【推荐3】某种类型的白血病由蛋白P引发，蛋白UBC可使P被蛋白酶识别并降解，药物A可通过影响这一过程对该病起到治疗作用。为探索药物A治疗该病的机理，需构建重组载体以获得融合蛋白FLAG-P和FLAG-P△。P△是缺失特定氨基酸序列的P，FLAG是一种短肽，连接在P或P△的氨基端，使融合蛋白能与含有FLAG抗体的介质结合，但不影响P或P△的功能。
(1)为构建重组载体，需先设计引物，通过PCR特异性扩增P基因。用于扩增P基因的引物需满足的条件是_______、为使PCR产物能被限制酶切割，需在引物上添加相应的限制酶识别序列，该限制酶识别序列应添加在引物的______（填“3'端”或“5'端”）。
(2)PCR扩增得到的P基因经酶切连接插入载体后，与编码FLAG的序列形成一个融合基因，如图甲所示，其中“ATGTGCA”为P基因编码链起始序列。将该重组载体导入细胞后，融合基因转录出的mRNA序列正确，翻译出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正确，但P基因对应的氨基酸序列与P不同。据图甲分析，出现该问题的原因是______。修改扩增P基因时使用的带有EcoRⅠ识别序列的引物来解决该问题，具体修改方案是______。

(3)融合蛋白表达成功后，将FLAG-P、FLAG-P△、药物A和UBC按照图乙中的组合方式分成5组。各组样品混匀后分别流经含FLAG抗体的介质，分离出与介质结合的物质并用UBC抗体检测，检测结果如图丙所示。已知FLAG-P和FLAG-P△不能降解UBC，由①②③组结果的差异推测，药物A的作用是______；由②④组或③⑤组的差异推测，P△中缺失的特定序列的作用是______。

(4)根据以上结果推测，药物A治疗该病的机理是______。

【推荐3】“日出而作，日落而息”是人类的生活规律。实际上，地球上的生物都表现出一种昼夜节律。为深入了解昼夜节律，科学人员以果蝇作为实验材料进行了研究。
(1)用甲磺酸乙酯处理野生型雄果蝇以获得昼夜节律突变体， 将经过处理的雄果蝇和一种特殊的X^XY雌果蝇（两条X染色体连在一起，不能分开）进行杂交，在该杂交实验中，亲本雌果蝇可以产生      。

A．2种配子，比例为1：1	B．2种配子，比例为2：1
C．2种配子，比例为1：2	D．3种配子，比例为1：2：1

(2)从F₁中筛选昼夜节律突变体。已知XXX和YY型果蝇死亡，则F₁中没有染色体变异的个体为____（编号选填）
①雄性                            ②雌性                            ③雌雄都有
(3)若F₁雄蝇昼夜节律都异常，雌蝇都正常，则可推断控制果蝇昼夜节律的基因per位于_________染色体上。
(4)野生型果蝇的昼夜节律为24h,某科研小组筛选出昼夜节律分别为28h（长节律）、19h（短节律）和无节律3种突变体以果蝇群体每小时羽化个体数作为昼夜节律的观测指标进行研究，其结果如图所示，图A对应野生型果蝇的节律，则图 B~D中表示短节律和无节律突变体的分别是________、________。

(5)以上3种突变体的相关突变基因（per^L(长节律)、per^S(短节律)和per⁰(无节律)）相对per都为隐性基因且均位于与per基因所在的染色体相同，但不能确定它们是否由同一个per基因突变产生（即是否互为等位基因）。科学家将长节律雄蝇和携带无节律基因的雌蝇杂交，培育双per突变杂合体：若per^L和per⁰为等位基因，则双per突变杂合子雌蝇的基因型可表示为X^perLX^per0,其性状应为________（编号选填填①“节律正常”或②“节律异常”）；若为非等位基因，则相关基因在该雌蝇染色体上的分布情况为下图中的_________，该雌蝇性状应与第一种假设相反。

(6)经实验确定上述的第一种假设正确，这体现了基因突变___________的特点。基因测序发现per^S、per^L和per⁰基因都只有一个碱基对发生了替换，但只有per⁰突变体完全丧失了昼夜节律，请推测per⁰突变体产生的原因：_______________________________。

【推荐2】基因工程自20世纪70年代兴起后，在农牧业、医药卫生和食品工业等方面，展示出广阔的前景。下图是通过基因工程获得转基因生物或产品的流程图，请结合相关知识回答下列问题：

(1)转基因生物反应器是指利用基因工程技术手段将外源基因转化到受体中进行高效表达，从而获得具有重要应用价值的表达产物的生命系统，包括转基因动物、转基因植物和转基因微生物。
① 若利用图示流程构建小鼠乳腺生物反应器批量生产人抗利尿激素，应先从人体________细胞中获取总RNA，通过反转录获得cDNA，再PCR后获得抗利尿激素基因。一条单链cDNA在PCR仪中进行n次循环，需要消耗________个引物。构建的表达载体导入的受体细胞是________。膀胱反应器有着和乳腺反应器一样的优点：收集产物蛋白比较容易，不会对动物造成伤害。此外膀胱生物反应器还具有的显著优势在于不受转基因动物的________(答2点即可)的限制，而且从尿中提取蛋白质比在乳汁中提取简便、高效。
② 若图中的受体细胞是大肠杆菌，通常用Ca^2＋处理大肠杆菌，其目的是使大肠杆菌处于感受态，有利于________。理论上制备能分泌抗利尿激素的“工程菌株”时，酵母菌比大肠杆菌更适合作为受体细胞，从细胞结构与功能的角度分析，原因是______________________。
(2)全球新冠疫情形势依然非常严峻，新冠病毒疫苗的研制和新冠病毒的快速检测的研究均已有所突破。
① 目前新冠疫苗有灭活疫苗、基因疫苗、蛋白疫苗等。利用图示流程制备新冠病毒S蛋白疫苗。图中质粒A上m、n分别是启动子和终止子，箭头处是限制酶的切点(NcoⅠ：5′—C^↓CATGG—3′；NheⅠ：5′—G^↓GATCC—3′)，根据S蛋白的RNA制备的目的基因S无法与载体A连接，需要在S基因两侧加接末端，若b链处加接末端5′—GATC，则在a链处加接末端5′—________。由图推测，目的基因S转录的模板链是________(填“a链”或“b链”)。
② 2022年3月11日，国家卫健委印发《新冠病毒抗原检测应用方案(试行)》，增加抗原检测作为核酸检测的补充手段。抗原检测采用双抗体夹心法，其原理如下图。结合垫处含有足量的、可移动的、与胶体金结合的抗体1，T处固定有抗体2，抗体1和抗体2与新冠病毒表面同一抗原N蛋白的不同位点发生特异性结合，呈红色。C处固定有抗体1的抗体，与抗体1结合也呈红色。

检测过程中反复进行了抗原—抗体的特异性结合，若检测结果为阳性，则过程中此特异性结合共发生______次。若待测样本中不含新冠病毒，显色结果为______，结果为阴性。
③ 利用单克隆抗体制备技术制备试剂盒中的抗体1。先给小鼠注射纯化的N抗原蛋白，一段时间后，从小鼠的________(免疫器官)中获取已免疫的B淋巴细胞，将获得的细胞与骨髓瘤细胞融合，再经过选择培养基筛选、________，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞，再经体外培养或注射到小鼠腹腔内培养，最终获得抗N抗原蛋白的单克隆抗体。

【推荐3】T-2毒素是一种常见的霉菌毒素，可通过污染饲料引起畜禽中毒反应。CYP3A是猪体内降解T-2毒素的关键酶，T-2毒素可诱导其表达水平升高。

(1)T-2毒素是一种脂溶性小分子，以________方式进入细胞。
(2)CCAAT box和GC box是CYP3A基因启动子上游的两个调控序列，研究者将不同调控序列分别和CYP3A基因启动子及荧光素酶基因（LUC基因）连接构建表达载体，导入猪肝细胞，实验组培养基中加入T-2毒素，对照组的处理是________。24h后检测LUC酶活性，计算启动子活性相对值，结果如图1。据图1可知，这两个调控序列是CYP3A基因响应T-2毒素的核心元件，理由是________。
(3)NF-Y和Sp1两种蛋白均参与T-2毒素对CYP3A的诱导。已有研究表明，GC box是Sp1的结合位点。研究者推测，NF-Y通过与CCAAT box结合，与Sp1共同调控CYP3A基因的表达。
①依据CCAAT box序列，研究者制备NF-Y结合位点野生型及突变型探针，分别与猪肝细胞核蛋白提取物混合，结果如图2。结果证明CCAAT box是NF-Y的结合位点。请解释第4、5组实验现象出现的原因____。
②抑制猪肝细胞中NF-Y或Sp1的表达，发现CYP3A的mRNA水平显著下调，说明NF-Y和Sp1均能够________猪CYP3A基因的表达。CCAAT box和GC box在DNA上的位置很近，研究者改变二者的距离，并检测CYP3A基因的启动子活性，发现延长或缩短它们之间的距离都会________，这一结果支持了NF-Y和Sp1通过互作共同发挥调控功能的推测。
(4)N-乙酰葡萄糖胺转移酶（OGT）促进Sp1的糖基化修饰水平，抑制Sp1的转录调控功能；O-糖苷酶（OGA）可以使Sp1去糖基化修饰，增强Sp1与互作蛋白的互作。研究者用T-2毒素处理猪肝细胞，检测OGT和OGA的表达量，结果如图3。结合图3及上述系列实验结果，请阐述T-2毒素进入猪体内后的代谢调控机制_______。