【推荐2】乳酸菌是乳酸的传统生产菌，但耐酸能力较差，影响产量。酿酒酵母耐酸能力较强，但不产生乳酸。研究者将乳酸菌的乳酸脱氢酶基因（LDH）导入酿酒酵母，获得能产生乳酸的工程菌株。图1为乳酸和乙醇发酵途径示意图，图2为构建表达载体时所需的关键条件。

(1)乳酸菌发酵时，对气体条件的要求是________，酿酒酵母的最适生长温度约为________。
(2)据图2分析，利用PCR技术扩增LDH需要设计引物，引物的作用是___________，扩增n次后，需要的引物1的数量至少是________。研究发现，真核生物起始密码子序列偏好 ATG，为保证扩增出的LDH以正确方向插入质粒需要利用双酶切技术，设计引物1的5'端序列时，应考虑________。
(3)为了筛选出含重组质粒的酿酒酵母，需要将重组质粒导入__________酿酒酵母菌株，在_________的固体培养基上筛选出转基因酿酒酵母，并进行鉴定。

【推荐3】为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶 D 基因与位于叶绿体 膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。
(1)研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用_____技术 （写 全称）从陆地棉基因文库中获取酶 D 基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因。 所含三种限制酶（ClaI、SacI、XbaI）的切点如下图所示。则用 _____和 _____酶处理两个基因后，可得到 _____（填图中字母）端相连的融合基因。

(2)将上述融合基因插入右上图所示质粒的T-DNA 中，构建_____并 导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含_____的固体平板上培养得到含 融合基因的单菌落，再利用培养基振荡培养，可以得到用于转化的浸染液。
(3)剪取油菜的叶片放入浸染液中一段时间，此过程的目的是_____ ， 进一步筛选后获得转基因油菜。目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维 持稳定和表达的过程，称为_____。该细胞通过_____技术，可培育成转基因油菜植株。
(4)利用蛋白质工程获得活性更高的酶 D 时，需根据所设计蛋白质的结构推测其氨基酸序列 ， 最终确定相对应的脱氧核苷酸序列并经_____获得所需的基因。

【推荐1】下图是设想以小鼠为对象进行的单克隆抗体制备过程示意图，图中1~6代表相关过程，a~e代表相关细胞，HAT培养基中最终只有杂交瘤细胞可以生长繁殖。请回答下列问题：
   
(1)在小鼠的正常体细胞培养过程中，存在两个明显的特点：___和贴壁生长。因为贴壁生长，所以对培养瓶或培养皿的要求是___。在体外培养时通常需在培养液中添加___等天然成分。
(2)HAT筛选得到的细胞有何特点？___。HAT筛选后还要再次筛选，再次筛选的目的是___。
(3)单克隆抗体制备过程中主要运用了哪些生物工程技术？___。
(4)此过程产生的抗体比一般抗血清优越得多，原因是___。

【推荐2】食品安全人们日益关注。一种保鲜剂——青鲜素，能抑制植物细胞生长与分裂从而抑制发芽，被用于蔬菜和水果的保鲜，但其残留会损害人体健康。根据材料回答下列问题。
(1)青鲜素和________（一种植物激素）的作用类似，它是人工合成的对植物的生长发育有调节作用的化学物质，是属于____________。
(2)青鲜素残留毒性可能会使_______发生突变，导致正常细胞生长和分裂失控而变成癌细胞。
(3)科研人员以小鼠为实验材料，用“动物细胞培养技术”对青鲜素毒害性进行了检测。
①请完善检测青鲜素毒性的实验:
主要实验步骤:
第一步:取大小相同的六只培养瓶编号为1－6，分别加入等量的相同培养液和小鼠细胞。
第二步:向1号培养瓶中加入生理盐水，向2－6号培养瓶中分别加入________________。
第三步:培养一段时间后，取样制成临时制片，用显微镜观察，_____________________。
结果如下表：

培养瓶编号	1	2	3	4	5	6
添加剂中青鲜素浓度（mg/L）	水	10	30	90	270	810
变异细胞比例	0	0	1/106	1/106	2/106	8/106

结论:_______________________________________________________________________。
②该实验检测有毒物质毒性的指标是_______________，所用培养液中需要加入的特殊营养成分是_____________。

【推荐3】科学家在实验室中已经能成功培育出膀胱，并能顺利移植到患者体内，这种技术为那些急需器官移植的患者带来福音。回答下列问题：
（1）科学家从患者的膀胱上取下一小块活细胞样本，将其中的肌肉细胞和膀胱上皮细胞分别置于不同的培养皿中培养。在培养之前，需用______处理以分散细胞，处理好的细胞初次接种在培养皿中的培养过程属于______。要保证被培养的细胞处于无菌、无毒的环境，即对培养液和培养用具进行无菌处理，还要在培养液中添加______，以防培养过程中的污染。此外，应______，以便清除代谢产物，防止对细胞造成危害。动物细胞培养中还需要提供CO₂和O₂，所需CO₂的主要作用是____________。与植物组织培养的培养基相比，其培养基的主要不同点是含有____________。
（2）约一周后将培养皿中培养的细胞放在由胶原质制成的“支架”上继续培养，再过7周左右，原先的数万个细胞已经通过______的增殖方式繁殖到15亿个左右。这些细胞具有______的特点，使其布满“支架”，膀胱上皮在内，肌肉在外，形成“新膀胱”。
（3）医生将“新膀胱”移植到患者的膀胱上，这样新器官会继续生长并与老器官“重组”取代老器官中丧失功能的部分。新器官与老器官的“重组”______（填“是”或“不是”）基因重组；“新膀胱”移植后，_____（填“会”或“不会”）引起免疫排斥反应。
（4）除上述方法外，还可将患者的体细胞核移入______中，利用“克隆”技术和______技术，形成相应组织、器官用于疾病的治疗。

【推荐1】2015年2月3日，英国议会下院通过一项历史性法案，允许以医学手段培育“三亲婴儿”，三亲婴儿的培育过程可选用如下图所示技术路线：

（1）除体外受精外，在得到三亲婴儿过程中需要用到的现代生物技术还有(写出3项)
____________________       ___________________        __________________
（2）捐献者携带的红绿色盲基因能否传递给三亲婴儿？__________

【推荐2】2018年1月25日报道，两只克隆猕猴“中中”和“华华”在中国诞生，突破了现有技术无法克隆灵长类动物的世界难题，将为阿尔茨海默症、自闭症等脑疾病带来前所未有的光明前景，图为过程流程图，请回答下列有关问题：

(1)动物细胞培养一般分为___________和传代培养两个阶段过程。在前一阶段，贴壁的细胞会出现___________现象，所以要进行传代培养。
(2)与胚胎细胞核移植技术相比，体细胞核移植技术的成功率更低，原因是___________。
(3)①表示去除细胞核，该过程一般要在卵母细胞培养至___________时期再进行，目前使用的去核方法是___________。
(4)在猕猴体细胞核移植实验中，若最终获得的克隆猴与供体猴性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其原因：___________。
(5)上述过程中涉及的动物细胞工程技术有___________。克隆猴的成功，说明了动物___________具有全能性。

【推荐3】人乳铁蛋白（hLF）对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究，主要流程如下图，图中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相关限制酶切点，neo^r为新霉素抗性基因，BLG基因为β乳球蛋白基因，GFP基因为绿色荧光蛋白基因，RT-PCR为反转录-聚合酶链反应，是将RNA的反转录和聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。请回答：

(1)过程①中，不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT-PCR，是因为hLF基因________________。在RT-PCR过程中，加入的引物需在5＇端添加________________________两种限制酶的识别序列，以便于hLF基因插入pEB中。
(2)过程②中，hLF基因插入到BLG基因之后的目的是使人乳铁蛋白基因___________________。过程③中，使用人工膜制成的脂质体将重组质粒导入受体细胞，依据的主要原理是_____________________________。
(3)将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养，能够存活的细胞应该是导入__________的细胞，再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞中_____________，以筛选出转染成功的细胞。
(4)要获得转基因山羊，还需要将成功表达hLF基因的乳腺上皮细胞的细胞核移植到山羊__________细胞中，再借助____________技术孕育出羊羔。

【推荐1】下图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病的过程图解。请据图回答：

（1）②所示的生物技术名称是_______________。重组细胞A培养过程中所用培养液除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等成分以及_______________等物质，并且用一定的方法激活其完成细胞分裂和发育进程。该过程通常用去核的卵母细胞作为受体细胞的原因除了它体积大、易操作、营养物质丰富外，还因为它含有_______________的物质。
（2）图中③所示的结构名称是_______________。若实现重组细胞B定向诱导分化，需要在培养基中加入_______________。
（3）④所示的生物技术名称是_______，若想得到大量健康的胰岛B细胞基因，可利用_______技术。
（4）图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是_______________。

【推荐2】猪蓝耳病又称猪的繁殖与呼吸综合征（PRRS），由动脉炎病毒与呼吸综合征病毒（简称蓝病毒）的蛋白质外壳引起。患病动物主要表现为繁殖障碍、呼吸困难、耳朵蓝紫。母猪感染该病毒后会在妊娠晚期流产，为培育抗蓝病毒的转基因猪，工作人员根据哺乳动物受精作用和早期胚胎的发育过程提出了解决方案（如图）。请回答下列问题：

   

(1)B猪体细胞在培养瓶中培养时，要保证培养液无菌、无毒，常在培养液中加入______，另外还需定期更换培养液，以防止______对细胞自身造成的伤害。培养到一定程度后，还需用______处理后分装到多个培养瓶中进行传代培养。
(2)由于目的基因不能直接导入受体细胞，因此需要构建基因表达载体，该过程需要用的酶有______。常采用双酶切法处理含目的基因的DNA片段和载体，其优点是______。
(3)通过步骤①的技术手段______得到甲，培养至乙______，然后移植到经______处理的C猪的______，由于C对乙不发生______，从而为胚胎在受体内的存活提供了可能。
(4)利用______技术检验D猪是否产生相应的抗体。该抗体也可使用杂交瘤技术来制备，通常情况下，杂交瘤细胞是由经培养的骨髓瘤细胞和______细胞融合获得的，与诱导植物原生质体融合方法不同的是______。

【推荐3】科学家通过转基因技术获得了含有人生长激素基因的奶牛，如果要加速转基因奶牛的繁育，可以对此转基因奶牛进行克隆（如图所示）。请结合图示回答下列问题：

（1）在进行细胞培养时，要对取自转基因奶牛的组织细胞进行分离，形成单个细胞，这个过程中需要利用______________酶处理。
（2）用于核移植的供体细胞，一般都选用传代10代以内的细胞，原因是______________。
（3）在进行原代培养时，细胞增殖的方式是_______，此外，细胞增殖还表现出_________和接触抑制等特点。
（4）将进行培养的供体细胞注入去核的卵细胞中，去除卵母细胞细胞核的时间是_________。
（5）上述动物细胞工程中涉及的技术有_____________、_____________、______________。转基因奶牛的克隆成功，说明了动物______________具有全能性。