【推荐1】杀草丹是一种高效、广谱除草剂，但是残留成分对环境有较大影响。科学家分离高效降解杀草丹的微生物，对杀草丹污染的环境进行修复。
(1)为分离杀草丹降解菌，研究者进行如下操作：
① 取排污口的活性泥接种至__________的液体培养基富集培养一段时间后，通过紫外-可见分光光度法检测富集液中杀草丹的降解效果，紫外吸收图谱的结果如图1，图谱的峰形代表溶液中的溶质种类，峰值代表溶质的含量。
   
结果表明，富集液中含有能降解杀草丹的微生物，判断依据是：__________。
② 对富集液进行__________，涂布于含杀草丹的固体培养基表面，培养一段时间后，从若干菌落中挑取___________的单菌落扩大培养，并将其命名为T1。此过程使用的培养基可用___________法灭菌。
(2)根据__________可对菌株Ｔ1 初步鉴定，但还需通过分子技术扩增菌株的核糖体RNA（rRNA） 序列进一步鉴定菌株的种属，下面是三种编码rRNA的DNA片段的特点：
a：5S rDNA，序列短，遗传信息少。
b：16S rDNA，序列长度适中，含有保守区和可变区，可变区序列具有种的特异性。
c：23S rDNA，序列长，遗传信息量多，碱基突变速度较快。
应选择上述__________（填选项字母）序列设计引物PCR，并测序鉴定，理由是__________。
(3)菌株T1彻底降解杀草丹需经多个中间产物依次降解。T1进行传代培养时，发现有一菌株（Ｔ1ｍ）失去降解杀草丹的能力，但对杀草丹下游的中间产物仍具有较强降解能力。测序并比对菌株T1和Ｔ1ｍ的基因组，发现T1m缺失tmoA和tmoB基因。为探究tmoA和tmoB两基因在杀草丹降解中的作用，将不同质粒分别导入菌株，培养一段时间后，结果如图2。
   
①图中1和2菌株分别是__________。
②结合上述信息和实验结果，解释T1m对杀草丹降解能力变化的原因：______。

【推荐2】科学家利用蛋白质工程技术，研制出了赖脯胰岛素，与天然胰岛素相比，其皮下注射后易吸收、起效快。回答下列问题：
(1)蛋白质工程流程如图所示，物质a是__________，物质b是__________ 。在生产过程中，物质b可能不同，合成的蛋白质氨基酸序列和空间构象却相同，原因是__________。

(2)蛋白质工程是基因工程的延伸，基因工程中可利用PCR技术扩增目的基因，在PCR反应缓冲液中需要加入的酶是__________，反应缓冲液中引物的作用是__________。
(3)获取目的基因（S基因）后，为了成功构建重组表达载体，确保目的基因插入载体中方向正确，最好选用__________切割S基因的cDNA和载体。

(4)科研工作者利用微生物发酵生产胰岛素，选择酵母菌做受体细胞比大肠杆菌效果更好，请你从细胞结构方面说明理由：_____________________________________。

【推荐3】基因工程的关键步骤是基因表达载体的构建，人类γ基因启动子及其上游的调控序列中存在着BCL11A蛋白结合位点，该位点结合BCL11A蛋白后，γ基因的表达被抑制。为了确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置，科研人员用PCR技术扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，相关信息如图所示。请回答下列问题：

(1)基因表达载体包括复制原点、目的基因、_____________（答出3点）。据图可知，扩增的γ基因上游不同长度的片段中，扩增出最长的片段需要选用的引物组合为_____________。
(2)由于荧光蛋白基因缺少启动子，为了使荧光蛋白基因正常表达，需要在其_____________（填“Nhe I”或“Mun I”）侧接入启动子；启动子的作用是_______________________________________。
(3)构建基因表达载体的过程中，除了注意酶切后目的基因和载体露出相同的黏性末端，还需要注意连接方向以便表达。据图分析，为了使荧光蛋白基因正常表达，γ基因启动子及其上游的_____________（填“R”或“F₁”）调控序列应接在荧光蛋白基因的Mun I端，_____________（填“R”或“F₁”）调控序列应接在荧光蛋白基因的Xho I端。
(4)引物的合成是PCR成功的关键，PCR扩增时，要有_______________________________________，以便合成引物。制作引物过程中需要注意_____________之间不能有互补的序列，同一引物内部也不能有互补的序列。

【推荐1】[生物——选修3：现代生物科技专题] I。白菜与甘蓝均为二倍体，染色体数分别为20与18．科学家利用植物体细胞杂交技术培育出的“白菜—甘蓝”，具有生长期短、耐热性强和易于储藏等优点。回答下列问题：
（1）为了培养“白菜—甘蓝”，可取两者的叶片，先用_____酶去除细胞壁，获得具有活力的_____，再用化学诱导剂诱导二者融合。形成的融合细胞进一步培养形成愈伤组织，然后经过再分化形成完整的杂种植株。
（2）白菜、甘蓝有性杂交的后代是不育的，而上述杂种植株是可育的，造成这种差异的原因是在减数分裂过程中前者_____异常而后者正常。
（3）这种杂种植株可通过制作人工种子的方法来大量繁殖。经植物组织培养得到的_____等材料用人工薄膜包装后可得到人工种子。
II。下图表示用基因工程与胚胎工程培育良种牛的过程，请据图回答下列问题：

（1）④表示基因工程中_____过程。
（2）良种奶牛用促性腺激素处理的目的是_____。
（3）图中A指_____，B指_____。
（4）如果转基因牛D的牛奶中含有_____，则说明血清白蛋白基因在个体水平已表达成功。

【推荐2】Leigh氏综合症是一种攻击神经系统的严重神经障碍，其致病基因位于线粒体DNA中。一位母亲约有1/4的线粒体携带有这种致病基因，她的前两个孩子因为患有Leigh氏综合症儿夭亡。她的第三个孩子因为接受另一名女性捐赠的健康基因而成为全球首个拥有“三个父母”的男婴。请根据男婴孕育过程回答下面的问题：

(1)该母亲的前两个孩子患病天亡的原因是___________该健康男婴孕育过程中依次使用了__________、早期胚胎培养和胚胎移植等技术。
(2)图示过程中代表该母亲卵母细胞的是___(填“A”或“B”)。取卵之前,该母亲需要注射________激素。
(3)将受精卵移入发育培养液中继续培养至桑椹胚或_______，再进行胚胎移植。进行早期胚胎的体外培养时,培养液中除了含有各种无机盐、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还需添加激素和______。早期胚胎需经过_____(水平)检测合格后才能植入母亲的子宫继续发育。
(4)在胚胎孕育过程中,医疗团队特意选择了男性胚胎移入子宫发育,原因是_________。

【推荐1】CAR-T细胞疗法是通过设计CAR基因，并导入癌症患者的T细胞中，使其转化为CAR-T细胞，CAR-T细胞膜上的CAR蛋白与癌细胞表面抗原特异结合后，激活CAR-T细胞使其增殖、分化，从而实现对癌细胞的特异性杀伤和记忆，主要过程如下图。请回答：

（1）要获取CAR基因，可采取PCR技术进行大量扩增，其原理是___________________。
（2）将CAR基因导入患者T细胞前，需完成过程①，该过程所需要的酶有__________，连接形成pCDH—CAR上除了目的基因外，还有一些必须的部分，比如__________，它可使转录在需要的地方停止下来。
（3）完成过程②的常用方法是__________法，受体细胞是__________。
（4）检测CAR-T细胞能够产生CAR蛋白所采取的方法是__________。
（5）构建好的CAR-T细胞还需要再体外进行扩增，扩增时需要定期更换培养液，这样做的目的是______________________________。

【推荐2】图（a）中的三个DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制性核酸内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体的示意图（载体上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切点是唯一的）。根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）经BamHⅠ酶切后得到的目的基因（干扰素基因）可以与图（b）中表达载体被____酶切后的产物连接，理由是________。
（2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组DNA，如图（c）所示。甲、乙、丙三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有_____，不能表达的原因是____。

（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是____。
（4）为了得到实验所需的大量干扰素基因，研究人员利用PCR 技术进行扩增，可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取_______作为引物。若要将1个干扰素基因PCR扩增10 轮，则需要在缓冲液中至少加入______个引物。

（5）为检测干扰素基因是否表达，可以采用_______的方法。

【推荐3】鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草愈伤组织细胞中，经组织培养，以获得抗病毒烟草。请回答下列问题：
（1）若要体外大量合成鸡干扰素基因，可采用_______技术，该技术所使用的引物实质是_____________。
（2）构建一个完整的重组基因表达载体应该包括复制原点、启动子、目的基因、标记基因和终止子，其中启动子的作用是_______________________________________________。
（3）将重组表达载体导入农杆菌之前，需用Ca²⁺处理农杆菌，使其成为_________，以便提高转化率；重组基因表达载体导入烟草愈伤组织细胞后，该细胞主要经过_____________、___________两个阶段发育成抗病毒烟草。
（4）鸡干扰素能在烟草细胞中表达的原因是_______________________________；若要从个体水平上检测抗病毒烟草是否培育成功，可采用的方法是____________。