【推荐1】E7蛋白是HPV16型重要的抗原标志蛋白。我国研究人员以酿酒酵母菌为表达载体，成功构建表达HPV16型蛋白的转基因重组酿酒酵母疫苗。如图表示拟转入的质粒上某片段及其上的酶切位点分布，表为各酶切位点的序列，回答下列问题：

   

限制酶	BamHI	EcoRI	MfeI	KpnI
识别序列和切割位点

(1)研究人员首先需要利用PCR技术从HPV16型的基因组中获取E7蛋白的DNA序列，扩增过程中需要将双链DNA加热至______进行解旋，以______为原料合成子链。
(2)为了将获得的E7蛋白基因准确连接至图中的质粒上，需要在利用PCR技术扩增E7蛋白基因时在引物的______（填“5'”或“3'”）端添加______限制酶的切割位点序列。构建成功的表达载体中对于目的基因的大量扩增有重要作用的组成部分是______，该结构发挥作用时，通常需要的酶是______。
(3)HPV16型E7蛋白疫苗注入人体后作为抗原，可以刺激机体的B淋巴细胞增殖分化成为______。预防接种时通常需要多次注射疫苗，但是相邻两次注射需要间隔一段时间，原因是______。

【推荐2】Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图（图中数字序号表示的是相关过程）。请回答：

（1）过程①将进行培养的上皮细胞注入去核的卵母细胞中，接受细胞核的卵母细胞应处于___________时期；过程②利用的技术是____________，当重组胚胎培养到囊胚期时，可从其____________分离出ES细胞，ES细胞在功能上具有_______________________的特点。
（2）过程③中获取的目的基因是____________，若要将目的基因导入受体细胞，需要构建____________，构建之前可以根据____________设计引物，利用PCR技术对目的基因进行扩增。为了检测ES细胞的DNA上是否插入了干扰素基因，可采用____________技术。
（3）按此方法和图示技术流程，完成Rag2基因缺失小鼠的基因治疗涉及的多种酶，其中有（3种）____________和耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）等。测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质，用____________进行杂交实验。

【推荐3】抗体的制备经历了细胞学层面和分子学层面两个合成途径的研究。如图是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图。

(1)免疫学称细胞A为______，该细胞的免疫作用被称为________免疫。
(2)过程①至②获取的抗体称为_________，其中①是___________过程，此过程常在_______诱导下完成，Y细胞称为____________。
(3)图示过程所采用的生物工程技术包括____________。
①细胞培养     ②细胞融合     ③细胞核移植     ④干细胞技术     ⑤转基因技术