【推荐1】回答有关细胞工程有关的问题

Ⅰ、图为细胞融合的一般过程，请据图回答：
（1）若A、B为植物细胞，在细胞融合之前已用__________处理，除去了细胞壁；A、B到C的过程中，常用的物理方法是_____________（至少写两个）。形成的D细胞还要应用植物组织培养技术把D培养成植株。
（2） 若A、B是动物细胞，从A、B到C的过程中，常用的诱导剂是__________。
（3）若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠B淋巴细胞，如果仅考虑细胞的两两融合，则细胞C的类型最多可形成____种。从遗传学的角度看，C属于____（填“二倍体”或“四倍体）细胞。
（4）对细胞C需要使用特定的_______培养基进行多次筛选、克隆化培养和______，最终才能获得足够数量的细胞D，细胞D的特点是________。
（5）在对细胞D进行体外培养时，为防止培养过程中污染，培养基中需要加入适量的________，此外还应将培养皿或松盖培养瓶置于含有95%空气加5%CO₂混合气体的培养箱培养。混合气体中含有5%CO₂的目的是__________。

【推荐2】如图为细胞融合的简略过程，请据图回答：

（1）若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已处理，除去了__________；A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法是____________________；融合完成的标志是___________________；则形成的D细胞还要应用______________________技术把D培养成植株。
（2）若A、B是动物细胞，则一般取自幼龄动物组织或胚胎，然后用___________使其分散开来；A、B到C的过程中常用的但不能用于植物体细胞杂交的手段是__________________。
（3）若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠效应B细胞，那么，在获得此细胞之前，小鼠已被注射了__________________。注射后小鼠身体产生了相应的免疫反应，图中B为_____________________。用来培养的D细胞应该是能产生特定抗体的__________________。

【推荐3】随着妊娠年龄的增加，21三体的发病风险在不断增加，需要进行产前诊断来预防患病孩子的产生。常用的方法有：
（1）唐氏筛查：抽取孕妇血液化验，检测血清中的甲型胎儿蛋白、绒毛膜促性腺激素等指标。检测这些物质可用__________技术，以细胞工程技术生产的、纯度高的__________为试剂进行检测。筛查出的高危孕妇还需要进一步检查鉴定。
（2）羊水检查：胎儿的某些细胞会脱落在羊水中，通过羊水穿刺，可以得到胎儿的细胞。将这些细胞通过__________技术以扩大细胞的数量，选择__________（填细胞分裂时期）的细胞进行染色体核型分析，了解胎儿细胞染色体的结构和__________是否正常。
（3）无创基因检测：在孕妇的血液中存在胎儿游离DNA片段，可以对21号染色体上的特有基因DSCR₃和非21号染色体上的基因GAPDH（做参照）进行实时荧光定量PCR扩增，以测定DSCR₃基因和GAPDH基因的含量，计算2种基因剂量的比值。如：

	样品数	DSCR3/GAPDH
正常人	80	0．884±0．420
21三体胎儿	5	1．867±0．054
21三体患者	7	1．810±0．169

要利用胎儿游离的DNA片段扩增出相应的基因，关键是__________的设计。从上述表格看，正常出人与21三体患者的比值有差异，其主要原因是_______________________________。

【推荐1】2018年1月25日报道，两只克隆猕猴“中中”和“华华”在中国诞生，突破了现有技术无法克隆灵长类动物的世界难题，将为阿尔茨海默症、自闭症等脑疾病带来前所未有的光明前景，图为过程流程图，请回答下列有关问题：

(1)动物细胞培养一般分为________和________两个阶段过程。在前一阶段，贴壁的细胞会出现___________现象，所以要进行________。
(2)①表示去除细胞核，该过程一般要在卵母细胞培养至___________时期再进行。
(3)在猕猴体细胞核移植实验中，若最终获得的克隆猴与供体猴性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其原因：________________。

【推荐2】我国研究人员在世界上率先利用去甲基化酶（Kd4d）的mRNA，经体细胞核移植技术培育出第一批灵长类动物——食蟹猴，流程如图所示，①～⑥表示过程，该动物可作为研究癌症等人类疾病的动物模型。请据图分析回答：

(1)获得食蟹猴的体细胞核移植技术难度明显高于胚胎细胞核移植，原因是_____。
(2)进行过程①时，细胞培养的培养液成分与植物组织培养基成分最主要的区别在于前者含有_____，且在进行细胞原代培养时会出现_____现象。
(3)研究人员在确定去甲基化酶（Kd4d）的mRNA的作用时，做了两组实验，其中A组用正常培养液培养融合细胞，B组用正常培养液培养注入了Kd4d的mRNA的融合细胞，实验结果如下图所示。分析实验数据可知，Kd4d的mRNA的作用是_____。

(4)科研人员发现对于灵长类动物的体细胞来说，单靠核移植本身并不足以使重构胚顺利发育成存活个体，还需要对供体细胞核进行表观遗传修饰才能开启细胞核的全能性。研究表明染色体组蛋白动态可逆地被修饰酶所改变，控制着基因的表达（如图所示）。

①据图分析，（       ）组蛋白乙酰化水平和（       ）组蛋白去甲基化水平有利于相关基因恢复表达，开启细胞核全能性，从而显著提高重构胚的发育率。括号内应填入的选项是_____。
A．提高；提高      B．降低；降低      C．提高；降低      D．降低；提高
②科研人员通过设计实验验证以上观点。供选择试剂为：组蛋白去甲基化酶的mRNA、组蛋白甲基化酶的mRNA、组蛋白去乙酰化酶抑制剂、生理盐水。
实验思路：将重构胚均分为甲、乙、丙、丁四组，分别注入等量的组蛋白去乙酰化酶抑制剂、_____、_____、等量生理盐水。一段时间后分别检测各组的胚胎发育率。
实验结果：各组的胚胎发育率丙组>甲组=乙组>丁组。

【推荐3】CRISPP/Ces9是一种高效的基因编辑技术，通过切割DNA双链以敲除目标基因或插入新的基因。科学家构建了如图所示的两种质粒，并包埋于脂质体中，然后将脂质体加入含受体细胞的培养皿中，实现了基因转移。回答下列问题：

(1)研究发现CRISPR - Cas9系统广泛存在于细菌细胞内，推测该系统在细菌细胞内的作用是_______________.CRISPR - Cas系统中 Cas9蛋白具有内切酶活性，水解目标 DNA 的__________填化学键）。
(2)实验中利用脂质体能实现基因转移的原理__________________。24 h后在培养皿中添加__________筛选并进行单细胞培养，经检测后即可得到基因编辑后的细胞。此过程须在37 ℃，气体环境为95%空气＋5% CO₂的（填装置）中进行。
(3)转染好的细胞用裂解液消化后，使用RNA提取试剂盒提取总RNA，使用反转试剂盒选行逆转录，最终得到___________，再进行PCR。进行PCR时，a个双链DNA经过n轮扩增，理论上至少需要的引物数量为___。

【推荐1】研究人员把猪卵母细胞进行人为的孤雌激活处理，使其发育成胚胎，移植到代孕母猪体内，获得了成活的孤雌生殖克隆猪。这种克隆猪不同于核移植获得的克隆猪，现将两种技术进行比较。请回答有关问题：

(1)图中过程①②③④是获得孤雌生殖克隆猪的技术流程，那么获得核移植克隆猪的技术流程是过程_____________(填序号)。
(2)孤雌生殖克隆猪仍然是二倍体生物，但由于缺失________方亲本基因，导致其生长发育中出现多种问题，给研究者提供了很好的材料。
(3)体细胞核移植技术中也会用到卵母细胞，需要选择发育至____________的卵母细胞，并用微型吸管吸出_________________________。
(4)完成过程③时，应选择发育良好、形态正常的_______________。进行⑤过程之前，需要对代孕母猪进行_____________处理，为早期胚胎发育提供相同的生理环境。受体对移入子宫的外来胚胎基本不发生_____________反应，这为胚胎存活提供了可能。
(5)胚胎移植技术的优势是____________________________________________。

【推荐2】图甲是抗寨卡病毒（一种RNA病毒）单克隆抗体制备的过程图，图乙是克隆羊培育过程示意图。请据图回答下列问题：

（1）图甲和图乙所示的过程中，应该都会用到的动物细胞工程技术是__________。
（2）图甲中②过程常需要借助动物细胞融合技术，其生物学原理是__________，该过程中动物细胞融合所特有的方法是使用__________诱导细胞融合。
（3）利用基因工程生产寨卡病毒的疫苗时，需要将重组DNA导入细菌细胞中，这一步骤常用的方法是__________。
（4）核移植时受体应选用________期的卵母细胞。多利的性状主要与_________绵羊相同。
（5）在制备单克隆抗体的过程中，进行了两次筛选，第一次筛选是利用HAT__________（填“选择”或“鉴别”）培养基，由于骨髓瘤细胞无法在HAT培养基上生存，所以只有__________细胞能长期存活；第二次筛选获得________________。

【推荐1】2017年11月27日，世界上首只体细胞克隆猴“中中”诞生，10天后，第二只克隆猴“华华”诞生。至此，我国跨越了国际上未解决的问题，成功克隆了与人类最相近的灵长类动物。这意味着中国将率先建立起可有效模拟人类疾病的动物模型。根据材料及所学知识，分析并回答下列问题。
（1）科研人员提取了一个流产猕猴胎儿的体细胞，取其细胞核与若干个去核卵细胞融合，发育成克隆猴，该过程所运用的生物学原理是__________________全能性。
（2）重组细胞在一定条件下要经过细胞分裂和分化，才能发育成克隆猕猴，分裂过程中遗传信息_________（“会”或“不会”）发生改变，分化的特点包括 ______________________     。（答到两点即可）
（3）分化过程中，不同细胞的形态、结构和生理功能存在差异，根本原因是 __________ 。
（4）克隆猴与人均属于灵长类动物，但它们不属于同一物种，理由是 ________________ 。

【推荐2】世界上首只体细胞克隆猴“中中”于2017年11月27日诞生, 意味着中国将率先建立起可有效模拟人类疾病的动物模型。利用克隆技术，未来可在一年时间内，培育大批遗传背景相同的模型猴。这既能满足脑疾病和脑高级认知功能研究的迫切需要，又可广泛应用于新药测试。如图为克隆猴的培育流程。请回答：
     
(1)为了获得较多的卵母细胞需要对供体注射___________，卵母细胞要培养至________时期再进行核移植。
(2)胚胎成纤维细胞在培养过程中需要一定的气体环境，其中CO₂ 的主要作用是_________。
(3)克隆猴本质上是一种___________繁殖，该过程的最后一道工序是_______________ 。
(4)克隆猴的成功为解决人类器官移植来源不足和免疫排斥迈出了重大一步。构建重组细胞后，经培养形成胚胎干细胞，胚胎干细胞具有_______的特性，在培养液中加入___________因子可以定向诱导分化出人类的某种器官，也可以培养在___________细胞上，使其维持不分化状态。

【推荐3】中国科学家成功突破了克隆猴这个世界生物学前沿的难题，率先建立起可有效模拟人类疾病的动物模型，实现了我国在非人灵长类研究领域由国际“并跑”到“领跑”的转变。据此回答下列问题。
（1）克隆猴的诞生，体现了动物细胞的_____具有全能性。克隆过程中一般利用未受精的去核卵细胞作为受体细胞，原因是____。
（2）克隆猴培养过程中需要用___酶处理使细胞从瓶壁上分离下来。为了提高动物细胞克隆形成率，可以选择适宜的培养基添加___等天然成分，以滋养细胞支持生长。培养箱中通常要维持一定的CO₂浓度，CO₂的作用是___。克隆猴除了用到动物细胞工程的相关生物技术手段外，还必须用到____和___等技术。