为探究猪SLA-2 抗原的呈递规律。研究者运用基因工程手段将SLA-2基因进行改造并在猪肾上皮细胞（sT2细胞）中表达。实验的主要流程如图1，图1中SLA-2基因长度为1100bp， 质粒B的总长度为4445bp， 其限制酶切点后的数字表示距复制原点的距离。图1中的限制酶的识别序列及切割位点如图2所示。请回答：________ （写出3种即可）和引物等.
2．下列4种引物中应选择的是________ 。
3．控制表达载体大量扩增的组成元件是________ ，该结构发挥作用时通常需要的酶是________ 。
4．若用 Sau3AI和 XbaI 完全酶切质粒C后电泳，请在答题纸相应位置画出可能得到的电泳条带，同时标出DNA片段长度。（不考虑 PCR 时所用的引物长度对结果的影响）________
5．科研中常用嘌呤霉素对真核细胞进行筛选，一般选择最低致死浓度的前一个浓度作为筛选浓度的原因是：既可以让大部分没有抗性的细胞死亡又不会让________ 。用没有抗性的细胞实验，实验结果如下图3，根据实验结果最佳的嘌呤霉素筛选浓度为________ 。________ ，为了提高该细胞克隆培养的成功率，应把它放在37°C的________ 中进行培养。
7．过程⑦研究人员用________ （填物质）检测肾上皮细胞生产的抗原肽。
2．下列4种引物中应选择的是
| A．5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC |
| B．5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC |
| C．5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC |
| D．5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC |
4．若用 Sau3AI和 XbaI 完全酶切质粒C后电泳，请在答题纸相应位置画出可能得到的电泳条带，同时标出DNA片段长度。（不考虑 PCR 时所用的引物长度对结果的影响）
5．科研中常用嘌呤霉素对真核细胞进行筛选，一般选择最低致死浓度的前一个浓度作为筛选浓度的原因是：既可以让大部分没有抗性的细胞死亡又不会让
7．过程⑦研究人员用
更新时间：2024-05-17 10:21:48
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【知识点】 基因工程的操作程序综合
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【推荐1】棉花种植过程中常因棉铃虫啃食叶片而减产。苏云金芽孢杆菌能产生具有杀虫能力的Bt 毒蛋白。科研人员将Bt 毒蛋白基因作为目的基因导入普通棉株细胞内， 培育出了能抗棉铃虫的转基因抗虫棉。下图为制备抗虫棉的基本流程，①～⑤表示相关的操作。请回答下列问题：
（1）步骤①中，利用 PCR技术扩增 Bt毒蛋白基因时，需要根据 Bt 毒蛋白基因两端的部分核苷酸序列设计___________ 。
（2）步骤②构建基因表达载体时需要用到 ECoR I 和 BamH I 两种_________ 酶对目的基因和质粒进行切割，酶切后形成的目的基因两端的黏性末端_____ （填“相同”或“不相同”），以防止自身环化。切割后的产物还需要用____ 酶进行连接。
（3）步骤③中需先用____ 处理农杆菌以便将基因表达载体导入其中。
（4）步骤④中，可通过____ 技术检测愈伤组织细胞中是否含有 Bt毒蛋白，若未检测出 Bt 毒蛋白，则可能的原因是________ 。
（5）分别用普通棉花植株和转基因棉花植株的叶片饲喂棉铃虫，若出现_____ 结果，说明抗虫棉对棉铃虫表现出一定的抗性。
（1）步骤①中，利用 PCR技术扩增 Bt毒蛋白基因时，需要根据 Bt 毒蛋白基因两端的部分核苷酸序列设计
（2）步骤②构建基因表达载体时需要用到 ECoR I 和 BamH I 两种
（3）步骤③中需先用
（4）步骤④中，可通过
（5）分别用普通棉花植株和转基因棉花植株的叶片饲喂棉铃虫，若出现
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【推荐2】亨廷顿舞蹈症（HD）患者是由于编码亨廷顿蛋白的基因（H基因）序列中的三个核苷酸（CAG）发生多次重复所致。我国科学家利用基因编辑技术和体细胞核移植技术成功培育出世界首例含人类突变H基因的模型猪，操作过程如图。回答下列问题：
（1）为获得CAG重复150次的人H基因片段，科学家首先从患者的细胞中提取mRNA，再通过________ 过程即可获得目的基因。为了满足筛选需要，还需要对获取的目的基因进行PCR扩增，扩增目的基因的前提是____________________ 。
（2）图中将目的基因导入体细胞前，常需要用到_____________ 酶来构建基因表达载体。将目的基因导入体细胞的常用方法是_________________ 。如何从个体水平检测获得的猪是否为含有人类突变H基因的模型猪？___________________ 。
（3）将F0与野生型杂交后筛选得到F1，F1再与野生型杂交后筛选得到F2。在上述繁殖过程中，最适合作为亨廷顿舞蹈症模型猪的是_________ ，原因是______________ 。
（1）为获得CAG重复150次的人H基因片段，科学家首先从患者的细胞中提取mRNA，再通过
（2）图中将目的基因导入体细胞前，常需要用到
（3）将F0与野生型杂交后筛选得到F1，F1再与野生型杂交后筛选得到F2。在上述繁殖过程中，最适合作为亨廷顿舞蹈症模型猪的是
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【推荐3】宫颈癌的病因之一是高危型人乳头瘤病毒（HPV）持续感染导致细胞癌变，因此常用HPV抗体检测血清中HPV的含量来诊断是否患宫颈癌。已知HPV含有L1和L2两种外壳蛋白，下图为FIPV-16型L2蛋白单克隆抗体的制备流程示意图，A代表相应物质，B为某类细胞，①～③表示相应过程。请回答下列问题：
(1)在构建基因表达载体时，常常通过过程①在目的基因前后加上两种限制酶的识别序列，使之成为A。相比用同一种酶进行酶切，该方法的优点在于___ （答出2点）。图中切割质粒时最好选择的限制酶是___ 。
(2)过程②一般需用___ 处理大肠杆菌细胞，才能将重组质粒导入其中。基因工程常用原核生物作为受体细胞，是因为其具有___ 等优点。
(3)过程③表示___ 。可获得大量B的两种方法有___ 。
(1)在构建基因表达载体时，常常通过过程①在目的基因前后加上两种限制酶的识别序列，使之成为A。相比用同一种酶进行酶切，该方法的优点在于
(2)过程②一般需用
(3)过程③表示
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