【推荐2】 在进行DNA亲子鉴定时，需大量的DNA。PCR技术 （聚合酶链式反应）可以使样品DNA扩增，获得大量DNA克隆分子（如下图，图中黑色长方形是引物）。在很短的时间内将DNA扩增几百倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。

(1)PCR技术所依据的原理是________________________。
(2)图中的变性、延伸分别是指_____________________、______________________________。
(3)假设PCR反应中的DNA模板为P，第一轮循环的产物2个子代DNA为N₁，第二轮的产物4个子代DNA为N₂，N₁、N₂中分别含有模板DNA单链的DNA分别有______、______个。
(4)若下图为第1轮循环产生的产物。请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。（请标注两种引物的位置）

【推荐3】电影《妈妈》于2022年母亲节上映，85岁的母亲为照顾阿尔茨海默病的女儿倾尽所有，母爱的无私付出让人泪目。阿尔茨海默病（AD）是一种神经退行性疾病，又名老年痴呆症。近期发现，resistin（抵抗素，化学本质为蛋白质）的表达与AD发病及进展可能有一定关联。在人体内，脂肪细胞，骨骼肌细胞，脑内巨噬细胞均可分泌resistin。但是在小鼠中，脑内的巨噬细胞并不分泌resistin，给希望通过AD模型小鼠研究脑内巨噬细胞分泌rsistin在AD进展中的研究带来了障碍。因此本实验拟将resitin基因导入到小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞中，从而建立能够高表达resistin的单核巨噬细胞系统，为进一步探索resistin与AD之间的关系奠定基础。
(1)为大量获取resistin基因，可分离小鼠腹股沟部位脂肪组织提取的mRNA，经______后进行PCR扩增。PCR的原理是____________，反应体系需加入______种引物，引物的作用是使DNA聚合酶能从引物的______端开始连接脱氧核苷酸。
(2)下图1为所用质粒载体图谱示意图，图中限制酶的识别序列及切割位点见下表，为使resistin基因（该基因序列不含图1中限制酶的识别序列，图2中箭头表示resistin基因转录方向）与载体正确连接，在扩增的resistin基因的A端和B端应分别添加限制酶______的酶切位点，经过这两种酶酶切后的resistin基因和载体进行连接时，可选用______（“E.coliDNA连接酶”或“T₄DNA连接酶”）。

相关限制酶的识别序列及切割位点如下：

名称	识别序列及切割位点	名称	识别序列及切割位点
HindIII	A↓AGCTT TTCGA↑A	EcoRI	G↓AATTC CTTAA↑G
PvitII	CAG↓CTG GTC↑GAC	PstI	CTGC↓AG GA↑CGTC
KpnI	G↓GTACC CCATG↑G	BamHI	G↓GATCC CCTAG↑G

(3)为获得大量重组质粒，并鉴定重组质粒连接是否正确，可先将重组质粒导入经Ca²⁺处理的大肠杆菌中，Ca²⁺处理大肠杆菌的目的是________________________，再将完成转化的大肠杆菌接种在含______的培养基中培养。
(4)提取出鉴定连接正确的重组质粒导入到小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞后，可以应用______技术检测resistin基因是否表达出resistin。

【推荐2】人参是一种名贵药材，具有良好的滋补作用。口服a—干扰素在慢性乙肝、丙肝及部分肿瘤的治疗中有一定疗效。下图为科研人员制备能合成干扰素的人参愈伤组织细胞的流程图，①～④表示相关的操作，EcoR I、BamH I为限制酶，它们的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：

（1）步骤①中，为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的__________________识别位点。设计引物时需要避免引物之间____________，而造成引物自连。该基因工程的核心步骤是______（填图中序号）。
（2）与同一种限制酶切割质粒和目的基因相比，用EcoR I、BamH I两种限制酶切割的优点是____________。
（3）过程②所构建的基因表达载体中缺少______，其是____________的识别和结合位点，有了它才能驱动基因转录出mRNA。
（4）过程④中，一般通过____________技术检测愈伤组织细胞中是否含有干扰素基因。
（5）科研人员认为，将转干扰素基因的人参愈伤组织加工成的药物比单纯干扰素的疗效要好，其依据是_______________________。

【推荐3】人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，该疫苗生产和抗体制备的部分流程如下图：

请回答：
(1)①代表的是_______过程，若要在体外获得大量的A基因，常采用_______技术，该技术必须用到_______酶。
(2)过程③采用的实验技术是_______；在此过程中特有的诱导因素为_______，获得的X是_______。
(3)单克隆抗体与常规的血清抗体相比，其优越性是主要体现为_______、_______、以及可大量制备。
(4)对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的_______所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以用图中的_______进行特异性结合检测。

【推荐1】CD47是一种跨膜糖蛋白，肺癌、结肠癌等多种肿瘤细胞表面的CD47含量明显高于正常细胞。研究发现，利用抗体抑制肿瘤细胞表面的CD47蛋白的活性，可促进巨噬细胞吞噬肿瘤细胞。为制备抗CD47的单克隆抗体，科学家按如下流程进行相关实验。请回答下列问题：

(1)上图EcoRI等均为限制酶，Kan^r、Tc^r分别为卡那霉素抗性基因、四环素抗性基因。为了构建基因表达载体，应该选用___________酶切割外源DNA和质粒DNA。
(2)为筛选成功导入重组质粒的大肠杆菌，利用图中两种标记基因，筛选出_________________的大肠杆菌，利用该菌种获得大量CD47蛋白。
(3)下图①是指从小鼠________中获得免疫后B细胞，经过选择性培养的杂交瘤细胞，还需进行操作②______________才可获得能分泌抗CD47抗体的杂交瘤细胞。体外培养该细胞获得大量单克隆抗体，需要满足以下条件：无菌无毒环境，充足的营养和适宜温度与pH，含有____________的气体环境。

(4)为验证抗CD47抗体对巨噬细胞吞噬肿瘤细胞的促进作用，研究人员将巨噬细胞和肿瘤细胞共同培养，加入适量抗CD47抗体，测定巨噬细胞的吞噬能力。要得出该结论还需要进行的操作是________________________________。

【推荐2】回答下列（一）、（二）小题：
（一）分离以尿素为氮源的微生物时，同学们各自将取来的菌液稀释至10^-5倍后在培养皿中进行培养，A同学培养皿中得到约150个菌落，其他同学的培养皿中得到大约50个菌落，各位同学实验后均剩余少量空白平板。请回答：
(1)微生物实验中各种实验器皿高压蒸汽灭菌后，通常需要将其放入________℃的烘箱中烘干，以除去灭菌时的水分。实验操作前，应将需要使用的器皿从烘箱中取出，放到超净台上，打开紫外灯和________，灭菌30min。
(2)同学们在此实验中使用的微生物分离方法称为______________，该分离方法通常以每个培养皿中有__________个以内的菌落最为合适。在培养基中加入酚红可以对此实验中分离的微生物进行鉴定，原因是______________。
(3)同学们对实验结果进行分析后认为，导致A同学实验结果的可能原因是培养基配制时没有用___________替换琼脂，或者是培养基配制时被杂菌污染了。证明A同学的培养基是否被杂菌污染的方法是___________。
（二）回答下列与现代生物技术有关的问题：
(4)某农户建立了小型的“蔬菜-鸡、猪-沼气”人工生态系统。此系统可称为___________生态工程，属于小型农业生态工程，在分析该生态系统的经济效益时，除了考虑系统内部的投入与产出、系统的实际消费外，还需考虑系统的有效贡献，也就是系统____________。
(5)利用一定的技术可以将两个或多个细胞融合成一个细胞，上世纪80年代发明的____________技术，是效率很高的新型细胞融合技术。基因型不同的细胞间的融合就是细胞杂交，利用杂交细胞检测特定染色体丢失与特定蛋白质减少的对应关系可以进行____________。
(6)用噬菌体抗体库技术可获得人单克隆抗体，该技术的原理是将人抗体基因插入噬菌体载体，让重组噬菌体侵染大肠杆菌并合成抗体。获取人抗体基因时，可从人的____________细胞中获取RNA，再通过逆转录获得抗体基因。由于噬菌体能自主吸附并将DNA分子注入大肠杆菌，理论上可以不使用____________处理大肠杆菌。为保证合成的抗体以分泌蛋白的形式分泌出大肠杆菌，抗体基因与噬菌体基因间需设计一个____________密码子的对应序列，否则，抗体可能和病毒蛋白以融合蛋白的形式附着在噬菌体表面。

【推荐3】回答下列（一）、（二）小题：
（一）自生固氮菌是一种能独立固定氮气的细菌，其中有些好氧种类能产生PHB（一种生物可降解的热塑性塑料）。现欲从活性污泥中分离、纯化、筛选出高产PHB的固氮菌，操作流程如下：采集土样→富集培养→分离、纯化培养→初步筛选PHB固氮菌→筛选高产PHB固氮菌→保存备用。请回答：
（1）富集培养时，为达到筛选自生固氮菌的目的，在配制培养液时不应添加___________。培养时要将装有培养液的锥形瓶放置在摇床上振荡培养，其主要目的是为细菌的生长提供__________。
（2）用于筛选高表达量菌株的方法之一是经涂布分离获得__________。进行分离、纯化培养时，要先将培养基倒入__________中，制成平板，此时所使用的培养基与富集培养时有所不同，添加了一定量的__________。
（3）在纯化过程中，在固体培养基上划线时，下列操作正确的是__________。
A.接种环采用70%酒精灭菌
B.接种时应在酒精灯火焰附近进行
C.划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连
D.划线分离时，需要把接种环深入到培养基中进行接种
（二）下图表示细胞融合技术的部分过程，请回答：

（1）若甲、乙细胞是植物细胞，在细胞融合时，首先需将___________消化除去。获得的丁细胞在植物组织培养时通过平衡___________配比进行调控，从而实现植物器官、组织的发生和形态建成。
（2）若该过程是制备癌胚抗原单克隆抗体的部分过程，实验中首先将___________注入小鼠体内，然后从产生免疫反应的小鼠脾脏中获取经免疫的___________细胞，将其与骨髓瘤细胞融合，筛选出___________细胞。
（3）若甲、乙细胞到丙细胞过程是哺乳动物体外受精过程，甲、乙细胞能够结合的基础是细胞膜表面有特异性___________功能的蛋白。若丁细胞为囊胚的外表扁平细胞，由其组成的结构称为___________。