【推荐1】苯丙酮尿症是由于患者PKU基因突变引起体细胞中缺少一种酶，致使体内的苯丙氨酸代谢异常转化为苯丙酮酸，从而导致患者神经系统损害。将正常PKU基因定点整合到PKU基因突变的小鼠胚胎干细胞的染色体DNA上来替换突变基因，可用来研究该病的基因治疗过程。定点整合的过程是：从染色体DNA上突变PKU基因两侧各选择一段DNA序列HB1和HB2，根据其碱基序列分别合成HB1和HB2，再将两者分别与基因kl、k2连接，中间插入正常PKU基因和标记基因neo^r，构建出如图所示的重组载体。重组载体和染色体DNA中的HB1和HB2序列发生交换，导致两者之间区域发生互换，如图所示。回答下列问题：

（1）上图中通过基因定点整合过程可替换特定基因，该技术可用于单基因遗传病的治疗。该实验用小鼠胚胎干细胞作为PKU基因的受体细胞以培育出转基因小鼠，除了胚胎干细胞能大量增殖外，还因为胚胎干细胞_____________，胚胎干细胞可以从_____________中进行分离得到。
（2）实验中小鼠胚胎发育到囊胚期时，聚集在胚胎一端，个体较大的细胞是_____________，可将其取出并分散成单个细胞进行培养，将来可为实验提供所需的胚胎干细胞。培养过程中培养液除了一些无机盐和有机盐外，还需要添加“两酸、两素”以及动物血清，其中的“两酸”是指_____________，培养过程中大部分细胞会贴附在培养瓶的表面生长，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为_____________。
（3）用图中重组载体转化胚胎干细胞时，会出现PKU基因错误整合。错误整合时，载体的两个k基因中至少会有一个与neo^r一起整合到染色体DNA上。已知含有neo^r的细胞具有G418的抗性。kl、k2的产物都能把DHPG转化成有毒物质而使细胞死亡。转化后的胚胎干细胞依次在含有G418及同时含有G418和DHPG的培养液中进行培养，在双重选择下存活下来的是________的胚胎干细胞，理由_________。
（4）将筛选得到的胚胎干细胞培育成小鼠，从个体生物学水平检测，若小鼠尿液中_____________，说明PKU基因成功表达。

【推荐2】CRISPR-Cas9技术又称为基因编辑技术，该技术在基因的上下游各设计一条向导RNA（向导RNA1，向导RNA2），将其与含有Cas9蛋白编码基因的质粒一同转入细胞中，向导RNA（gRNA）通过碱基互补配对可以定位与靶向基因结合，Cas9蛋白会使该基因上下游的DNA双链断裂，断裂的基因上下游两端的序列连接起来，从而实现了细胞中目标基因的敲除。回答下列问题：
（1）CRISPR-Cas9系统广泛存在于细菌体内，推测该系统在细菌体内的作用是___________________。
（2）基因表达载体的启动子位于________________，是RNA聚合酶识别和结合的部位。目的基因导入受体细胞后，成功产生了Cas9蛋白和gRNA。gRNA能够定位靶向基因的原理是________________。
（3）Cas9蛋白会使该基因上下游的DNA双链断裂，由于________________，会将断裂上下游两端的序列连接起来，从而实现了细胞中目标基因的敲除。从根本上剔除老鼠细胞中的目标基因（肥胖基因），常选用________________作为改良对象，理由是________________________________________________。
（4）科学家从癌症患者血液中提取某种细胞，利用基因编辑技术加入一个帮助这种细胞定向清除癌细胞的新基因序列，然后再把这些细胞注入患者血液中，以达到杀死癌症细胞的目的，这些细胞是人体的________________细胞，由于该细胞中的PD-1蛋白会引起免疫耐受，减弱对癌细胞的定向清除作用，临床上可以通过 CRISPR-Cas9技术剔除________________，从而重新激活淋巴细胞对肿瘤细胞的攻击能力。

【推荐1】用医学手段培育“三亲婴儿”可以解决遗传基因带来的缺陷，其培养过程如下图所示。请据图回答有关问题：

（1）获得“三亲婴儿”用到的胚胎工程技术有______________________________。
（2）捐献者和母亲都需要用促性腺激素处理，目的是为了___________________________，获取的精子需经过_______________处理，才能完成受精。
（3）如果为了获取胚胎干细胞，需要将受精卵在体外培养到_____________时期，取_____________细胞培养即可。
（4）若父亲患有线粒体疾病，是否需要用此医学手段培育“三亲婴儿”，为什么？
__________________________________________________________。

【推荐2】下面是以小鼠为对象进行的研究工作，请分析回答问题。
（1）进行小鼠胚胎工程操作时，首先在光控周期下（光照14h，黑暗10h）饲养成年雌鼠，并注射促性腺激素，目的是____________________ 。然后从雌鼠输卵管中取出卵子，在一定条件下培养成熟；并从雄鼠附睾中取出精子，在一定条件下培养一段时间，目的是______________________。再在37℃，5%CO₂条件下，精卵共同作用4h，冲洗后继续培养。定时在显微镜下观察胚胎的变化，第5天后可以看到胚胎发生收缩，细胞间隙扩大，接着胚胎内部出现裂隙，这是胚胎____________ 期开始的标志。
（2）如果体外受精后，在精核与卵核融合之前，用微型吸管除雄核，再用细胞松弛素B处理（作用类似于用秋水仙素处理植物细胞），处理后的受精卵可发育成小鼠。这种方法在动物新品种选育中的显著优点是 ___________________________________________。
（3）如果将小鼠甲的体细胞核移入小鼠乙的去核卵细胞中，由重组细胞发育成小鼠丙，则小鼠丙的基因来源于______________________________________________。
（4）如果将外源基因导入小鼠受精卵，则外源基因可能随机插入到小鼠受精卵DNA中。这种受精卵有的可发育成转基因小鼠，有的却死亡。请分析因外源基因插入导致受精卵死亡的最可能原因________________________________________________   。
（5）如果利用小鼠制备抗HSV-I的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的HSV-1蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗 ________________ 的抗体检测呈阳性，说明小鼠体内产生了______________________ 反应，再从小鼠的脾脏中获取B淋巴细胞。将该B淋巴细胞与小鼠的 ______________ 细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，该细胞具有的特点是 _________________________。

【推荐3】某科研所对高产奶牛的繁殖进行研究，部分数据如下表所示。回答下列问题：

超排供体（头）	头均获胚胎（枚）	头均可用胚胎（枚）
1501	5.6	3.6

(1)超卵是超数排卵的简称，让供体达到该目的，则需要给供体注射________。
(2)由表格可知，并不是每个胚胎都可以使用，现分六组对不可用胚胎进行检查，以分析原因，则每组可获得的不可用胚胎数约为__________个，从中选择一个胚胎观察其染色体的数目，则最佳观察时期是________，观察后染色体数目是配子的三倍，这是多精入卵造成的，多精入卵的产生说明________失效。
(3)诱导小鼠细胞与去核的卵母细胞融合通常采用的方法是________，用物理化学方法激活重构胚的目的是________。
(4)若可用胚胎都能发育成个体，则后代为雌性的概率为________。为提高后代雌性概率，可对可用胚胎的滋养层细胞的DNA 进行 PCR，选择SRY 基因（该基因位于 Y 染色体上的性别决定基因）________（填“阳性”或“阴性”）的胚胎进行移植。
(5)代孕个体对移入子宫的重构胚________，这为胚胎在受体内的________提供了可能。
(6)胚胎分割可以增加胚胎数量，在对胚胎进行分割时要注意________。

【推荐1】回答下列问题：
（一）营养缺陷型菌株在基本培养基（不添加特殊营养物）上不能正常生长，只能在完全培养基（满足微生物的各种营养缺陷需求的培养基）上才能正常生长。现将诱变处理后的菌液稀释后接种于某培养基上培养，用灭菌牙签逐个挑取待测菌，先后点接于A、B培养基上，前后位置及号码相对应，培养后菌落生长情况如图，请回答（实验中所使用的菌种在温度低于75℃情况下均可以保持活性）：

(1)过程①的接种方法为______，A培养基应分别为______（填“基本”或“完全”）培养基。
(2)为进步确定缺陷型菌株属于何种氨基酸缺陷型，实验人员进行了如下操作：
①用接种环挑取培养基______（填“A”或“B”）中的______号菌落分别接种于盛有完全培养液的离心管中，28℃振荡培养1~2天后，离心，取沉淀用______洗涤菌体3次并制备成菌悬液。
②吸取1mL菌悬液加入无菌培养皿中，倾注约15mL融化并冷却至______℃左右的基本琼脂培养基，冷凝后用记号笔在培养皿的______（皿底/皿盖）划分五个区域，做好标记。
③在划分的五个区域上放入少量不同的氨基酸结晶或粉末，制作______（填“选择”或“鉴别”）培养基。经培养后，观察生长圈出现的区域，从而确定属于何种氨基酸缺陷型。
（二）胚胎干细胞（ES细胞）介导法的主要操作过程是：将外源基因导入胚胎干细胞，然后将转基因的胚胎干细胞注射于受体动物胚胎后可参与受体的胚胎构成。下图是利用胚胎干细胞介导法培育出荧光小鼠的过程。回答下列问题：

(3)从水母中获取绿色荧光蛋白基因有多种方法。将水母的全部基因用限制性内切核酸酶切成片段，插入到载体分子中，并将所得的______转入大肠杆菌进行克隆保存，这些大肠杆菌的群体称为______。
(4)②过程中用到了______酶和______酶，③过程常用______方法，⑥过程通常要对受体母鼠进行______处理后才可进行胚胎移植。
(5)关于受体母鼠妊娠产下的子代小鼠的特点，下列叙述正确的是（       ）

A．各细胞都有绿色荧光蛋白基因，所以全身每个细胞都有绿色荧光蛋白产生

B．各细胞都有绿色荧光蛋白基因，但只有部分细胞有绿色荧光蛋白产生

C．不是所有细胞都有绿色荧光蛋白基因，所以只有部分细胞有绿色荧光蛋白产生

D．该小鼠产生的配子中含绿色荧光蛋白基因的概率为1/2

【推荐2】【加试题】回答下列（一）、（二)小题：
(一)请回答用梨酿制醋酸实验的有关问题：
(1)梨汁制作:用浑浊的梨汁制作澄清的梨汁可加入_________酶。为证明该酶的效果，可分别取等量______的梨汁，各加入等量的95%乙醇，预计前者出现的沉淀物较少。梨汁的澄清度与酶的______呈正相关。
(2)酒精发酵:干酵母制成糊状后，为使酵母迅速发生作用，可加极少量的______________。适宜条件下进行酒精发酵，待酵母下沉，可用_____________法将上清液（即果酒)取出。
(3)醋酸发酵:为防止培养基沾到三角瓶壁或试管壁上，在将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用______。下列不能缩短果醋制作周期的措施是____________。
A.用果酒为原料                                   B.增加醋杆菌的数量
C.将酒-水混合物pH调至7.0               D.发酵阶段封闭充气口
(二)某小组欲进行胚胎干细胞(ES细胞）的一系列研究。请回答：
(1)ES细胞能分化出成体动物的所有组织和器官，这体现了ES细胞的______________。为获得适合人体移植的猪器官，减弱或消除排斥反应，可对ES细胞进行____________。
(2)—个ES细胞变成ES细胞群的过程中，细胞__________(填“可能”、“不可能”)出现接触抑制现象。下列关于动物细胞培养和核移植的叙述，正确的是___________。
A.从原代培养物或细胞系中选择和纯化无法获得细胞株
B.动物细胞培养基中添加胰岛素的目的是调节血糖浓度
C.胚胎干细胞培养时，加滋养层是为了抑制胚胎干细胞分化
D.核移植形成的重组细胞在初次分裂时核基因不转录
(3)为获得含兔褐毛基因的转基因小鼠，可将褐毛基因通过__________法导入ES细胞核中，再将该核移植到去核的卵细胞中，经过_____________、胚胎培养、胚胎移植，最终由代孕母鼠产下克隆小鼠。
(4)为获得大量的上述克隆小鼠，可用转基因的小鼠胚胎成纤维细胞进行体细胞克隆。因为含有褐毛基因的胚胎成纤维细胞可进行___________培养，理论上可获得无限个转基因小鼠。

【推荐3】2016年10月19日美国新希望生殖医学中心正式宣布，世界首个核移植“三父母”男婴已于2016年4月诞生。为中东一位线粒体携带有亚急性坏死脑病基因的母亲带来了希望。培养过程如下图，据图回答：

（1）获得重组卵母细胞A也会用到体细胞核移植技术，完成①过程需要用微型吸管吸出______________，完成④过程的B细胞需要选择_______________________（时期）的卵母细胞。
（2）卵母细胞的获取过程中，需要对女性进行超数排卵处理，超数排卵的方法是给女性注射____激素。
（3）为了提高已有胚胎的利用率，可采用________________技术。若选用囊胚期的胚胎，操作过程中要特别注意的问题是_______________________________________。
（4）根据___________(填标号)判断，此种繁殖方式是有性生殖。细胞A的培养过程③所需气体主要有O₂和CO₂，CO₂的主要作用是___________________________。
（5）设计试管婴儿技术与解决不孕问题而进行的试管婴儿技术的主要区别是前者需要在植入前对胚胎进行______________________________。