【推荐1】下图（a）中的三个DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体示意图（载体上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切点是唯一的）。

根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）经BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被__________酶切后的产物连接，理由是_______________。
（2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图（c）所示。这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有____，不能表达的原因是________________________。

（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有_________和__________。

【推荐2】基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA重组原理，用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。在后基因组时代，研究的重点是利用转基因动物或基因敲除的动物研究基因的功能，运用基因重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如下图所示。请回答下列问题：

（1）在把目的基因导入受体细胞前，应选择一个合适的_____与之结合，在这一过程中所需要的工具酶是限制性内切酶和_____。
（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则一般是通过病毒感染或显微注射技术将目的基因导入受体细胞，选择的受体细胞应该是_____。
（3）在此类基因操作中，通常可以用水母的发光蛋白作为标记物。水母发光蛋白有发光环，能在一定条件下发出荧光，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是(      )

A．促使目的基因导入受体细胞中	B．促使目的基因在寄主细胞中复制
C．使目的基因的转移容易被检测出来	D．使目的基因容易表达成功

（4）按上述操作获得的转基因小鼠是杂合子，如果想获得一个目的基因纯合的个体，以研究该种动物体内靶基因的功能，应该如何进行下一步实验？__________

【推荐3】玉米是我国主要的谷物之一，每年的需求量都很大，但玉米在苗期、灌浆期等时期会遭受到病虫害，这会严重影响玉米的产量和品质。科研人员现利用基因工程技术构建具有抗病基因NPR1和抗虫基因Cry1Ab13-1的双价表达载体，培育新的抗病、抗虫玉米品种。请回答下列问题：
   
注：LB、RB为左右边界，NOS为终止子，35s为启动子。
(1)基因工程的操作程序中，核心步骤是____________。
(2)若利用农杆菌转化法将目的基因导入玉米体细胞中，需要将目的基因插入Ti质粒的______上，构建重组表达载体。当农杆菌侵染玉米细胞后，将目的基因整合到______上，从而获得转基因植株。bar基因是草甘膦抗性基因，它在转基因玉米培育过程中的作用是________________________。
(3)为检测抗病基因NPR1和抗虫基因CrylAb13-1是否导入玉米细胞，可采用PCR技术进行检测。在该反应体系中，应加入待测玉米细胞的______、NPR1基因和CrylAb13-1基因的______、耐高温的DNA聚合酶、dNTP等物质，若出现阳性反应，则说明导入成功。除了要进行分子水平的检测外，还要进行个体水平的鉴定，即对植株进行______实验。

【推荐1】慢病毒载体可有效感染肝细胞、肿瘤细胞等多种细胞，目前已成为基因治疗领域最有前景的载体之一、如图为慢病毒包装及侵染过程，已知转移质粒携带目的基因，包装质粒携带慢病毒的结构基因和逆转录酶基因，包膜质粒携带糖蛋白基因。

(1)由于人们对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚，因此在使用合成培养基培养慢病毒宿主细胞时通常需要加入_____；为防止有害代谢物的积累，可采用的方法是_____。
(2)图中共转染肝细胞属于基因工程步骤中的_____。
(3)电泳结果的差异主要_____（填“是”或“不是”）由于基因的选择性表达导致的。
(4)包膜质粒上的糖蛋白基因不能作为标记基因，其原因是_____。
(5)线粒体受损会引起肝细胞死亡和肝衰竭，主要与缺乏能量供应有关。科研人员将线粒体与人工合成的蛋白质A混合并纯化形成复合物，将复合物通过静脉注射，靶向递送至活体大鼠的肝脏。关于上述研究，下列推测合理的有_____。

A．蛋白质A可能与肝细胞特异性识别有关

B．该复合物可提高肝细胞内丙酮酸氧化分解的速率

C．口服该复合物可以达到相同的效果

D．该复合物进入肝细胞依赖于细胞膜具有一定的流动性

【推荐2】随着基因工程等现代生物技术的发展，动物细胞工程的理论和应用均获得了突破性的进展。图为动物细胞工程涉及的主要技术领域。回答下列问题：
　　　　　　　　　　　
（1）在动物细胞培养过程中，动物细胞在培养瓶中进行悬液培养时会出现___________现象。若要传代培养，需要用胰蛋白酶处理，获得单个的成纤维细胞悬浮液。但是控制好处理时间，原因是_____________________。
（2）目前，用于基因治疗的基因主要有三类：功能正常的基因、___________及蛋白酶基因。
（3）灭活的病毒诱导细胞融合的原理是：病毒表面含有的____________能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝聚，细胞膜上的____________重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。
（4）试管牛培育过程中，体外受精之前通常采用__________________法对采集的良种公牛精子进行获能处理，诱导精子获能。精子和卵子在发生上的重要区别是哺乳动物卵泡的形成和在卵巢内的储备是在_________________完成的。
（5）为解决不孕夫妇的生育问题而出现的“试管婴儿”，与教材中“设计试管婴儿”相比，一般不需要经过______________这一步骤。你对设计试管婴儿技术的观点是支持还是不支持？请说明理由____________________ 。
（6）若考虑环境承载力，克隆动物不宜放置到自然环境中，这遵循了生态工程的________原理。

【推荐3】人的HPRT基因缺陷（HPRT－）细胞和小鼠的TK基因缺陷（TK－）细胞在HAT培养基中都不能存活。杂种细胞在分裂中随机丢失人的染色体，但保留所有的鼠染色体。因此，利用人—鼠细胞融合技术可以将人类基因定位于特定的染色体上。

(1)将人的HPRT－细胞与小鼠的TK－细胞用________促进融合，然后培养在________培养基（HAT）中，最终筛选出人—鼠杂种细胞。
(2)将存活下来的杂种细胞进行单克隆培养，获得不同的细胞株，用________染色后镜检，观察结果如下：由此可推测________基因在________染色体上。

细胞株编号	1	2	3	4	5	6
所含人染色体编号	11，14，17，22	7，11， 14，17	5，7， 17，21	2，9， 11，17	5，17， 18，20	2，5， 17，19

(3)如果要确定人鸟苷酸（UMP）激酶基因所在染色体，应选择UMP激酶缺陷的____（填“人”或“鼠”）细胞与相应细胞杂交，这样的方法_____（填“能”或“不能”）对小鼠的基因进行定位。
(4)经过基因测序发现UMP激酶缺陷是因为编码它的基因中部的部分碱基替换造成的，结果可能导致（          ）

A．转录不能进行

B．合成的蛋白质分子缺少部分氨基酸序列

C．合成的蛋白质分子增加部分氨基酸序列

D．合成的蛋白质分子氨基酸数目不变

【推荐1】2017年11月27日世界上首个体细胞克隆猴“中中”诞生，12月5日第二个克隆猴“华华”诞生，该成果标志中国率先开启了以体细胞克隆猴作为实验动物模型的新时代，实现了我国在非人灵长类研究领域由国际“并跑”到“领跑”的转变。据此回答问题。
（1）“中中”和“华华”的诞生，体现出动物细胞的___________具有全能性，克隆技术在繁殖类型上属___________；非人灵长类克隆技术实践日益成熟对人类治疗性克隆具有重要意义，但我国政府一再重申___________、___________、___________、不接受任何生殖性克隆人的实验。
（2）相对于植物克隆而言，动物尤其是高等动物的克隆比较困难，原因是___________，继而在克隆过程中需要使用___________，原因是___________。
（3）在干细胞研究领域中，科学家裴端卿的团队用人的尿液在小鼠体内培育出了人再生牙齿，目前他们已经能够将尿液中提取的多能干细胞与滋养细胞共同培养，或在培养液中加入___________，如________等物质可进一步使之变成血液细胞、骨细胞、皮肤细胞、肝细胞以及神经细胞等多种组织细胞。

【推荐2】以下是有关现代生物科技的两个问题，请回答:
I.下面是与动物细胞工程有关的问题，请分析回答：
（1）在进行动物细胞培养时，首先要将动物组织剪碎，然后用_____处理，以使其分散成_____，制成细胞悬液。
（2）气体环境中 CO₂ 的作用是_____。
（3）应用于核移植的供体细胞一般选用传代 10 代以内的细胞，原因是 10 代以后细胞可能发生_________。
（4）单克隆抗体与常规抗体相比，具有_____的特点。单克隆抗体的制备过程需要经过选择性培养获得杂交瘤细胞，还需进行_________和_____，经过多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。
II 转基因抗病香蕉的培育过程如下图所示，图中 PstI、SmaI、EcoRI，ApaI 等在质粒和抗病基因上的箭头表示限制酶的切割位点。下图表示四种限制酶的识别序列及酶切点。

限制酶	PstI	SmaI	EcoRI	ApaI
识别序列 及酶切位点	—CTGCA↓G— —G↑ACGTC—	—CCC↓GGG— —GGG↑CCC—	—G↓AATTC— —CTTAA↑G—	—GGGCC↓C— —C↑CCGGG—

（1）若要获得抗病基因，能否用限制酶 SmaI 对图中对应的位点进行切割？_________。要获得含抗病基因的重组质粒能否用 PstI、ApaI 限制酶切割质粒？_____。
（2）卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，根据这一原理可以利用含卡那霉素的培养基筛选已导入重组质粒的香蕉细胞。由此推断重组质粒中应含有_____基因，作为标记基因。
（3）②、③阶段是否可使用同种培养基?___________。

【推荐3】治疗性克隆对解决供体器官缺乏和器官移植后免疫排斥反应具有重要意义，基本过程如下：

（1）过程①②依次采用了细胞工程的_________技术及胚胎工程的早期胚胎培养技术，图中采集到的卵母细胞必须培养到__________________（填时期）才能去除细胞核。
（2）进行动物细胞体外培养，首先应保证被培养的细胞处在____________的环境中，此外，应___________，以便清除代谢产物，防止________________________________。
（3）据图可知胚胎干细胞可取自囊胚的_________________，由于胚胎干细胞在功能上具有发育的全能性，即____________________________________________________________________。若将图中获得的组织器官移植给______________________（填“个体A”或“个体B”），则发生免疫排斥反应的可能性很小。

【推荐1】据图回答下列问题：

(1)①表示________技术，捐献卵母细胞时，通常给捐献者注射激素使其______。
(2)②过程需在培养液中添加抗生素，目的是________；进行③过程前需对精子进行体外培养，目的是________；⑤过程表示________。
(3)已知母亲（甲）患有线粒体肌病（一种线粒体基因缺陷造成的疾病），若母亲（甲）自然受孕，其子女患该病的情况是____________________________，“三亲婴儿”技术能有效避免上述情况发生，原因是____________________。

【推荐2】因为在人类试管受精疗法上的卓越贡献，英国科学家罗伯特·爱德华兹获得2010年度诺贝尔生理学或医学奖。如图为试管婴儿的流程示意图（数字表示相应的操作过程），请据图回答问题。

(1)①②分别表示_____、_____。
(2)采集卵母细胞时，需使用_____对供体进行处理，目的是_____。
(3)进行胚胎早期培养时，培养液的主要成分包括水、无机盐、有机物、维生素、激素、_____、核苷酸，此处还需要添加_____。
(4)②操作的实质是_____。
(5)移入子宫内的胚胎能够存活的生理基础是_____。
(6)某夫妇希望通过该项技术得到双胞胎或多胞胎，科学家需要进行的技术操作是_____，如果此操作时在囊胚时期进行，需要注意的是_____。