请回答下列蛋白质的提取和分离实验相关问题:
(1)凝胶色谱法是根据_________________ 分离蛋白质的有效方法。
(2)蛋白质的提取和分离实验中洗涤红细胞的目的______________________________ 。
(3)重复洗涤三次,直至____________________ ,表明红细胞已洗涤干净。在该过程中离心速度过高和时间过长会导致___________________________ 。
(4)在凝胶色谱柱装填时不得有气泡存在,原因为气泡会________________________ 。在操作中不能发生洗脱液流干漏出凝胶颗粒的现象,如果发生则___________________ 。
(5)在蛋白质的分离过程中如果观察到__________________________________ ,说明色谱柱制作成功。
(1)凝胶色谱法是根据
(2)蛋白质的提取和分离实验中洗涤红细胞的目的
(3)重复洗涤三次,直至
(4)在凝胶色谱柱装填时不得有气泡存在,原因为气泡会
(5)在蛋白质的分离过程中如果观察到
更新时间:2019-07-23 09:40:27
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【推荐1】生物技术的广泛应用,给社会带来了较大的经济效益,受到社会的广泛关注。在应用生物技术时,我们通常需要对相应的生物或成分进行分离、纯化及鉴定。
(1)要分离、纯化大肠杆菌,需要在固体培养基表面接种大肠杆菌,最常用的接种方法是____________ 。若要鉴定大肠杆菌可用____________ 培养基。
(2)为确定得到的是纤维素分解菌,在染色法鉴定后,还需要进行发酵产____________ 的实验,测定该发酵产物的方法一般是____________ 。
(3)在香料工业提取的“液体黄金”玫瑰油中,要求不含有任何添加剂或化学原料,其提取方法主要是水蒸气蒸馏法,该方法的原理是________________________ 。
(4)萃取胡萝卜素的装置中,采取水浴加热的原因是____________ ,在加热瓶口安装冷凝装置的目的是____________ 。
(5)从生物材料中得到的蛋白质提取液中往往含有一些无机盐类的小分子,可以用____________ (填“盐析”或“透析”)的方法去除这些小分子,该方法____________ (填“”或“不能”)彻底分离不同大小的蛋白质。
(1)要分离、纯化大肠杆菌,需要在固体培养基表面接种大肠杆菌,最常用的接种方法是
(2)为确定得到的是纤维素分解菌,在染色法鉴定后,还需要进行发酵产
(3)在香料工业提取的“液体黄金”玫瑰油中,要求不含有任何添加剂或化学原料,其提取方法主要是水蒸气蒸馏法,该方法的原理是
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【推荐2】根据相关知识,回答下列问题:
(1)若要提高衣物上血渍的去除效果,可在洗衣粉中加入______________ ,因为其能将血红蛋白水解成可溶性的氨基酸或小分子肽。使用加酶洗衣粉时,水温过低或过高时洗涤效果不好的原因分别是______________________________________________________________ 。加酶洗衣粉可以降低表面活性剂和三聚磷酸钠的用量,使洗涤剂朝_____________ 的方向发展,减少对环境的污染。
(2)果胶酶是分解果胶的一类酶的总称,包括果胶酯酶、____________________ 和______________________ 。
(3)制备固定化酶时,一般不宜采用包埋法,原因是__________________________________ 。
(4)测定蛋白质分子量时可使用聚丙烯酰胺凝胶电泳,通常会在凝胶中添加SDS,SDS的作用是_____________________________________ 和___________________________________ 。
(1)若要提高衣物上血渍的去除效果,可在洗衣粉中加入
(2)果胶酶是分解果胶的一类酶的总称,包括果胶酯酶、
(3)制备固定化酶时,一般不宜采用包埋法,原因是
(4)测定蛋白质分子量时可使用聚丙烯酰胺凝胶电泳,通常会在凝胶中添加SDS,SDS的作用是
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【推荐3】回答下列与泡菜和腐乳的生产相关的原理及技术性问题。
(1)膳食中的绝大部分亚硝酸盐在人体内以“过客”的形式随尿排出,只有在适宜的pH、温度和一定的微生物作用下,才会转变成致癌物______ 。测定泡菜中亚硝酸盐的含量常采用____________ ,因为亚硝酸盐与对氨基苯磺酸的反应产物能与N-1-萘基乙二胺偶联成__________ 色化合物。
(2)大规模生产优质泡菜时,需先获得优质的乳酸菌种,若要从陈泡菜水中分离、纯化乳酸菌单菌落需在液体培养基中加入______ (填物质名称)。乳酸菌进行乳酸发酵时,首先将糖类转化为丙酮酸,再在乳酸脱氢酶的参与下将丙酮酸转化为乳酸。若要从乳酸菌中分离、纯化获得乳酸脱氢酶,可采用___________________ 法。判断上述方法纯化的蛋白质是否达到要求,还需要进行蛋白质纯度的鉴定,在鉴定的方法中,使用最多的是________________________ 。
(3)在腐乳制作时,要加盐腌制,主要目的之一是浸提毛霉中的_____________________ 酶。要制作出色香味俱全的腐乳,关键在于卤汤的配制,卤汤中酒的含量控制在________ %左右。
(4)毛霉产生的酶能将酪蛋白分解而产生透明圈,在酪蛋白培养基中筛选到三个单菌落甲、乙、丙,其菌落直径分别为3.2cm、2.8cm、2.9cm,其菌落与透明圈一起的直径分别为3.7cm、3.5cm、3.3cm。应选择菌落______ (填甲、乙或丙)作为产蛋白酶活力高的毛霉候选菌。
(1)膳食中的绝大部分亚硝酸盐在人体内以“过客”的形式随尿排出,只有在适宜的pH、温度和一定的微生物作用下,才会转变成致癌物
(2)大规模生产优质泡菜时,需先获得优质的乳酸菌种,若要从陈泡菜水中分离、纯化乳酸菌单菌落需在液体培养基中加入
(3)在腐乳制作时,要加盐腌制,主要目的之一是浸提毛霉中的
(4)毛霉产生的酶能将酪蛋白分解而产生透明圈,在酪蛋白培养基中筛选到三个单菌落甲、乙、丙,其菌落直径分别为3.2cm、2.8cm、2.9cm,其菌落与透明圈一起的直径分别为3.7cm、3.5cm、3.3cm。应选择菌落
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【推荐1】纳豆和腐乳都是豆类发酵品,用纳豆杆菌发酵大豆制作纳豆的流程原理与腐乳的制作相似。纳豆杆菌能分泌纳豆激酶等。回答下列问题
(1)纳豆制作的原理是___________________________ 。
(2)纳豆激酶能够水解血栓中水不溶性的纤维蛋白,所以具有溶解血栓的作用。纳豆杆菌的筛选和分离常用到由磷酸盐缓冲液、纤维蛋白和琼脂配制而成的乳白色的纤维蛋白培养基。从培养基营养组成的角度来看,其中的纤维蛋白的作用是__________________________ 。
若培养基上出现_________________________ ,说明含有纳豆杆菌。
(3)提纯纳豆激酶可用于制备药物。为提取纯化钠豆激酶,可进行下列实验:
①接种具有高纤溶活性的菌落到液体发酵培养基。37℃,摇床振荡,发酵3天。
②收集发酵液,离心,分层,取_____________ 作为提取纳豆激酶的材料。
③透析法分离:将上述离心所得样品装入透析袋,置于25mmo/L磷酸盐缓冲液中透析,以便达到__________________________ 的目的。
④凝胶色谱纯化:将透析液进行柱层析,用____________ 进行洗脱,试管连续收集。
⑤为了确认试管收集液中是否含有纳豆激酶,还要__________________________ 。
(1)纳豆制作的原理是
(2)纳豆激酶能够水解血栓中水不溶性的纤维蛋白,所以具有溶解血栓的作用。纳豆杆菌的筛选和分离常用到由磷酸盐缓冲液、纤维蛋白和琼脂配制而成的乳白色的纤维蛋白培养基。从培养基营养组成的角度来看,其中的纤维蛋白的作用是
若培养基上出现
(3)提纯纳豆激酶可用于制备药物。为提取纯化钠豆激酶,可进行下列实验:
①接种具有高纤溶活性的菌落到液体发酵培养基。37℃,摇床振荡,发酵3天。
②收集发酵液,离心,分层,取
③透析法分离:将上述离心所得样品装入透析袋,置于25mmo/L磷酸盐缓冲液中透析,以便达到
④凝胶色谱纯化:将透析液进行柱层析,用
⑤为了确认试管收集液中是否含有纳豆激酶,还要
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【推荐2】红细胞含有大量的血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的,血红蛋白的主要功能是携带O2或CO2,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白,请回答下列有关问题:
(1)血红蛋白提取和分离的过程可分为四步:________ 、________ 、________ 和________ 。
(2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集、血红蛋白溶液。
①加入柠檬酸钠的目的是________________ 。
②以上所述的过程即是样品处理,它包括________ 、________ 收集血红蛋白溶液。
(3)洗涤红细胞的目的是________________________ 。
(4)你如何知道红细胞已洗涤干净?_______________________________________ 。
(5)分离红细胞时的离心速度及离心时间分别是_______________________________________ 。
(6)若离心速度过高和时间过长结果会怎样?_______________________________________ 。
(7)将收集的血红蛋白溶液放在透析袋中进行透析,即样品的粗分离。
①透析的目的是______________________ 。
②透析的原理是______________________ 。
(8)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化,最后经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。样品纯化的目的是_______________________________________ 。
(1)血红蛋白提取和分离的过程可分为四步:
(2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集、血红蛋白溶液。
①加入柠檬酸钠的目的是
②以上所述的过程即是样品处理,它包括
(3)洗涤红细胞的目的是
(4)你如何知道红细胞已洗涤干净?
(5)分离红细胞时的离心速度及离心时间分别是
(6)若离心速度过高和时间过长结果会怎样?
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①透析的目的是
②透析的原理是
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【推荐3】下面是某研究小组开展的“猪血浆白蛋白的提取及相对分子质量测定”研究,请协助完成有关问题:
材料仪器:新鲜猪血、低速冷冻离心机、透析袋、电泳仪等。
化学试剂:pH为7.4的缓冲液、柠檬酸钠,奈氏试剂(与NH4+反应出现黄色或红棕色沉淀)、饱和(NH4)2SO4溶液、生理盐水等。
实验步骤:
(1)样品获取:向新鲜猪血中加入__________ ,静置一段时间后取上层血浆。
(2)盐析法粗提蛋白质:
①向血浆中加入一定体积的饱和(NH4)2SO4溶液,使(NH4)2SO4的浓度达到50%,充分混合后静置、离心,取沉淀物。
②向沉淀物中加入适量生理盐水使之溶解,再向其中加入一定体积的饱和(NH4)2SO4溶液,使(NH4)2SO4的浓度达到33%,充分混合后静置、离心,取沉淀物。
③重复步骤①②2~3次,最后用生理盐水将沉淀溶解,即得粗提品。
盐析粗提血浆白蛋白的主要原因是_______________________________________ ,重复步骤①②的主要目的是____________________________________________ 。
(3)透析除盐:将粗提品装入透析袋,以pH为7.4的缓冲液作透析液。每隔4 h更换一次透析液,每次更换前利用奈氏试剂检测透析液中NH4+的量。利用缓冲液作透析液的目的是_______________ 。检测中,若观察到透析液中______________________ 时,即可终止透析。
(4)凝胶色谱法分离:透析后的样品经凝胶柱洗脱,获得纯净血浆白蛋白样品。
(5)蛋白质鉴定:化学物质SDS能使蛋白质变性,解聚成单条肽链。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中加入一定量的SDS,电泳迁移率完全取决于肽链的分子大小。如图所示为本实验中用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血浆白蛋白的结果。根据电泳结果,某同学得出“提取的血浆白蛋白含有两条肽链”的结论,这种说法__________ (填“可靠”或“不可靠”),理由是______
材料仪器:新鲜猪血、低速冷冻离心机、透析袋、电泳仪等。
化学试剂:pH为7.4的缓冲液、柠檬酸钠,奈氏试剂(与NH4+反应出现黄色或红棕色沉淀)、饱和(NH4)2SO4溶液、生理盐水等。
实验步骤:
(1)样品获取:向新鲜猪血中加入
(2)盐析法粗提蛋白质:
①向血浆中加入一定体积的饱和(NH4)2SO4溶液,使(NH4)2SO4的浓度达到50%,充分混合后静置、离心,取沉淀物。
②向沉淀物中加入适量生理盐水使之溶解,再向其中加入一定体积的饱和(NH4)2SO4溶液,使(NH4)2SO4的浓度达到33%,充分混合后静置、离心,取沉淀物。
③重复步骤①②2~3次,最后用生理盐水将沉淀溶解,即得粗提品。
盐析粗提血浆白蛋白的主要原因是
(3)透析除盐:将粗提品装入透析袋,以pH为7.4的缓冲液作透析液。每隔4 h更换一次透析液,每次更换前利用奈氏试剂检测透析液中NH4+的量。利用缓冲液作透析液的目的是
(4)凝胶色谱法分离:透析后的样品经凝胶柱洗脱,获得纯净血浆白蛋白样品。
(5)蛋白质鉴定:化学物质SDS能使蛋白质变性,解聚成单条肽链。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中加入一定量的SDS,电泳迁移率完全取决于肽链的分子大小。如图所示为本实验中用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血浆白蛋白的结果。根据电泳结果,某同学得出“提取的血浆白蛋白含有两条肽链”的结论,这种说法
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