【推荐1】口服α—干扰素在慢性乙肝、丙肝及部分肿瘤的治疗中有一定疗效。下图为科研人员制备能合成干扰素的人参愈伤组织细胞的流程。请回答下列问题：

(1)步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是______________________________。由于DNA复制时，子链只能由5'向3’方向延伸，故可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取________作为引物。PCR反应完成后，常采用______________________来鉴定PCR的产物。

(2)图示过程涉及的生物工程包括植物基因工程和植物细胞工程 ，后者利用了____________的原理。
(3)如果将干扰素基因导入哺乳动物的受精卵，早期胚胎培养至_________________阶段，然后进行胚胎移植，可从转基因动物分泌的乳汁中获得干扰素，人们把这种转基因动物称为___________。
(4)干扰素体外保存相当困难，如果将其分子上的一个半胱氨酸变成丝氨酸，就可在－70℃条件下保存半年，给广大患者带来福音。对蛋白质进行改造，应该直接对___________进行操作来实现对蛋白质的改造。

【推荐2】CAR—T细胞疗法是通过设计CAR基因，并导入癌症患者的T细胞中，使其转化为CAR—T细胞，CAR—T细胞膜上的CAR蛋白与癌细胞表面抗原特异结合后，激活CAR—T细胞使其增殖、分化，从而实现对癌细胞的特异性杀伤和记忆，主要过程如下图。
     
请回答：
(1)要获取CAR基因，可采取PCR技术进行大量扩增，前提是______________________。
(2)将CAR基因导入患者T细胞前,需完成过程①_________________，该过程所需要的酶有___________，连接形成pCDH—CAR上除了目的基因外，还有一些必须的部分，比如启动子和终止子，其中终止子的作用是_____________________________。
(3)完成过程②常用方法是_______法。此外，还可以先将CAR基因整合到逆转录病毒载体中，再利用病毒的_________性导入并将CAR基因整合到T细胞的___________上。
(4)检测CAR—T细胞中的CAR基因是否转录出了mRNA所采用的方法是___________。
(5)在将CAR—T细胞输给病人进行治疗之前，还需在实验室内进行细胞扩增培养。体外培养CAR—T细胞的培养液中除合成培养基的成分外，一般还需添加_____等天然成分，需要定期更换培养液,这样做的目的是_______________________。

【推荐1】人类疾病的转基因生物模型常用于治病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠（2N）制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示（注：基因B为高血压相关基因）。

（1）进行①过程的卵母细胞已经处于___________期，此时细胞中含__________个染色体组。受精过程中，防止多精入卵的两道屏障是透明带反应和__________。
（2）从人体细胞中获取基因B后，可以采用PCR的方法进行扩增，其原因是____________，PCR扩增目的基因的前提是要有一段____________序列，以便根据这一序列合成引物。
（3）②过程所采用的技术叫做___________法。将早期胚胎移植到代孕鼠体内时，代孕鼠对移入子宫的重组胚胎基本上不发生________________，这为重组胚胎在代孕母鼠体内的存活提供了可能。
（4）要在分子水平上检测成功导入的B基因在大鼠中是否成功表达，可采用________________________法。

【推荐2】新冠病毒的治疗和预防研究之所以进展迅速，得益于科学家们对艾滋病的防治方法的研究。早期，科学工作者从被HIV感染后自愈者的体内获取相应免疫细胞，使之与骨髓瘤细胞结合，生产HIV的抗体，具体过程见下图：

图1

（1）上述过程①的生物技术称为__________________；要获得单克隆抗体，上图1过程最关键的操作要点是：首先筛选出________________；再进一步筛选出________________。
（2）随后，下图所示的技术被运用到了HIV疫苗的研制工作中，科学家用该方法产生的疫苗进行预防接种，该技术的核心步骤为［ ］_______（［       ］中填图2中序号，                     填步骤名称），图中①过程为________________；该过程提取疫苗的化学本质为________________。与上述图1方法相比，其关键的优势是________________。

图2

（3）为获取图2中的DNA片段（目的基因），科学家需要根据____________设计引物，若有a条起始的RNA片段，经过图2的①过程，再进行PCR循环30次，理论上获得的目的基因片段数为_____________。
（4）HIV能通过细胞表面的CD4（一种受体蛋白）识别T细胞，如果给AIDS患者大量注射用CD4修饰过的红细胞，红细胞也会被HIV识别、入侵。科学家认为红细胞会成为HIV的“陷阱细胞”，可以为治疗AIDS提供新的思路，这种认知的理由是哺乳动物成熟红细胞的特点是____________________，这种特点使得入侵的HIV________________。

【推荐3】高浓度的铵盐对海水养殖中的对虾有一定的毒害作用，是制约其大规模养殖的环境因素之一，具有高降解能力的硝化细菌可有效净化水体中铵盐，降低对虾的死亡率，科研人员拟从当地对虾养殖池塘中筛选出对铵盐降解率高且稳定的硝化细菌菌株，操作流程如下图 1，请回答下列问题：

(1)为了筛选出硝化细菌，在配制选择培养基时，需要以_____为唯一氮源。
(2)已知硝化细菌是好氧性细菌，扩大培养时需要振荡的目的是增加硝化细菌与_____、_____的充分接触。
(3)纯化菌种时，按照图 1 中所示的接种方法外，接种环需要灼烧_____次，此外还可采用_____法接种。两种方法的原理相似，都是使聚集的菌种分散开，最后在平板上形成_____。为了防止杂菌污染，接种工具需要严格灭菌，并需要在超净工作台上_____旁进行操作。
(4)将等量的三种候选菌甲、乙、丙分别接入铵盐浓度为 40mg·L^-1的模拟养殖污水中，在适宜条件下培养一段时间后，结果如图 2。据图分析，应选择候选菌____________（填甲、乙或丙）作为菌种进行后续培养。
（二）基因X仅在水稻体细胞和精子中表达蛋白X，在卵细胞中不能转录。为研究基因 X表达对水稻卵细胞的影响，进行如下实验：
(5)从水稻体细胞提取基因X的mRNA，首先需破碎细胞，经离心后获得______________，利用基因X的局部特定短序列做______________，从中钓取相应mRNA经______________后获取目的基因。
(6)将基因X编码序列与Luc基因（荧光素酶基因，荧光素酶能催化荧光素产生荧光）拼接成X-Luc融合基因（表达的蛋白质能保留两种蛋白质各自的功能），并将融合基因插入到_____________的T-DNA中，利用_______________法将融合基因转入水稻愈伤组织。
(7)经修饰处理的T-DNA上______________可与卵细胞RNA聚合酶结合，从而在转基因水稻卵细胞中能表达基因X。分离并培养转基因水稻卵细胞，添加_____________即可筛选出成功表达基因X的卵细胞。
(8)水稻卵细胞在未受精时一般不进行发育，从转基因植株未成熟种子中分离出胚，观察到细胞内仅含一个染色体组，表明基因 X对水稻卵细胞的影响可能是__________________。

【推荐1】下图为利用奶牛的乳汁生产胰岛素的流程图。回答下列问题：

（1）质粒载体的基本组成单位是_______，质粒载体作为基因工程的工具，应具备的条件有_______（答出两点即可)。而作为基因表达载体，除了满足上述基本条件外，还需要具有启动子和终止子。
（2）据图分析，最好选用___________（填限制酶名称）分别切割目的基因和质粒分子。当胰岛素基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是______________________。
（3）要使胰岛素基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体，而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是______________________。将重组质粒导入受精卵的方法是_____________________；经检测，胰岛素基因已导入受体细胞的基因组中，但转基因奶牛通过乳腺生物反应器未生产出胰岛素，根据中心法则分析，其原因可能是_________________________________。
（4）通过乳腺生物反应器生产胰岛素，需提前对形成的受精卵进行筛选，保留含性染色体组组成为___________（填“XX”或“XY”）的类型。

【推荐2】基因疫苗是指将编码外源性抗原的基因导入人和动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。某科研所计划采用基因工程和胚胎工程技术培育具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛。请回答下列问题：
(1)基因表达载体的构建是基因工程的核心，一个完整的基因表达载体至少包括启动子、目的基因、________、 ________。启动子位于基因的_________，有了它才可以驱动基因转录。
(2)制备基因疫苗的基因可以从基因文库中获取，基因文库实际上是含有某种生物不同基因的许多DNA片段的____________群体。
(3)检测高产奶牛体内是否出现口蹄疫病毒的抗原蛋白，在分子水平上的检测方法是_____。
(4)胚胎工程最后一道工序的实质是___________________________
(5)为提高胚胎的利用率，可以采用胚胎分割技术，应该选用____________________的桑椹胚或囊胚进行分割。

【推荐3】转基因抗虫棉是人们应用较早的基因工程推广项目，目前转基因技术有了新的改进，如图所示，请根据所学知识回答：

（1）构建相关的目的基因表达载体时，应该选择的限制酶是__；如图，切割目的基因两侧序列和载体时用两种限制酶，相较使用同种限制酶而言，其优点是，在目的基因两侧和载体切口处可能形成不同的____，不但可以防止切割下的基因和切开的载体分别发生_____，还可以避免前者在插入载体切口处时产生与表达载体转录方向_______（填“相同”或“相反”）的连接。
（2）若目的基因最终整合到染色体上，则从棉株1、2、3中各随机取出一个叶肉细胞，其细胞核中含有的目的基因个数分别为___个。
（3）④过程通常采用__处理使染色体数恢复。取棉株2的两个体细胞融合也能得到符合生产要求的棉株3，其原理为__和__。

【推荐1】病毒病是马铃薯的主要病害，培育抗病毒的马铃薯植株可以采用基因工程技术，研究表明将感染马铃薯的病毒的蛋白质外壳基因导入马铃薯体内可以获得抗病毒的植株，该病毒的遗传物质是DNA，回答下列问题。
（1）获取病毒的蛋白质外壳基因可以用_________酶处理病毒的DNA，扩增病毒的蛋白质外壳基因可以用_________技术。
（2）将病毒的蛋白质外壳基因导入马铃薯细胞内一般采用_________法 ，这种方法是先将目的基因插入到____________上，将病毒的蛋白质外壳进导入马铃薯细胞还可以采用__________法。
（3）检测受体细胞DNA分子上是否插入了目的基因采用__________；检测目的基因是否翻译形成蛋白质采用_____________；在个体生物学水平鉴定马铃薯植株是否具有抗病毒特性的方法是_________。

【推荐2】研究表明，小鼠SF110基因能够提高动物对结核杆菌的抗性，我国某研究团队利用基因工程成功孕育出带有小鼠SF110基因的转基因牛。
(1)利用PCR技术对SF110基因进行扩增时，所需的原料为__________；加入的Taq酶与普通的DNA聚合酶相比，其特点是_________。
(2)获得转基因牛的过程中，构建的基因表达载体应包含小鼠的SF110基因及其启动子等调控元件。其中启动子的作用是__________，将该载体导入受体细胞常采用的方法是_________。经检测，用同种限制酶切割并构建的基因表达载体中，有部分基因表达载体中的SF110基因不能正确表达，最可能的原因是__________。
(3)研究者通过体外受精的方式让转基因牛产下试管牛。在体外受精前，常用__________方法处理精子，使精子获能，同时将卵母细胞培养至__________时，二者才都具备受精能力。将体外形成的受精卵移入_________中继续培养，以检查受精状况和受精卵的发育能力。

【推荐3】科研人员将抗盐基因转入普通烟草培育出抗盐烟草，图1表示该过程所用的质粒，图2表示含抗盐基因的DNA上相关限制酶的酶切位点。限制性核酸内切酶BamHⅠ、BclⅠ、Sau3AⅠ、HindⅢ，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为G↓GATCC、T↓GATCA、↓CATC、A↓AGCTT。图3表示该过程中利用含目的基因的农杆菌进行转化作用的示意图。回答下列问题：
   
(1)利用逆转录获得的目的基因和从基因组文库中获取的目的基因的主要区别是其不含_____________。
(2)在构建基因表达载体时，目的基因前需要插入启动子，其作用是_______________________________。
(3)用图中质粒和目的基因构建基因表达载体时，可以用限制酶BamHⅠ切割质粒，用限制酶Sau3AⅠ切割含目的基因的DNA片段，与单一酶切相比，这样做是为了避免______________________。
(4)将目的基因插入到植物细胞染色体的DNA上，理由是______________________。
(5)将目的基因导入植物细胞常用__________________，图3过程__________________（填序号）中发生了基因重组。