【推荐1】橙汁能帮助人体排毒，延缓人体衰老，深受消费者喜爱。但生产过程中感染脂环酸芽孢杆菌，橙汁的品质会受到影响。为优化橙汁生产的质量监控工艺，技术人员设计了如下流程，开展脂环酸芽孢杆菌的筛选和鉴定。请回答：

(1)步骤①从果园中取土壤10克，制备土壤稀释液。土样应取自_____（填“表层”或“深层”）土壤；步骤②制备土壤稀释液需充分振荡20min，主要目的是_____。
(2)步骤③将土壤悬浮液稀释了_____倍，步骤④需要用到的接种工具是_____。
(3)将④中分离得到的可疑菌株制成菌悬液，80℃水浴热处理10min，再取0．1mL热处理后的菌液涂布接种到培养基平板上，45℃培养48h。该操作的目的是_____。
(4)取1mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接入0．1mL稀释液，经过适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57．据此可得出每升样品中的活菌数为_____个。
(5)为研究控制脂环酸芽孢杆菌生长的方法，科研人员进行了如下设计：①称取一定量的抑菌剂，配制成不同浓度的抑菌液。②将上图得到的菌株原液稀释。③分别取不同浓度的抑菌液和菌株稀释液，加入到相对应的培养液中形成菌悬液（三种液体均等量）。一段时间后，将菌悬液分别接种到适宜的培养基平板上。经后来论证发现，该设计不够严谨，理由是_____。

【推荐3】Ⅰ、已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：
(1)显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用__________染色。
(2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以___________为唯一碳源的固体培养基进行培养。
(3)若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用__________直接计数：若要测定其活菌数量，可选用__________法进行计数。若向3个培养皿中依次添加0．1mL稀释倍数为10⁵的菌液后，3个培养皿中生长的菌落数依次为31个、30个、32个，求1mL原菌液中含_______________个菌落。
(4)为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为6mg、1mg、4mg，则上述三个温度中，___________℃条件下该酶活力最小。为进一步确定该酶的最适温度，应围绕___________℃前后设计后续实验。
Ⅱ、表中是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：

限制酶	BamHI	BclI	Sau3AI	HindIII
识别序列及切割位点	↓GGATCC    CCTAGG↑	↓TGATCA    ACTAGT↑	↓GATC    CTAG↓	↓AAGCTT    TTCGAA↑

(5)用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用_________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过_________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于_________态的大肠杆菌。
(6)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加_________，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中__________________________。
(7)若BamHI酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为_________，对于该部位，这两种酶_________（“都能”、“都不能”或“只有一种酶能”）切开。
(8)若用Sau3AI切图1质粒最多可能获得_________种大小不同的DNA片段。