【推荐1】环锌指蛋白（RZFP）是一类植物在非生物逆境响应中发挥重要作用的转录因子，水稻OsRZFP34基因编码RZFP。研究人员采用逆转录定量PCR（qRT﹣PCR）技术分析了OsRZFP34在高温（42℃）、低温（4℃）和干旱（PEG）处理下的表达模式，胁迫处理样品的取样时间点为0、0.5、1、2、4、8、24h。下图是不同处理条件下的相对表达量。请回答下列问题：

（1）研究人员首先利用提取试剂提取水稻细胞中的 ______ ，在逆转录酶的催化下合成cDNA，然后根据 ______ 的cDNA序列设计qRT﹣PCR特异性引物进行扩增；PCR扩增程序为：95℃2min；95℃变性10s，60℃退火20s，68℃延伸30s，34个循环；68℃延伸2min。其中第一步95℃、2min的目的是 ______ ，温度一般不超过95℃的原因是 ______ ，34个循环后延伸2min的原因是 ______ 。
（2）Taq Man探针是定量PCR技术中常用的一种单链探针，它能与DNA的一条链配对结合，其末端连接荧光基团（R），末端连接淬灭剂（Q）。当探针完整时，R发出的荧光信号被Q吸收而不发荧光。在定量PCR扩增过程中，当Taq酶在延伸子链时遇到探针，探针就会被水解从而发出荧光，并随PCR扩增次数的增加，荧光信号 ______ 。若PCR过程共进行n次扩增，需要的荧光探针的数目是 ______ 。
（3）据图可知不同胁迫处理均能不同程度地诱导OsRZFP34的表达，其中 ______ 胁迫对OsRZFP34表达的诱导程度最强， ______ 胁迫处理24h内，OsRZFP34的表达均显著上调。
（4）进一步分析得知，上述现象与OsRZFP34基因的启动子有关。启动子是 ______ 识别和结合的部位，其通常可分为组成型启动子和诱导型启动子，组成型启动子能持续高效启动目的基因在植物各组织中的表达。据此推知OsRZFP34基因的启动子是 ______ 型启动子。

【推荐2】降钙素是一种多肽类激素，能减少骨钙流失，常用于治疗骨质疏松症。人降钙素活性很低，半衰期较短。某科研机构对降钙素基因进行改造，并与大肠杆菌DNA分子重组，成功地在大肠杆菌中得到一种活性高、半衰期长的新型降钙素。操作过程如图所示。

（1）改造新型降钙素基因的基本途径是：从预期新型降钙素的功能出发设计其化学结构，推测应有的_________________序列，找到对应的____________________序列，合成相应的DNA（基因）。
（2）图1表示人工合成新型降钙素DNA的过程：先合成两条含72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链片段（阴影部分），再利用Klenow酶补平，获得双链DNA。该方法可避免合成较长核苷酸链时容易缺失碱基的现象。从功能看，Klenow酶是一种_________________________酶，合成的双链DNA含有______________个碱基对。
（3）获得新型降钙素DNA后，常采用PCR技术扩增DNA。PCR反应包含多次循环，每次循环包括变性、复性和_______________。PCR技术使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是_______________。
（4）图2表示运用基因工程生产新型降钙素的过程。该过程利用限制酶、____酶和运载体等作为基本工具，通过一定的手段构建_____，并将其导入大肠杆菌体内实现高效表达。导入之前，要将大肠杆菌放入一定浓度的CaCl₂溶液中处理，使之成为________细胞，以提高细菌的吸收能力。
（5）科学家对降钙素基因进行重新设计、改造，生产出高活性的新型降钙素，这项生物工程技术称为________。

【推荐3】为扩大可耕地面积，增加粮食产量，沿海滩涂盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系。请据图回答下列问题：


(1)获取真核生物的基因通常采用人工合成法，通过图示中①方法合成的耐盐碱基因中是不含___的，如果要将耐盐碱基因和质粒重组，应该在基因两侧的A和B位置除了接上以上两个结构外还需分别加入EcoRI和________限制酶识别序列，这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化以及定向连接。
(2)过程②采用PCR技术扩增目的基因时，在PCR反应体系的主要成分中应该包含：扩增缓冲液（含Mg²⁺）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、TaqDNA聚合酶和引物I和引物Ⅱ，若在该反应体系中，目的基因扩增了4代，则共用了引物I________个。
(3)请画出PstI限制性核酸内切酶切割DNA形成黏性末端的过程________。
(4)图示中将基因表达载体构建完成后没有直接导入农杆菌，而是先将其导入大肠杆菌，目的是

________。

(5)在步骤⑤ ⑥过程中都需用________处理两类细菌。为了确认目的基因通过⑦过程导入植物细胞中后是否成功表达，通常从分子水平进行检测的方法是用________法。
(6)假设该抗盐碱基因D，通过基因工程导入水稻后连接到水稻的一条染色体上，则该水稻进行减数分裂的细胞在联会时有________个D基因。

【推荐1】研究发现增强子是基因转录的调控序列，它可以位于基因的上游，也可以位于基因的下游。人肺特异性X蛋白基因（LUNX基因）仅在上颚、鼻咽和气管等呼吸道部位表达，可作为非小胞肺癌诊断的标志物。为了研究LUNX基因的增强子是否具有促进基因表达的功能，以及其发挥作用的位置是位于基因的上游还是下游，科研人员首先通过PCR技术扩增了LUNX基因的3个增强子片段（E₁~E₃），然后分别连接到pGL3质粒中荧光素酶报告基因（luc+）的上游或下游，最后通过检测荧光素酶的活性进行判断。

(1)通过PCR扩增LUNX基因的增强子片段时，需要在反应体系中添加引物的原因是___________。扩增E₁片段时，需选用图1中的引物___________，为了将E1片段与pGL3质粒相连，应在引物的___________端添加限制酶切位点。
(2)构建含LUNX基因增强子的重组载体时，需要对通过（1）获得的PCR产物和图2中的pGL3质粒分别进行双酶切，这样做的目的是____________，最终构建出___________种重组载体。
(3)已知荧光素酶报告基因（luc+）的表达强度越高，荧光素酶的活性越高，该实验中各组荧光素酶活性的检测结果如下图所示。

根据实验结果推测，在E₁~E₃中___________促进基因表达的功能最强。E₁~E₃发挥作用的位置不同之处在于___________。

【推荐2】回答下列有关基因工程的问题：
(1)在基因工程中，获取目的基因的方法包括:①从基因文库中获取目的基因，②利用_____________扩增目的基因，③__________________。
(2)在基因表达载体中，启动子是_______________识别并结合的部位。若采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞，最常用的原核生物是_______________。
(3)将目的基因导入微生物常用______________处理受体细胞，使之变成感受态细胞。我国科学家发明的将目的基因导入植物细胞的方法是________________。
(4)基因工程实施时不能将目的基因连接到运载体上的标记基因中，原因是__________________。

【推荐3】除草剂的有效成分草甘膦能够专一地抑制EPSP合酶的活性，从而使植物体内多种代谢途径受到影响而导致植物死亡。草甘腾没有选择性，它在除掉杂草的同时也会使作物受损。解决这个问题的方法之一就是培育抗草甘腾的作物。我国云南大学的科研人员从青麻、长芒苋、黑麦草等生物体内获得抗草甘腾
（EPSPS）基因并利用农杆菌转化法成功培育出了抗草甘膦的油菜、玉米、棉花及烟草等。其大致流程如
图所示，回答下列问题：
   
(1)过程①称为___________。获得的抗EPSPS基因可利用___________技术大量扩增，其依据的原理是___________。
(2)选用Ti质粒作为载体，是因为___________。
(3)基因表达载体必须的结构除了目的基因、标记基因、复制原点外，还必须有___________和___________等。
(4)过程③将构建的基因表达载体导入农杆菌之前，一般先用___________处理农杆菌，目的是___________。为筛选出含重组质粒的农杆菌，应将转化的农杆菌培养在含___________的培养基上。
(5)若要从个体生物学水平鉴定培育的转基因玉米植株是否具有抗草甘膦的特性，应进行的操作是___________。

【推荐2】2019年1月24日，中科院神经科学研究所的科学家经过两年努力，利用CRISPR/Cas9技术，成功得到五只BMAL1基因被敲除的克隆猴，可作为研究生物节律紊乱等人类疾病的动物模型。如图为体细胞核移植技术培育食蟹猴的操作过程，回答下列问题。

（1）获得食蟹猴的体细胞核移植技术的难度明显高于胚胎细胞核移植，原因___________。
（2）进行过程①时，为提供成纤维细胞培养所需的无菌无毒环境，应定期更换培养基，其目的是___________。
（3）过程③是利用___________法将成纤维细胞注入食蟹猴去核的减数第二次分裂中期的卵母细胞中。
（4）过程⑤的实质是早期胚胎在___________条件下空间位置的转移。胚胎移植的方法分为_______两种。
（5）CRISPR/Cas9是生物学研究中的一项革命性技术, 其原理是由一条单链向导RNA引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割．通过设计向导RNA中20个碱基的识别序列，可人为选择DNA上的目标位点进行切割（见图）

向导RNA可在___________催化下合成。Cas9蛋白的作用是破坏DNA特定位点核苷酸之间的磷酸二酯键。将Cas9基因导入猴细胞时需要构建基因表达载体，目的是_____________。

【推荐3】蛋白质W是某种病毒的抗原。某研究小组拟仿照制备乳腺生物反应器的研究思路，制备一种膀胱生物反应器来获得W，基本过程如图所示。

回答下列问题：
(1)步骤①中需要选择的启动子是______________使目的基因能在膀胱上皮细胞中特异性表达，分泌到尿液中，随尿液排出体外。W基因的序列已知并目基因较小，那么获取W基因的方法可以是______________。
(2)①过程需要DNA连接酶，根据DNA的连接酶的来源不同，可以将这些酶分为______________和______________。构建重组表达载体中的标记基因的作用是______________。
(3)④过程的生理学基础是之一是受体对移入的外来胚胎基本______________反应，这为外来胚胎在受体子宫中存活提供可能。
(4)从上述流程可知，转基因动物发生的可遗传变异是_______________。对从尿液中提取的蛋白质还要进行检测以确定是否含有W，常采用的方法是______________。
(5)步骤④胚胎移植前是否需要对动物的性别进行鉴定______________（是/否），原因是______________。