【推荐1】科研人员为研究二甲双胍对人胰腺癌细胞增殖的影响，完成如下实验。
（1）癌细胞的增殖特点是________。细胞周期是指从一次分裂完成时开始，到下一次分裂________时为止，包括分裂间期和分裂期（M）两个阶段，其中分裂间期完成________，包括G₁期、S期和G₂期。
（2）科研人员用不同浓度二甲双胍处理胰腺癌细胞48小时，测定并统计得到图１所示结果。基因P是一种新发现的抑癌基因。科研人员进一步测定，用不同浓度二甲双胍处理的胰腺癌细胞中基因P的表达量，结果见图2。

①据图1分析，8．0 mmol二甲双胍处理胰腺癌细胞，可将其阻滞于________期，从而起到________胰腺癌细胞增殖的作用。
②据图2推测，二甲双胍能够________基因P的表达，从而________。
（3）综上所述，科研人员是从分子与________水平研究二甲双胍对胰腺癌细胞的影响机制，为后续癌症治疗提供研究的方向。

【推荐2】A、B、C三图是不同生物细胞分裂图，据图回答下列问题：

（1）C图表示的是__________（填“动物”或“植物”）细胞的有丝分裂，判断依据是____________________。
（2）A图细胞处于__________（填“有丝分裂”或“减数第1次分裂”）的________期，图中共有DNA分子________个，染色单体________个，该种类的生物体细胞中含有染色体________条。
（3）B细胞与A细胞有丝分裂的不同点是由__________发出星射线，形成纺锤体。

【推荐3】多不饱和脂肪酸需要从膳食中摄取，而不能被人体直接合成。科学家通过转基因手段将-6脂肪酸脱氢酶基因 (FAT1)整合到肉牛基因组，以期提高肉牛体内的多不饱和脂肪酸含量，促进人体健康。请回答下列问题：
（1）将-6脂肪酸脱氢酶基因（FAT1)导入到肉牛细胞中常用的方法是____________，在用PCR技术扩增目的基因时，需要的条件除扩增缓冲液、模板DNA、4种原料和能量外，还需要____________。
（2）构建好的基因表达载体主要包括复制原点、启动子、目的基因、终止子和标记基因，其中启动子功能是____________。
（3）哺乳动物的脂肪细胞来源于前脂肪细胞，脂肪组织体积增加是前脂肪细胞____________和脂肪细胞____________的结果。
（4）在体外培养前脂肪细胞，需过滤脂肪组织血管基质，并经____________消化而得到单个前脂肪细胞，进行原代培养。体外培养细胞的操作及培养过程均需要在_____________条件下进行。成熟脂肪组织细胞间质少、细胞松散，所以随着前脂肪细胞的分化，细胞贴壁生长性能_______________________。

【推荐1】α—抗胰蛋白酶是一种主要由肝细胞合成的血浆蛋白，具有维持内环境稳定的功能。科研人员利用乳腺生物反应器获得了α—抗胰蛋白酶。回答下列问题：
(1)将人正常干细胞系L—02培养在某动物细胞培养基中，在37℃、5％CO₂的培养箱中培养。CO₂的主要作用是____________。待细胞培养至对数生长末期，用______酶消化，进行细胞计数和离心收集，提取RNA，经____________（填过程）最终获得α—抗胰蛋白酶基因。
(2)利用PCR技术扩增α—抗胰蛋白酶基因时，科研人员在两个引物的______（填“5＇端”或“3＇端”）各添加一种限制酶的酶切位点，在该端添加的理由是____________。α—抗胰蛋白酶基因两端添加不同的限制酶切割位点的目的是____________。
(3)将α—抗胰蛋白酶基因与牛乳腺中______的启动子等调控组件重组在一起，构建成基因表达载体。若将α—抗胰蛋白酶基因直接导入牛受精卵中，往往不能获得所需的转基因牛，理由是____________。
(4)将含基因表达载体的受精卵置于早期胚胎培养液中进行培养，早期胚胎进行移植前，需进行性别鉴定。性别鉴定的操作思路是__________________。
(5)转基因牛成年后需对其α—抗胰蛋白酶基因的表达产物进行检测，一般采用______法。

【推荐3】回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与微生物利用和食醋制作有关的问题：
（1）用粮食制作食醋时，甘薯、高粱等粮食经磨粉后加水蒸熟，一方面可____________，另一方面可促使淀粉形成____________，加速此后的____________及酒精发酵过程，当发酵液中酒精含量达到6%～7%时可转入醋酸发酵。
（2）醋杆菌是醋酸发酵的常用微生物，在____________条件下能将酒精氧化为醋酸，醋杆菌可以从老陈醋中分离纯化获得，通常的方法是将老陈醋稀释后涂布在专用培养基上进行____________分离与菌种鉴定，获得的目的菌株需接种在____________培养基上并保藏在4℃冰箱中。
（3）农村土法酿制食醋通常使用____________替代醋杆菌发酵制醋，发酵后期加入一定量的食盐______（抑制/促进）微生物的生命活动，提高食醋产量并改善食醋风味。
（二）回答与动物克隆有关的问题：

（1）单个细胞M在特定培养基上经___________的支持生长，繁衍成一个新的细胞群体的技术称为___________。
（2）细胞M和细胞N在灭活的仙台病毒、___________等的介导下，可相互融合形成杂交细胞X，检测细胞X特定染色体丢失与特定蛋白质减少的对应关系可进行___________。
（3）若上图表示单克隆抗体的制备过程，杂交细胞需用特定的选择性培养基进行第一次筛选，目的是保留
___________细胞，除去其他细胞。经上述筛选获得的细胞产生的抗体还不是单克隆抗体，这是因为_____________。
（4）若上图表示单克隆抗体的制备过程，图中④可表示将细胞Y注射到小鼠_________内，之后从相应液体中提取单克隆抗体。医学实践发现，病人多次使用图示方法生产的动物源抗体进行治疗，疗效逐渐减弱或消失，推测其原因是_________。

【推荐1】回答下列有关细胞的问题
T细胞是机体内的一种免疫细胞，T淋巴细胞在长时间持续的抗原（可诱发免疫反应的物质）刺激下可出现功能障碍，一般表现为增殖能力丧失。癌症（恶性肿瘤）患者体内的肿瘤产生及形成的异常内环境，称为肿瘤微环境。肿瘤微环境很容易导致T细胞耗竭，从而引发免疫功能障碍。
低氧会导致线粒体损伤，线粒体损伤或衰老后会释放mtROS。细胞为了自我保护，会进行线粒体自噬，即溶酶体分解衰老或损伤的线粒体。近期研究表明，线粒体自噬和T细胞耗竭有一定的关联：

(1)图1中①是_________（细胞器），它的功能是_______________________
(2)T细胞可通过胞吐释放淋巴因子，体现了细胞膜的____________。
(3)葡萄糖转运蛋白（Glut1蛋白）是葡萄糖进入T淋巴细胞的“必经之路”，下列叙述中，正确的是（       ）（多选）

A．葡萄糖转运蛋白属于膜蛋白

B．葡萄糖进入T淋巴细胞的跨膜运输方式与进入红细胞相同

C．葡萄糖进入T淋巴细胞后，在线粒体中被氧化分解

D．葡萄糖吸收速度与膜上Glut1蛋白的数量有关

(4)根据图1和图2提供的信息，结合所学知识，判断下列叙述中，正确的是（       ）（多选）

A．与正常环境相比，肿瘤微环境下细胞膜上Glut1蛋白数量增加

B．肿瘤微环境下，细胞吸收更多葡萄糖，所以可生成更多ATP

C．低氧导致线粒体受损，细胞有氧呼吸减弱，无氧呼吸增强

D．低氧可以直接影响有氧呼吸过程中线粒体内膜上的反应

(5)结合图1和图2，阐述肿瘤微环境下如何导致T细胞耗竭？_______________
上述线粒体自噬过程中，溶酶体起到重要作用。在酵母菌中，液泡的功能类似于动物细胞的溶酶体，可进行细胞内“消化”。API蛋白是一种存在于酵母菌液泡中的蛋白质，前体API蛋白进入液泡后才能形成成熟蛋白。已知前体API蛋白通过生物膜包被的小泡进入液泡的途径分为饥饿和营养充足两种情况（如图3）。

(6)在营养充足时，酵母菌细胞质中会形成体积较小的Cvt小泡，该小泡与液泡特异结合与膜上_______________有关。
(7)在饥饿时，细胞质中会形成较大的双层膜包被的自噬小泡，自噬小泡携带着API蛋白及部分细胞质基质和部分细胞器与液泡膜融合。相较于营养充足时的Cvt途径，饥饿时发生的细胞自噬的意义是___________________________。
(8)像溶酶体、液泡等含有多种水解酶的细胞结构，自身膜却不会被这些水解酶分解，请你尝试提出一种假说，解释这种现象。_________________________________
(9)酵母菌往往聚集在一起生活，在营养物质匮乏状态下，酵母菌菌落中衰老的个体会发生程序性死亡，下列相关叙述正确的是（       ）（多选）

A．程序性死亡方式是机体自主性和生理性的

B．营养匮乏下，酵母菌程序性死亡，是一种被动的死亡现象

C．程序性死亡的细胞，内容物释放到细胞外，会对周围健康细胞造成影响

D．酵母菌细胞增殖过程染色体复制后精确的平分到两个子细胞中

【推荐2】糖酵解是细胞呼吸的第一阶段。下图表示糖酵解过程中物质变化，以及糖酵解过程中部分物质与其他物质的转化关系。请回答下列问题：

(1)糖酵解发生的场所是______。图中“？”表示的物质应是______。
(2)据图分析，1mol葡萄糖分解为丙酮酸的过程将______kJ的能量积累于ATP中。
(3)下列细胞能进行糖酵解的有______（填序号）。
①蛔虫       ②破伤风杆菌       ③人成熟红细胞       ④马铃薯块茎细胞
(4)据图分析，糖酵解的生物学意义是______。

【推荐3】肝癌在我国的发病率高，容易复发，远期疗效不满意。研究人员对肝癌细胞的结构及代谢进行了相关的研究。
（1）癌细胞有___________的特点，肿瘤恶性增殖往往___________血管新生的速度，随着细胞数目增多和体积增大，恶性实体肿瘤内部逐渐形成慢性营养缺乏的微环境，因此肿瘤细胞需要通过调整细胞代谢才能继续生存。
（2）线粒体是调控细胞代谢最重要的细胞器，通过不断地分裂和融合调控自身功能，并对外界刺激做出适应性反应。下图是细胞呼吸及线粒体融合和分裂的示意图：

①葡萄糖在___________中分解为[H]和A，物质A进入线粒体彻底氧化分解。线粒体内膜上分布的呼吸链复合体是参与有氧呼吸第三阶段的酶,内膜向内折叠形成嵴的意义是___________________________。
②由图可知线粒体外膜上的 Mfn1/Mfn2 蛋白、内膜融合蛋白___________的作用实现了线粒体膜的融合，线粒体的长度明显变长。细胞质基质中DRP1的S616位点磷酸化，DRP1定位于线粒体外膜上，促进_______________。
（3）已有研究发现肝癌肿瘤中心区域细胞中线粒体融合增强，线粒体长度明显长于边缘区域细胞，这些变化与肝癌细胞适应营养缺乏有关。为研究在营养缺乏时线粒体融合对肝癌细胞糖代谢的调控，研究者用肝癌细胞进行了实验，实验结果如下表：

指标 组别                 相对值	细胞耗氧速率	线粒体ATP产生量	胞外乳酸水平	线粒体嵴密度	呼吸链复合体的活性	乳酸脱氢酶量
甲组：常规培养组	4．2	1．0	0．35	10．1	0．91	1．01
乙组：营养缺乏组	5．6	1．4	0．28	17．5	2．39	0．25
丙组：营养缺乏+抑制DRP1S637磷酸化	3．1	0．8	0．38	9．8	1．22	1．22

注：线粒体嵴的密度=嵴的数目/线粒体长度
丙组抑制 DRP1^S637磷酸化的目的是______________________。根据实验结果并结合（2），完善肝癌细胞在营养缺乏条件下的代谢调控途径：肝癌细胞在营养缺乏时，_____________使线粒体融合增强，从而使线粒体嵴密度增加、呼吸链复合体的活性增加，有氧呼吸增强；同时______________________，无氧呼吸减弱，细胞产能效率提高，从而适应营养缺乏环境。

【推荐1】 HIV通过识别T细胞表面特有的蛋白质来侵染T细胞。2018年11月，有学者宣布，一对经过基因编辑的婴儿在中国健康诞生，这对婴儿的一个基因被切除，使其出生后即能抵抗HIV。其使用的是CRISPR—Cas9基因编辑技术，下图为Cas9蛋白依据sgRNA片段切割DNA示意图（不同的sgRNA可以识别不同的DNA序列）。

请回答下列问题：
（1）DNA重组技术主要用到的工具酶包括DNA连接酶和_______________，图中充当该酶的物质是_________________。
（2）Cas9—sgRNA复合体能够精准识别某核苷酸序列的原因可能是____________。
（3）经基因编辑过的婴儿出生后能够免遭HlV侵染的直接原因是________________。
（4）在获得转基因动物时一般对受精卵进行操作，通过___________技术将含有目的基因的表达载体直接注入，目的基因进入受体细胞并表达的过程称为______________。
（5）操作后的受精卵需要先在发育培养液中继续培养以检查其____________，培养液必须添加____________等天然成分，后经____________段时间后，再经胚胎移植到雌性动物体内发育。移植胚胎能在受体内存活的原因是____________反应。
（6）基因编辑技术有着广泛的应用前景，如果将西红柿细胞中与乙烯合成的相关基因编辑切除，则这种西红柿的果实将____________，从而获得耐储存的西红柿新品种。

【推荐2】自然界中能够产生生物荧光的酶的统称为荧光素酶。荧光素酶及其合成基因在生物研究中有着广泛的利用。
(1)荧光素酶基因常被作为基因工程中的标记基因，其作用是将___________________筛选出来。
(2)下表为4种限制酶的识别序列和酶切位点，右下图为含有荧光素酶基因的DNA片段及其具有的限制酶切点。若需利用酶切法（只用一种酶）获得荧光素酶基因，最应选择的限制酶是_________。

(3)利用PCR技术扩增荧光素酶基因是利用___________的原理，使荧光素酶基因数量呈_____方式增加。
(4)迄今为止，可将上述具有荧光素酶基因的运载体导入动物细胞的技术，应用最多的、最有效的是________。经一系列步骤，将所获得的胚胎早期培养一段时间后，再移植到雌性动物的_____或子宫内，使其发育成为具有新性状的动物。
(5)囊胚阶段的胚胎进行胚胎分割，可以提高胚胎的利用率，但在进行分割时应注意___。
(6)荧光素酶在ATP的参与下，可使荧光素发出荧光。生物学研究中常利用“荧光素－荧光素酶发光法”来测定样品中ATP的含量。某研究小组对“测定ATP时所需荧光素酶溶液的最佳浓度”进行了探究。
【实验材料】1×10^－8mol/LATP标准液、缓冲溶液、70mg/L荧光素溶液（过量）、浓度分别为10、20、30、40、50、60、70mg/L的荧光素酶溶液。
【实验结果】见下图。

【实验分析与结论】
①实验过程：为使结果更加科学准确，应增设一组_____________作为对照。除题目已涉及的之外，还需要严格控制的无关变量有________________（至少写出一个）。
②实验结果：由图C可知，___________点所对应的荧光素酶浓度为最佳浓度。
(7)食品卫生检验中，可利用上述方法测定样品中细菌的ATP总含量，进而测算出细菌的数量，判断食品污染程度。测算的前提是每个细菌细胞中ATP的含量___。

【推荐3】为研究水稻D基因的功能，研究者将T-DNA插入到D基因中，致使该基因失活，失活后的基因记为d。现以野生植株和突变植株作为亲本进行杂交实验，统计母本植株的结实率，结果如下表所示。

杂交编号	亲本组合	结实数/授粉的小花数	结实率
①	♀DD×♂dd	16/158	10％
②	♀dd×♂DD	77/154	50％
③	♀DD×♂DD	71/141	50％

（1）表中数据表明，D基因失活使________配子育性降低。为确定配子育性降低是由于D基因失活造成的，可将________作为目的基因，与载体连接后，导入到________（填“野生”或“突变”）植株的幼芽经过________形成的愈伤组织中，最后观察转基因水稻配子育性是否得到恢复。
（2）用________观察并比较野生植株和突变植株的配子形成，发现D基因失活不影响二者的________分裂。
（3）进一步研究表明，配子育性降低是因为D基因失活直接导致配子本身受精能力下降。若让杂交①的F₁给杂交②的F₁授粉，预期结实率为________，所获得的F₂植株的基因型及比例为________。
（4）为验证F₂植株基因型及比例，研究者根据D基因、T-DNA的序列，设计了3种引物，如下图所示∶

随机选取F₂植株若干，提取各植株的总DNA，分别用引物“Ⅰ+Ⅲ”组合及“Ⅱ+Ⅲ”组合进行PCR，检测是否扩增（完整的T-DNA过大，不能完成PCR）。若________，则相应植株的基因型为Dd；同理可判断其他基因型，进而统计各基因型比例。
（5）研究表明D基因表达产物（D蛋白）含有WD40（氨基酸序列），而通常含有WD40的蛋白都定位在细胞核内。为探究D蛋白是否为核蛋白，研究者将D基因与黄色荧光蛋白基因融合；同时将已知的核蛋白基因与蓝色荧光蛋白基因融合。再将两种融合基因导入植物原生质体表达系统，如果________，则表明D蛋白是核蛋白。