【推荐1】回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与黄酒制作有关的问题：
氨基甲酸乙酯（EC）作为一种潜在致癌物，广泛的存在于发酵食品和酒精饮料中。在各种发酵酒中，黄酒面临的EC超标问题更为突出，利用酸性脲酶消除其前体物质尿素被认为是最为有效的一种方法。
(1)获取含有酸性脲酶菌的土样，加入_____________制备成土壤悬液，并对土壤悬液中的酸性脲酶菌进行广大培养。从适合使用的角度分析，该酸性脲酶菌应对富含__________的发酵液有很好的耐受性。
(2)常用于分离菌种的方法是_________，经过酸性培养基的初筛培养后，还要在添加酚红的中性固体培养基上进行复筛，应该挑选_____________ （填“有红色圈的菌落”或“无红色圈的菌落”）为目标菌株，最后将其接种在_____________中，4℃冰箱中保藏。
(3)酸性脲酶菌的产酶能力受到许多因素影响，除培养基的营养成分、温度、pH外，在摇床培养时还应考虑__________________________。
（二）德尔塔变异毒株已成为全球新冠肺炎传播的主要变异株，我国研究团队最新发现针对德尔塔变异株有效的单克隆抗体。该抗体在新冠肺炎的短期预防与早期治疗上有较大的应用价值。图1表示制备该抗体的实验流程。回答下列问题：

(4)丙操作指的是_____________，甲中含有_____________种两两融合的细胞。
(5)乙中可以获得_____________的杂交瘤细胞。
(6)利用小鼠制备的单克隆抗体，在给人体使用时，可能会被人体免疫细胞清除，影响抗体的作用效果。抗体的结构如图2所示，下列技术可以解决此问题：从杂交瘤细胞中提取编码鼠源单克隆抗体_____________（填“5区”或“6区”）序列的基因，与从人体中获取的编码抗体_____________（填“5区”或“6区”）序列的基因，进行拼接，然后导入骨髓瘤细胞中，进行培养获取新的抗体，改造过程涉及_____________技术和_____________技术，这过程属于_____________工程。
(7)近期奥密克戎变异株确诊案例大幅增加，传播能力强，潜伏期更短，得过新冠和已打完疫苗会重复感染新冠，这可能是因为病患体内已产生的_____________减少或消退，加上奥密克戎毒株可能出现了新的抗原特征，具备部分免疫逃脱特性。

【推荐2】重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得目的基因的方法。利用该技术可以实现基因的定点诱变。它在需要诱变的位置合成两个带有变异基因碱基的互补引物，然后分别与引物a和引物d做PCR，这样得到的两个PCR引物产物都带有变异基因，并且彼此重叠，再将重叠部位进行重组PCR就能得到诱变PCR产物如图1。图2为用定向进化策略改造纤维素酶的过程，请回答下列问题。
（1）PCR与体内DNA的复制相比，不需要_____________酶的参与。
（2）根据图1所示的叠延伸PCR过程，回答下列问题。
①PCR扩增DNA的过程中，引物a、b、c、d中，PCR1应选择图1中引物__________，大量扩增突变产物AD则应选择引物_____________，重叠延伸时不需要引物的原因______________。

②若利用重叠延伸PCR技术进行定点突变时需要如下图所示的4种引物，且PCR1中的引物a位置选择的是图3中的引物1，则b，c引物分别应该选择图3中的_________________

③重叠延伸PCR通过_______ 实现定点突变。PCR1和PCR2需要分别进行的原因是__________。
（3）图2为利用定向进化策略改造纤维素酶的操作过程，在进行③时需要先用_________处理大肠杆菌，使其成为_________________细胞。
（4）用定向进化策略改造纤维素酶，下列说法正确的是(      )
A．基因工程技术是定向进化策略改造纤维素的基础
B．定向进化策略获得的纤维素酶的基因序列在筛选前是已知的
C．与定点诱变相比，定向进化策略不需解析酶的结构和功能
D．定向进化策略可以使纤维素酶朝着人们需要的方向进化

【推荐3】人体内的t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药，但是大剂量使用会诱发颅内出血。如果将t-PA蛋白第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。先对天然的t-PA基因进行序列改造，然后再采取传统的基因工程方法表达改造后的基因，可制造出性能优异的改良t-PA蛋白。下图表示通过重叠延伸PCR技术获取t-PA改良基因和构建含t-PA改良基因重组质粒的过程示意图。图中重叠延伸PCR过程中，引物a、b被用来扩增含有突变位点及其上游序列的DNA片段，引物c、d被用来扩增含突变位点及其下游序列的DNA片段。请回答：

（1）已知t-PA蛋白第84位是半胱氨酸，相应的基因模板链（图中t-PA基因的上链）上的碱基序列是ACA，丝氨酸的密码子是UCU。重叠延伸PCR示意图中的黑点表示突变部位的碱基，引物b中该部位的碱基是______，引物c该部位的碱基是______。PCR中需要引物的原因是______。
（2）重叠延伸PCR中，PCR1和PCR2分别进行，产物混合后再进行PCR3。PCR1和PCR2需要分别进行的原因是______。
（3）构建重组质粒时，选用的限制酶是______。重组质粒中的新霉素抗性基因的作用是______。
（4）在加入新霉素的培养基中形成菌落的受体细胞并非都是目的菌株，需选择呈______色的菌落，进一步培养、检测和鉴定，以选育出能生产改良t-PA蛋白的工程菌株。上述生产改良t-PA蛋白的技术属于______工程。

【推荐1】肠道微生物对宿主健康具有重要影响，但目前缺乏对特定菌株进行基因编辑的有效手段。科研人员尝试使用M13噬菌体作为载体，对大肠杆菌进行基因编辑。
(1)M13噬菌体与T2噬菌体相似，能够侵染大肠杆菌，其蛋白质外壳留在菌体外，头部的_____注入菌体内，指导子代噬菌体的复制增殖。与T2噬菌体不同，被M13噬菌体侵染的大肠杆菌不发生裂解。
(2)科研人员将绿色荧光蛋白基因特异性序列（sgfp）、Cas酶基因与利用特定方法得到的M13噬菌体的环状DNA进行重组，构建重组基因编辑质粒（pCG）如下图。

①以pCG的绿色荧光蛋白基因特异性序列（stp）_____过程形成的 RNA，会靶向结合绿色荧光蛋白基因，从而使Cas酶能够切割绿色荧光蛋白基因。
(3)科研人员将绿色荧光蛋白基因和红色荧光蛋白基因导入大肠杆菌，获得GS菌株。先用添加GS菌株的饲料喂养小鼠，一段时间后，将小鼠分为实验组和对照组。其中，实验组小鼠用添加含_____的M13噬菌体和_____的饲料喂养， 以筛选获得肠道微生物被基因编辑的小鼠。本实验对照组使用的质粒应当包括图1中的_____（多选，填序号） 。
a、Cm⁺ b、 sgfp               c、Ori                    d、Cas
(4)为确认MI3噬菌体作为载体对大肠杆菌进行基因编辑的可行性和特异性，科研人员检测肠道微生物的变化，结果如图2。

①图2中，标号为a、c的区域分别代表含有红色荧光的微生物和无荧光的微生物，标号为b区域代表含有_____荧光的微生物。
②图3-1为实验组第0天小鼠肠道微生物的荧光情况，请在答题纸的图3-2中标注该组小鼠第14天时肠道微生物的荧光区域编号_____。
③图2表明，实验中M13噬菌体能_____。

【推荐3】水蛭素是一种可用于预防和治疗血栓的蛋白质。若用赖氨酸（密码子为AAA、AAG）替换水蛭素第47位的天冬酰胺（密码子为AAC、AAU）后可以提高它的抗凝血活性。某科研团队运用大引物PCR技术进行两轮PCR（PCR1和PCR2），在水蛭素基因的特定位点引入特定突变后（原理见图），合成了大量抗凝血活性增强的水蛭素。操作过程如图：

(1)大引物PCR扩增技术需要在反应体系中加入模板、___、___Mg²⁺、缓冲液等物质。
(2)在PCR1中，至少需要___个循环才能获得相应的大引物模板，在PCR2中，要获得带有诱变点的改良基因，引物应选用大引物两条链中的___。
(3)突变后的水蛭素基因一般通过___来鉴定，若诱变引物的突变位点引入的碱基为C，则改造后水蛭素第47位的氨基酸的密码子是___。
(4)PCR技术设计引物的作用是___，大引物与常规引物相比，其特点是___。