【推荐1】亨廷顿舞蹈病是由单基因（HTT）突变导致的神经退行性疾病，中科院利用基因编辑（CRISPR/Cas9）技术首次成功培育出亨廷顿舞蹈病的基因“敲入”猪模型，为制备其它神经退行性疾病大动物模型提供了技术范本和理论依据。具体操作过程如下图：

(1)基因编辑技术所使用的CRISPR/Cas9系统需要对特定的DNA序列识别并切割，其功能类似于基因工程工具中的_____。
(2)过程①~⑥体现的生物学原理是_____。
(3)根据图1中信息，结合已有知识，基因编辑技术与转基因技术所利用的遗传学原理是_____
(4)图1中成纤维细胞中的目的基因是_____。
(5)假如上图中目的基因用J表示，其所在的DNA片段如下图2所示，图3示所用质粒的部分碱基序列。（现有4种限制酶：Msp I、BamH I、Mbo I、EcoR I，能识别的碱基序列和酶切位点分别为：C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、G↓AATTC）

构建重组质粒的过程中，切割质粒使用的限制酶是_____，处理目的基因不能使用的酶是_____。

【推荐2】回答基因工程相关的问题。
棉花是重要的经济植物，其会被害虫感染，利用基因工程培育抗虫棉花是害虫防治的有效手段。胰蛋白酶抑制剂能干扰昆虫的代谢，引起昆虫死亡，但对人体无害。科学家将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因（Pin﹣Ⅱ）通过农杆菌导入棉花细胞，培育成了抗虫棉花。图2中Ap^r表示氨苄青霉素抗性基因，Ne^r表示新霉素抗性基因，复制原点是质粒DNA复制的起点，使其能在受体细胞中存在和遗传。箭头表示识别序列完全不同的4种限制酶的酶切位点。

(1)上述转基因技术属于　　。

A．动物基因工程	B．微生物基因工程
C．植物基因工程	D．质粒基因工程

(2)上述基因工程中，用限制酶_____切割，取下目的基因，能够和图2的质粒形成重组质粒。
(3)上述基因工程中，导入受体细胞的重组DNA分子为　　。

A．目的基因+棉花基因	B．目的基因+运载体
C．目的基因+棉花基因+运载体	D．棉花基因+运载体

(4)成功导入重组质粒的细胞会表现为　　。

A．抗氨苄青霉素，不抗新霉素	B．抗氨苄青霉素，也抗新霉素
C．不抗氨苄青霉素，抗新霉素	D．不抗氨苄青霉素，也不抗新霉素

【推荐3】下面是利用基因工程、胚胎工程等技术以牛为对象进行的研究工作，请分析回答问题：
（1）基因工程的基本操作流程中，当获取目的基因后，在将其导入受体细胞前需要进行一个 重要的操作步骤，即构建______________，该步骤使用的两种工具酶分别是______________。一个完整的基因表达载体中______________是RNA聚合酶识别、结合的部位。
（2）从公牛体内采集的精子需经过______________处理，才能在体外与成熟卵细胞结合形成 受精卵。将目的基因导入受精卵中，受精卵在体外培养至早期胚胎，再移植到母牛子宫中。进行胚胎移植的优势是可以________________________________________________________。
（3）在早期胚胎时期取滋养层细胞通过______________方法进行DNA检测，来判断目的基因是否导入细胞中。外源基因是否合成相应的蛋白质，可从转基因牛中提取蛋白质，并用相应的抗体进行“_____________”杂交，若有杂交带出现，则表明牛体内的外源基因______________（填“已表达”或“未表达”）。

【推荐1】香兰素是从香荚兰豆中提取的天然香料，因产量低而价格昂贵。近年来的生产实践中常用拟无枝酸菌生产香兰素，但香兰素在香兰素脱氢酶的作用下会进一步降 解。科研人员拟通过CRISPR-Cas9系统（由一条单链向导RNA和核酸内切酶Cas9组成），敲除拟无枝酸菌的香兰素脱氢酶基因（VDH），以提高香兰素的产量。图1是选择VDH基因中特定位点进行切割的示意图，图2是设计CRISPR-Cas9系统向导RNA中的识别序列，并构建可用于敲除VDH 基因的质粒的主要过程。请回答下列问题：

(1)核酸内切酶Cas9可催化_____键的水解。利用CRISPR-Cas9系统敲除VDH基因的内部大片段属于_____（变异类型）。
(2)图2中，过程A使用的4种引物序列如下：
引物 1     5'-GAGTCGAAGCTTTTTTTGAGAGCTCGTCCCACGACG-3'
引物 2     5' -GGTCGTTGATGTCCACTTCTCGTCGTCGAG-3'
引物 3     5' -AGAAGTGGACATCAACGACCAGACGGTCAAC-3'
引物 4     5' -CGACGGCCAGTGCCAAGCTTTGCGAGCACCTGGAGAAGG-3'
①利用PCR1和PCR2分别扩增VDH基因的部分片段，获得VDH基因上游和下游同源臂（VDH-F和VDH-R），这两个PCR不能放在同一系统中同时进行，这是因为_____。
②PCR3反应系统中加入的引物有_____，此外还应加入模板DNA（VDH-F和VDH-R） 、Mg²⁺、缓冲液、_____等，适宜条件下扩增得到VDH-F和VDH-R的融合片段。
(3)图2中，完成过程B需要加入的酶有_____。将质粒2导入拟无枝酸菌前，用_____处理使菌株处于感受态，导入后将菌液利用_____法接种到添加_____的选择培养基中，培养获得多株转化菌株。

【推荐2】重组人血小板生成素（rhTPO）是一种造血生长因子，如图是科学家培育乳汁中含有rhTPO的羊的相关过程。请回答下列相关问题。

（1）利用PCR技术对目的基因进行扩增时，利用的原理是__________。设计引物是PCR技术的关键之一，某同学根据已知的rhTPO基因的核苷酸序列设计的两对引物如下图所示，其中引物对__________（填“A”或“B”）设计不合理，原因是__________。

引物对A	P1     GTCCGCTAGTGGCTGTG P2     AGCTGGCGTTTAGCCTG
引物对B	S1     AAGCCGGGCGCGCGGAA S2     TTCGGCCCGCGCGCCTT

（2）HindIII和XhoI两种限制酶切割出的黏性末端不同，将含有rhTPO基因的DNA片段和质粒都通过HindIII和XhoI切割，可以避免__________。拼接成重组质粒时，需要加入__________酶才能完成。rhTPO基因能否在羊受精卵细胞中稳定遗传的关键是__________。
（3）通常需要在胚胎移植前对早期胚胎进行性别鉴定，应从发育到__________时期的胚胎的__________中取样做DNA分析性别鉴定。
（4）为了使rhTPO基因只在羊乳腺细胞中表达，在构建基因表达载体时需要在rhTPO基因前端加上__________。移植的胚胎可以在受体母羊中存活的原因是__________。

【推荐3】养殖家禽的饲料中富含谷物，纤维素是谷物的重要成分，但家禽消化道中缺少能降解纤维素的酶，阻碍了家禽对饲料的吸收与利用。研究人员利用转基因技术改造乳酸杆菌，将其添加于饲料中，以提高家禽养殖效率。
(1)乳酸杆菌是动物胃肠道的优势细菌之一。与真核细胞相比，乳酸杆菌在结构上的主要特点是____________；家禽肠道内的乳酸杆菌代谢通过细胞呼吸产生乳酸等代谢产物，可抑制有害细菌的生长和繁殖，维持肠道的正常机能，乳酸杆菌与家禽的种间关系属于___________。
(2)枯草芽孢杆菌分泌可降解纤维素的一种酶，这种酶由W基因编码。为在乳酸杆菌中表达W基因，需使用图1中质粒为载体。图2为克隆得到的含W基因的DNA片段，W基因以乙链为转录模板链，转录时mRNA自身延伸的方向为5′→3′。

①很多启动子具有物种特异性，在图1质粒中插入W基因，其上游启动子应选择___________（填写字母）。
A.枯草芽孢杆菌启动子B.乳酸杆菌启动子C.农杆菌启动子
②根据上述信息，应使用限制酶___________切割质粒和含W基因的DNA片段，以获得能正确表达W基因的重组质粒。所得重组质粒转化乳酸杆菌后，使用含抗生素___________的培养基筛选，以得到转入W基因的乳酸杆菌。
(3)将纤维素含量为20%的培养基分为三组，实验组接种导入了重组质粒的乳酸杆菌，对照组1接种乳酸杆菌，对照组2的处理应为___________。在相同条件下培养96小时，检测培养基中纤维素的含量，结果（图3）说明___________。

(4)解决谷物中纤维素难以被消化吸收的另一思路是将W基因转入家禽中，使转基因家禽消化道特异表达能够降解纤维素的酶。上述研究方法与该思路相比，有哪些优点。___________。

【推荐1】小鼠肿瘤转移抑制基因（kissl基因）仅在特定组织中表达，在雌性激素诱导下，细胞内信号传导系统可以与kissl基因启动子P的特定区域结合，激活kissl基因的转录。

(1)利用PCR技术扩增kissl基因时，设计引物的作用是______。PCR是在PCR扩增仪中自动完成的，完成以后常采用_______来鉴定PCR的产物。
(2)据图分析，在构建kissl基因表达载体时，应使用限制酶______对图1所示质粒和图2所示含kissl基因的DNA片段分别进行切割，此过程选用这两种限制酶的原因是______。
(3)研究人员扩增了不同长度的启动子片段P₁~P₅，分别构建这些片段与绿色荧光蛋白基因融合的载体，转入体外培养_______（填“含kissl基因且能表达”或“含kissl基因不能表达”或“不含kissl基因”）的小鼠细胞中，以确定不同片段的转录活性。对导入不同启动子的细胞进行绿色荧光强度检测，结果如图所示请推测哪种启动子片段的转录活性最高，并阐释你的理由_______。根据启动子P的激活机制，推测启动子P应用于基因工程的优势是_______。

   

【推荐2】中药材半夏中的半夏凝集素（PTA）具有高效复合抗性，研究人员将PTA基因转入烟草叶绿体基因组后，积累的PTA 蛋白能够帮助烟草防治鳞翅目害虫。回答下列问题：
（1）构建PTA基因表达载体时，需要在PTA基因的首端插入__________，该序列在转录过程的作用是______________，为了便于目的基因的监测和鉴定，重组质粒上还应该具有______________________。
（2）将PTA 基因导入烟草叶肉细胞的叶绿体基因组时，不宜使用农杆菌转化法，其原因是___________，除了农杆菌转化法外，将目的基因导入植物受体细胞的方法还有_________。
（3）为了检测PTA基因是否成功导入受体细胞，需要利用_________________技术检测，该检测方法的原理是______________，若检测到PTA 基因成功导入了叶绿体基因中，但是烟草未获得防治鳞翅目害虫的能力，其原因可能是____________________。

【推荐3】世界苦荞在中国，中国苦荞在凉山。苦荞富含黄酮类化合物等营养物质，在降血糖、降血脂等方面功效显著。查尔酮合成酶（CHS）是黄酮类化合物合成的关键酶，下图为将修饰后的 CHS基因导入苦荞，培育高产黄酮苦荞品系示意图。

（1）过程①中能切开质粒的酶是__________。它能在质粒特定的部位切割的原因是_______________。
（2）图中常用的是__________培养基。 接种前，用灭菌后未接种的培养基培养一段时间，观察是否形成菌落，目的是_______________________。
（3）过程②、③分别是________和________。苦荞体细胞能培养成植株的根本原因是_________。
（4）为探究激素对于过程诱导愈伤组织的影响，某研究小组在培养基中加入6-BA和2,4─D，灭菌后分别接种，在适宜条件下培养一段时间后，统计愈伤组织的诱导率，实验结果如下表：

该实验的因变量是____________，诱导的最佳组合是_____________________。
（5）判断转基因苦荞培育是否成功，可比较转基因苦荞与普通苦荞的__________含量，也可测定细胞中CHS含量。 用凝胶色谱法分离CHS时，CHS最先从色谱柱中洗脱出来，说明CHS相对分子质量较___________。