【推荐1】现有甲、乙两种双子叶植物，植物甲含有抗旱基因而具有极强的抗旱性，植物乙抗旱性低。若将该抗旱基因转移至植物乙中，有可能提高后者的抗旱性。目前，基因工程中使用的限制酶主要从原核生物中分离纯化获得。含有限制酶的细胞通常还具有相应的甲基化酶，它可以在基因组胞嘧啶5'碳位共价键结合一个甲基基团，对DNA序列进行修饰。回答下列问题：
(l)为获取抗旱基因，可以先从植物甲中提取该基因mRNA，然后经____________过程获得cDNA。基因工程的核心步骤是_________。
(2)使用PCR技术扩增抗旱基因时，可选择图中A、B、C、D四种单链DNA片段中的___________作为引物，此过程还需要___________酶，但不需要解旋酶，而是利用___________使DNA解旋。

(3)原核细胞中的限制酶可切割外源DNA，但不破坏自身DNA，其原因可能是①______________；②________________。
(4)在大田里栽培转基因植物时，要求转基因植物与传统作物之间应该间隔足够远的距离，以免___________________ 。

【推荐2】通过DNA重组技术使原有基因得以改造的动物称为转基因动物。运用这一技术使羊奶中含有人体蛋白质，下图表示了这一技术的基本过程，该过程中所用的基因“剪刀”能识别的序列和切点是一G^↓GATCC-，请回答：

（1）从羊染色体中“剪下”羊蛋白质基因的酶是________。人体蛋白质基因“插入”后连接在羊体细胞染色体中时需要的酶是_________。染色体的主要成分是_________；基因的基本组成单位是_______。
（2）人体蛋白质基因之所以能“插入”到羊的染色体内，原因是人和羊DNA分子的__________相同。
（3）将人体蛋白质基因导入羊体内并成功地表达,使羊产生新的性状。这种变异属于_____________,这里“成功地表达”的含义是________________。
（4）你认为此类羊产生的奶安全可靠吗？_____________。理由是____________________。

【推荐3】2020年诺贝尔化学奖授予新型基因编辑技术CRISPR/Cas9的研发者。研究发现，细菌细胞中的一种适应力免疫系统可以侦测到病毒DNA并消灭它。病毒感染细菌后，细菌通过向导RNA把Cas9蛋白引导到外源DNA并与之结合，然后利用Cas9蛋白的DNA内切酶活性将病毒DNA分解，阻断病毒在细菌体内的繁殖。在利用基因工程生产Cas9蛋白的过程中，可以由mRNA反转录形成Cas9的cDNA。回答下列问题：
(1)Cas9的cDNA合成过程需要用到___酶，形成RNA-DNA杂交分子，核酸酶H破坏___键使RNA-DNA杂交分子中的RNA链降解，使之成为单链DNA，在合成另一条链形成双链DNA时___（填“会”或“不会”）形成DNA-蛋白质复合体，原因是___。
(2)获取Cas9的cDNA作为目的基因后需要通过PCR技术扩增，该技术的前提是___，以便合成引物，在___酶的作用下从引物起始进行互补链的合成。
(3)基因工程的核心是___。质粒中插入的目的基因的上下游应分别具有___才能使目的基因表达和发挥作用。

【推荐1】糖尿病已经成为危害人类健康的严重疾病之一，注射胰岛素是目前治疗糖尿病最为有效的途径和手段，如何生产优质而不昂贵的人胰岛素，是当下医疗界和制药界急需攻克的科学难题。如图为利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请回答：

（1）基因工程操作的核心是____________（用图示数字表示）。
（2）图中过程①和过程②是获得目的基因的手段，为什么不直接从供体细胞中获取呢？___________。
（3）为便于重组DNA的鉴定和选择，图中C的组成必须有_________；将体外重组DNA导入大肠杆菌体内，并使其在细胞内维持稳定和表达的过程称为_______。为使过程⑧更易进行，可用_______处理大肠杆菌，目的是使大肠杆菌细胞处于能够吸收周围环境中DNA分子的生理状态。

【推荐2】甜柿鲜果肉中含有微量元素、维生素和β-胡萝卜素等多种成分，营养价值高。甜柿的涩味程度与乙醛代谢关键酶基因（PDC）的表达情况密切相关。已知启动子区域存在着许多调控蛋白的结合位点，RNA聚合酶和调控蛋白共同影响基因的表达水平。AD基因表达出的AD蛋白与启动子足够靠近时，能够激活后续基因转录，据此可利用与AD蛋白形成的融合蛋白来筛选待测蛋白（如图丙）。为筛选PDC基因的调控蛋白，科研人员用质粒A（如图甲）与质粒G（如图乙）进行实验，请回答下列问题：

   

(1)启动子是一段驱动基因转录的DNA片段，位于转录模板链的____________（填“5'”或“3'”）端。
(2)PDC基因的启动子序列未知，为获得大量该基因启动子所在片段，可将已知序列信息的接头片段连接在PDC基因的____________（填“上”或“下”）游，根据___________，设计引物进行PCR扩增，对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳时，由于DNA分子因含磷酸基团而带负电，凝胶加样孔应靠近电泳槽____________（填“正极”或“负极”）接口。
(3)利用质粒A构建含有PDC基因启动子片段的重组质粒并导入不能合成尿嘧啶的酵母菌，用____________的培养基筛选成功转化的酵母菌Y1H；将从甜柿中提取的RNA逆转录形成的各种cDNA分别与质粒G连接后导入酵母菌，此时应选择质粒G中的位点______________（填序号1~5）作为其插入位点，最终获得携带不同cDNA片段的酵母菌群Y187。
(4)重组酵母菌YIH分别与携带不同cDNA片段的酵母菌Y187进行接合生殖，形成的接合子含有两种酵母菌质粒上的所有基因。将接合子接种在_________中，观察菌落生长情况能判断其含有的待测蛋白是否为PDC基因的调控蛋白。

【推荐3】番茄果实在成熟的过程中，多聚半乳糖醛酸酶（PG）合成显著增加， 以降解果胶使细胞壁破损，从而使果实变红变软，但不利于保鲜。科学家利用基因工程得到转基因番茄，大大延长果实保质期。操作流程如下，回答下列问题：

（1）利用 RT—PCR 技术即逆转录—多聚酶链式反应制备 PG 基因，最好从番茄的_______细胞中提取mRNA，此技术所需要的酶主要有_________ 。
（2）据图可知，转基因番茄主要通过抑制PG 基因的___________ 过程，使PG合成量减少，从而延长果实保质期。
（3）要检测感染农杆菌后的番茄细胞染色体 DNA 上是否插入了反向连接 PC 基因，_______（填“能”或“不能”）用标记的 PG 基因的单链作为探针进行检测，理由是____________________ 。
（4）       在将转化的番茄细胞通过植物组织培养技术形成番茄幼苗过程中，培养基________（填“要”或“不要”）添加有机营养物质，原因是____________________。