【推荐1】下图为某农户通过种植农作物，养殖猪、鸭，兴建沼气池等措施构建了新型农业生态系统。

请回答：（1）该系统有效促进了物质循环、能量流动和_______的畅通，经济、生态环境和社会效益的同步发展。使用化肥能在短期内提高农作物产量，但过量使用会降低作物的产量和质量，降低经济效益，还会导致环境的破坏和_______的下降，进而影响农业生产的可持续发展。用动物粪便和农作物秸秆，通过发酵技术产生沼气为农户提供能源，利用了农业生态工程技术的__________技术。
（2）利用未知序列的抗虫基因培育抗害虫的转基因番茄，通常采用________（A.建立基因文库的方法   B.化学合成方法   C.逆转录法   D.PCR技术）获取抗虫基因，再用相同的限制性核酸内切酶分别切割抗虫基因和Ti质粒，形成____________，然后在DNA连接酶的作用下，形成重组质粒，通过农杆菌导入番茄细胞，进而培育成转基因抗虫番茄。这种利用基因工程和植物克隆技术相结合培育新品种的方法，就是___________技术的应用。
（3）农户利用种植的葡萄制葡萄酒和葡萄醋，利用的微生物分别是__________，在制作葡萄酒时，发酵液装量不能超过发酵瓶容量的___________，发酵温度保持在_________，制作果醋时，可以利用________技术，将微生物吸附在锯末上进行生产。
（4）农户利用种植的黄瓜等新鲜蔬菜腌制泡菜时，微生物利用新鲜蔬菜中的营养物质进行发酵，会产生________，泡菜中的亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应的产物与N-1-萘基乙二胺偶联，形成________（A.橙红色   B.鲜红色   C.紫红色   D.绛紫色）的产物，根据这一特性可利用_________法定量。
（5）农户在果酒、果醋和泡菜的生产过程，没有进行严格的灭菌也能制作成功，其原因是_____________________________。

【推荐2】请根据有关生物工程方面的知识回答下列问题：
(1)理论上，基因组文库含有生物的____________基因；而cDNA文库中含有生物的____________基因。
(2)从分子水平上看，基因工程得以实现的遗传学物质基础是：_____________（写出两点）。基因工程中限制酶切割后的运载体与目的基因能再次拼接的理由是____________。
(3)将目的基因导入植物细胞最常见的方法是_____________，原理是利用其菌体中质粒的T-DNA片段可____________的特点；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是____________。
(4)动物细胞工程中____________技术是其他动物细胞工程技术的基础。动物细胞工程的一项重要应用是制备单克隆抗体，在该过程形成的杂交瘤细胞中发生的遗传信息流动有DNA→DNA、_____________。
(5)胚胎工程中，胚胎移植选择受体的条件是____________并具有健康体质和正常繁殖能力，受体对移入子宫的外来胚胎基本不发生____________，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。为了获得产奶量高的奶牛，需取囊胚期____________细胞做性别鉴定。

【推荐3】据发现在黄海海域获得的海洋源赤杆菌YH－07能分泌抑制番茄枯萎病菌生长的细胞壁降解酶（PMG）。研究人员获取得到PMG基因，并将其导入番茄细胞中，预期得到抗枯萎病的转基因植株。回答下列问题：

(1)为筛选适合的海洋源赤杆菌菌株YH－07，称取了1.0mL样品，转入99mL，无菌水中，充分振荡后，取______（填“上清液”或“沉淀”）。经______后，获得不同浓度的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释液的菌悬液培养后平均长出了46个海洋源赤杆菌YH－07菌落，则该样本中，每毫升样品中约含有海洋源赤杆菌YH－07______个。
(2)为获取PMG基因，将海洋源赤杆菌YH－07细胞的全部DNA提取、切割后与______连接。扩增PMG基因，已知A位点和B位点分别是起始密码子和终止密码子对应的基因位置，扩增基因选用的引物组合应为引物1和______。PMG基因以b链为转录模板链，为了使PMG基因按照正确的方向与质粒连接使用双酶切，在引物1的______端添加______的酶切位点。
(3)为检测PMG基因是否导入番茄细胞，可采用PCR技术对转基因植物进行检测，再用电泳技术对PCR产物进行鉴定，在凝胶中DNA分子的迁移速率与______（至少写出2点）等有关。

【推荐1】小麦纯合自交系川农16具有粒多、抗病等优良特性，可通过导入抗除草剂基因bar使其获得抗除草剂性状，具体技术路线如下图1所示。其中抗除草剂基因bar来源于野生型植物甲，抗草甘膦基因aroA是选择标记基因，报告基因能在特定情况特定组织中表达。

(1)图1中构建表达载体的过程需要用两种不同的限制酶切割，比用一种限制酶切割的优点是_________。很多启动子具有物种特异性，在图中Ti质粒的TDNA中插入抗除草剂基因bar时其上游启动子应该选择_________。
A.野生植物甲启动子   B.农杆菌启动子   C.小麦川农16的启动子
(2)农杆菌转化愈伤组织时，TDNA携带插入其内的片段转移到受体细胞。筛选已转化的愈伤组织，需使用含_________的选择培养基。但在转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化愈伤组织也可能在选择培养基上生长。含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达，其产物能催化无色物质K呈现蓝色。用K分别处理以下愈伤组织，出现蓝色的是_________。
①无农杆菌附着的未转化愈伤组织
②无农杆菌附着的转化愈伤组织
③农杆菌附着的未转化愈伤组织
④农杆菌附着的转化愈伤组织
(3)转化后经筛选的愈伤组织需转换培养基继续培养，此时培养基需添加的植物激素为_________。培养获得的转基因植株不一定稳定遗传，须将转基因植株进行_________，继续筛选，最终选育出抗除草剂纯合系。
(4)TDNA序列可随机插入愈伤组织DNA中导致插入位点基因功能丧失。上述实验中偶然获得了一个突变体F，产量明显低于小麦川农16。研究者用某种限制酶处理突变体F的DNA，得到下图2，若以此为模板进行PCR扩增出TDNA插入位置两侧的未知序列，需选择的引物是_________。

【推荐2】生长在太平洋西北部的一种海蜇能发出绿色荧光，原因是该海蜇的DNA上有绿色荧光蛋白基因。科学家利用转基因技术成功将该绿色荧光蛋白基因导入小鼠的受精卵，该受精卵最终发育成一只可在紫外线照射下发出绿色荧光的小鼠。回答下列问题：
（1）培育转基因生物时，获取目的基因的方法有___________、PCR扩增和人工合成等。
（2）绿色荧光蛋白基因导入小鼠受精卵，而不导入体细胞的原因是________。
（3）由含绿色荧光蛋白基因的DNA和质粒拼接成重组质粒需用到的工具酶是___________。将重组质粒导入小鼠受精卵的方法是___________________，而培育转基因双子叶植物时将目的基因导入受体细胞的常用方法是______________________
（4）为了检测绿色荧光蛋白基因是否成功表达，从分子水平上可采用的方法是___________；从个体水平上可采用的方法是______________________。

【推荐3】根据光合作用碳素同化的最初光合产物的不同，高等植物分为C₄植物（如玉米）和C₃植物（如水稻），C₄植物在叶肉细胞中PEPC酶的催化下将CO₂固定产生四碳化合物，然后由叶肉细胞运输到维管束鞘细胞中分解，释放出CO₂用于卡尔文循环，这一“CO₂泵”可在维管束鞘细胞中产生CO₂浓缩效应，大大提高了光合作用效率。C₃植物在Rubisco酶的作用下可直接把CO₂固定成三碳化合物，而在CO₂/O₂较低时，植物能吸收O₂分解C₅产生CO₂，这个“耗能浪费”的过程称为光呼吸。
(1)在探索玉米和小麦碳素同化的最初光合产物是哪种物质时，分别向两种植物提供充足的¹⁴CO₂，照射5秒，结果在多种物质中检测到¹⁴C。你将如何改进实验过程？_____。
(2)干旱环境下，C₄植物比C₃植物长势更好，原因是_______________。
(3)科学家将玉米的PEPC基因导入水稻后，测得光照强度对转基因水稻和原种水稻的气孔导度及光合速率的影响，结果如下图所示。

光照强度为10×10²μmol•m^-2•s^-l时，转基因水稻的净光合速率高于原种水稻，其主要原因是___________________________。光照强度为14×10²μmol•m^-2•s^-1时，转基因水稻依然比原种水稻净光合速率高，推测在强光下PEPC酶的功能特点是_______________。
(4)为了证实“高光强下转基因水稻光合速率的增加与玉米PEPC基因导入产生的酶有关”，请利用PEPC转基因水稻和原种水稻、PEPC酶的专一抑制剂DCDP等设计实验，写出实验思路并预测实验结果。___________________________________________。

【推荐1】M基因编码的M蛋白在动物A的肝细胞中特异性表达。现设计实验，将外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通过核移植、胚胎培养和胚胎移植等技术获得M基因失活的转基因克隆动物A，流程如图所示。回答下列问题：


(1)在构建含有片段F的重组质粒过程中，将目的基因和质粒“缝合”在一起的工具酶是DNA连接酶。该酶据来源可以分为两类，其中_____________既可以“缝合”黏性末端，又可以“缝合”平末端。将重组质粒导入成纤维细胞常用的方法是_____________。
(2)动物细胞培养液中通常需要添加一定量的______，以防止培养过程中的污染。在无菌、无毒等适宜环境中进行动物A成纤维细胞的原代和传代培养时，需要定期更换培养液，目的是____。
(3)与胚胎细胞核移植技术相比，体细胞核移植技术的成功率更低，原因是_________。从早期胚胎中分离获得的胚胎干细胞，在形态上表现为_____，功能上具有_____。

【推荐2】肠道病毒71型（EV71）为单股正链RNA病毒，是引起手足口病的主要病原体之一，在EV71中，病毒结构蛋白1（VP1）为主要的中和抗原（中和抗原与中和抗体结合后能阻止病原体入侵与增殖）。下图为利用重组大肠杆菌表达VP1蛋白，并以VP1蛋白为抗原制备单克隆抗体的过程。回答以下问题：

(1)在由EV71病毒的RNA获得cDNA并形成重组大肠杆菌的过程中，需用到的酶有____________。与将目的基因导入大肠杆菌过程不同的是，在农杆菌转化法中农杆菌细胞含有的Ti质粒上的______能将目的基因转移到受体细胞的染色体上。
(2)杂交瘤细胞在体外培养时，将杂交瘤细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基称为______，在使用该种培养基培养动物细胞时，通常还需要添加______等天然成分。并置于37℃、50mL/L培养箱中培养。培养箱中的作用是____________________。
(3)题干中HAT培养基的作用是________________。
(4)下图是研究人员对A和B两种单克隆抗体的检测结果。请选出A和B两种单克隆抗体中适用性更强的单克隆抗体及选择理由________________________________。

【推荐3】利用体细胞核移植来克隆高产奶牛的大致流程如下图，其中Kdm4d为组蛋白去甲基化酶。回答下列问题：

(1)过程①应选用处于____的卵母细胞，可采用____法去核。在过程②③中所需气体主要有O₂和CO₂，O₂是细胞代谢所必需的，CO₂的主要作用是____。
(2)重构细胞经分裂、发育至____时期，可移植到受体母牛子宫中。移植之前，需要对受体母牛进行____处理。若要获得遗传性状完全相同的多只犊牛，可对囊胚阶段的胚胎进行分割，操作时要注意____，分割后进行移植。犊牛的表现型不完全与高产奶牛一致，原因可能是____（答一点）。

【推荐1】下图是用多种生物学工程的方法来培育牛奶中含人乳铁蛋白的奶牛的过程。请回答：

(1)图中的A、B分别代表的技术是_____________________________，A中所用培养液的成分除一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及___________等物质。
(2)为了快速繁育产人乳铁蛋白的奶牛，通过对筛选子代进行核移植。获取的卵母细胞要培养到________________时期才能进行核移植，得到的动物称作_______________________
(3) 在体外胚胎培养时，应选用囊胚的________进行DNA分析，用于选择雌性胚胎。此期的胚胎也适于胚胎分割移植，同时获得更多的相同转基因奶牛，该过程应选择__________________的囊胚或桑椹胚进行操作。若对囊胚进行操作，应注意___________________。
(4)检测人乳铁蛋白基因是否成功表达的方法是_______________________________。

【推荐2】随着生物科学技术的发展，动物的生殖方式变得越来越多样化。如图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况﹐供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是健康的黄牛，请据图回答下列问题：

(1)应用1中获得的良种小牛，遗传物质来源于______________个体，性别为______________。
(2)应用3可解决良种动物快速大量繁殖的问题；对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将_________均等分割，否则将影响分割后胚胎的恢复和进一步发育，如需做性别鉴定，还需从_____________细胞取样做DNA分析。
(3)应用4中细胞进行定向诱导，可分化形成各种组织和器官。在胚胎干细胞培养过程中除需要适宜的温度、无菌、无毒等环境条件以外，培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、核苷酸，还要加入______；向培养液中通入95%空气和5%二氧化碳，空气中的氧气参与细胞的代谢，二氧化碳的主要作用是____________。

【推荐3】北方白犀牛曾经广泛分布于非洲中部等地，但由于猖獗的盗猎和自然栖息地的丧失，它们的数量不断减少。2018年3月，世界上最后一头雄性北方白犀牛死亡，该物种仅剩下两头雌性，在此之前，研究人员设法保存了北方白犀牛的精子。多个研究团队试图通过多种技术手段繁育该物种。请回答下列（一）（二）两小题。
（一）一个研究团队试图培育试管北方白犀牛，其主要流程如下图1。
   
(1)①过程需要对雌性北方白犀____________促性腺激素（注射/饲喂/注射或饲喂），目的是使其超数排卵。取自雌性北方白犀牛体内的卵母细胞需要培养至____________（时期）才能与获能的精子受精。
(2)研究团队将体外受精得到的受精卵培养至桑椹胚或囊胚后移植至南方白犀牛的子宫中孕育，为了使受体生理状态更适合胚胎移植，应对其进行_____________处理以提高成功率。
(3)利用该技术培育新个体的繁殖方式属于_____________（有性/无性）繁殖。
（二）另一个团队试图培育克隆北方白犀牛，其主要流程如下图2。
   
(4)进行核移植之前需要从北方白犀牛身上取少量细胞以获得足够量的供体细胞，为了保证培养过程不被杂菌污染往往需要向培养液中加_____________。通常还会将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入培养瓶中，目的是____________以增加培养的细胞数量。
(5)取自雌性北方白犀牛的卵母细胞培养至MⅡ时需要去核，在去核操作中常采用的方法是_____________法。
(6)该团队获得的克隆北方白犀牛的性别为____________（雌性/雄性/雌性或雄性）。