新我国水稻产量和品质，举世瞩目。请分析回答：
(1)水稻（2n=24）是禾本科植物，在我国有野生种、引进种：杂交种等水稻品种用于农业生产和科学研究，这主要体现了生物多样性的______________价值。在育种研究中，对水稻进行基因组测序要测_____________条染色体中DNA的碱基序列。
(2)安农S-1是我国发现的第一个籼稻（水稻的一个品种）光温敏雄性不育系。该光温敏雄性不育系与9种常规雄性可育系进行正反交，得到的F₁均为雄性可育。据此可推出有关该雄性不育基因的两个结论是：_______________。
(3)另有一个水稻品系，其雄性的育性由一对等位基因M、m控制，基因型为mm的个体表现为雄性不育，能产生正常的雌配子，M基因可使雄性不育个体恢复育性产生可育雄配子。通过转基因技术将M基因与雄配子致死基因A、蓝色素生成基因D一起导入基因型为mm的个体中，并使其插入一条不含m基因的染色体上（D基因的表达产物可使种子呈现蓝色，无D基因的种子呈现白色）。如图：

①图中基因型为mmADM的个体自交时（不考虑突变和互换），子代种子的表型及比例为_____________，这种转基因改良品系的显著优点是_______________。
②要成功得到转基因个体（mmADM），先要构建基因表达载体。研究人员准备在已插入M基因的运载体（如下图）中再插入A、D融合基因。他们分析发现A、D融合基因拼接处存在XbaI的识别序列，为使基因表达载体中A、D融合基因和M基因都正确表达，应
在A、D融合基因两端添加______________两种限制酶的识别序列，并用_____________两种限制酶对运载体进行酶切。