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题型:非选择题-实验题 难度:0.65 引用次数:401 题号:6380462
Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:

(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的________________________
(2)步骤②中,重组胚胎培养到囊胚期时,可从其_____________________分离出ES细胞。还可以从胎儿的____________分离获得ES细胞。
(3)ES细胞在形态上表现为体积小、细胞核________、核仁_________,在功能上,属于________(填“单能干细胞”“多能干细胞”或“全能干细胞”)。
(4)ES细胞是研究体外细胞分化的理想材料。ES细胞在饲养层细胞上,在培养液中添加_________,就可以诱导ES细胞分化,为揭示细胞分化和细胞凋亡的机理提供了有效的手段。
(5)步骤③中,需要构建_________________________。可以根据Rag2基因的核苷酸序列,合成引物,利用____________技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有____________的酶切位点。
(6)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后的小鼠骨髓细胞的蛋白质,用抗____________的抗体进行杂交实验。

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非选择题-解答题 | 适中 (0.65)
【推荐1】图示方案为人们获得生物新品种的过程,请回答下列问题:

(1)基因工程的核心步骤是____________________________________.方案Ⅰ中,将抗冻蛋白基因导入烟草受体细胞常用的方法是__________________。从分子水平检测抗冻烟草是否培育成功的方法是:_____________________________
(2)推测方案Ⅱ中A基因所起的作用是________________________________
(3)方案Ⅲ中的转基因牛可以通过分泌乳汁来生产人的生长激素.人的生长激素基因在导入受体细胞前,基因的首段必须含有使其仅能在山羊___________细胞中特异性表达的___________________
(4)方案Ⅲ中的早期胚胎在移植入受体母羊子宫之前,必须对胚胎进行性别鉴定,一般是取处于_______________时期的____________________细胞进行检测。
2016-01-06更新 | 144次组卷
非选择题-解答题 | 适中 (0.65)
真题
【推荐2】回答下列(一)、(二)小题:
(一)回答与甘蔗醋制作有关的问题:
(1)为了获得酿造甘蔗醋的高产菌株,以自然发酵的甘蔗渣为材料进行筛选。首先配制醋酸菌选择培养基:将适量的葡萄糖、KH2PO4、MgSO4溶解并定容,调节pH,再高压蒸汽灭菌,经__________后加入3%体积的无水乙醇。然后将10 g自然发酵的甘蔗渣加入选择培养基,振荡培养24 h。用__________将少量上述培养液涂布到含CaCO3的分离培养基上,在30 ℃培养48h。再挑取分离培养基上具有__________的单菌落若干,分别接种到与分离培养基成分相同的__________培养基上培养24 h后,置于4 ℃冰箱中保存。
(2)优良产酸菌种筛选。将冰箱保存的菌种分别接入选择培养基,培养一段时间后,取合适接种量的菌液在30 ℃、150 r/min 条件下振荡培养。持续培养至培养液中醋酸浓度不再上升,或者培养液中______含量达到最低时,发酵结束。筛选得到的优良菌种除了产酸量高外,还应有____________________(答出2点即可)等特点。
(3)制醋过程中,可将甘蔗渣制作成固定化介质,经_________后用于发酵。其固定化方法为_________
(二)斑马鱼是一种模式动物,体外受精发育,胚胎透明、便于观察,可用于水质监测,基因功能分析以及药物毒性与安全性评价等。
(1)由于人类活动产生的生活污水日益增多,大量未经处理的污水直接排入河流、湖泊会引起水体__________,导致藻类大量繁殖形成水华。取水样喂养斑马鱼,可用斑马鱼每周的体重和死亡率等指标监测水体污染程度。
(2)为了研究某基因在斑马鱼血管发育过程中的分子调控机制,用 DNA 连接酶将该基因连接到质粒载体形成_______,导入到大肠杆菌菌株 DH5α 中。为了能够连接上该目的基因、并有利于获得含该目的基因的 DH5α 阳性细胞克隆,质粒载体应含有__________(答出2点即可)。提取质粒后,采用____法,将该基因导入到斑马鱼受精卵细胞中,培养并观察转基因斑马鱼胚胎血管的发育情况。
(3)为了获取大量斑马鱼胚胎细胞用于药物筛选,可用__________分散斑马鱼囊胚的内细胞团,取分散细胞作为初始材料进行__________培养。培养瓶中添加成纤维细胞作为__________,以提高斑马鱼胚胎细胞克隆的形成率。
2021-06-17更新 | 3673次组卷
非选择题-解答题 | 适中 (0.65)
【推荐3】赤霉素与其受体 GID 结合后,可以促进植物茎秆伸长。蓝光能够激活蓝光受体 CRY,抑制赤霉素的作用,为探究该机理,研究者分别构建了含有 His-CRY 和 GST-GID 融合基因的表达载体,表达出相应的融合蛋白。His 和 GST 均为短肽,它们与其他蛋白形成的融合蛋白能与 His 或 GST 抗体结合,且不影响其他蛋白的结构和功能。
(1)构建含上述融合基因的表达载体。
   
①结合图 1 分析,欲使 His 短肽连在 CRY 的氨基酸序列前端(氨基端),则应在_____(填“F 引物”或“R 引物”)的______(填“5'”或“3'”)端加上 His 短肽的编码序列。
②为使融合基因能与载体相连接,还需在 F 引物和 R 引物上添加相应的酶切位点序列,该序列应该位于 His 短肽编码序列的______(填“5'”或“3'”)端。
③用同样的方法扩增 GST-GID 融合基因,并构建相关表达载体。
(2)将两个表达载体同时导入拟南芥细胞,一段时间后裂解细胞,将含有 His 抗体的磁珠加入裂解液中,充分孵育后收集磁珠,将磁珠上的蛋白(磁珠蛋白)分离下来,进行抗原-抗体杂交,结果如图 2。
   
①由图可知 His-CRY 和 GST-GID 融合基因的表达情况是________。对磁珠蛋白进行 His 抗体检测的目的是________
②图示结果说明,蓝光的作用机理是_______
2023-09-10更新 | 282次组卷
共计 平均难度:一般