【推荐1】I、抗体的制备经历了细胞学层面和分子学层面两种合成途径的研究。下列是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图。

（1）在获取抗体之前，需要向健康人体注射特定抗原（如乙肝疫苗），并且每隔一周重复注射一次。免疫学称细胞A为_______________________，该细胞在人体主要介导____________________免疫。
（2）过程①至②抗体的获取称为____________________，其中①是__________________过程，Y细胞称为________________。
II、上图中，结构甲的建构可用下图1和2表示。图1表示含有目的基因的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为下表所示。

限制酶	MspⅠ	BamHⅠ	MboⅠ	SmaⅠ
识别序列及切割位点

（1）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为________________。
（2）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1及对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有_______种不同长度的DNA片段。
（3）上述结构中的建构过程可知，在限制酶作用下得到的产物有多种，生产上多采用_______技术来降低目的基因分离提取的难度，也有利于限制酶的回收和再利用。
（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行拼接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是_____。在导入重组质粒后，为了筛选出含有重组质粒的大肠杆菌，一般需要添加______的______（固体/液体）培养基进行培养。在培养前，培养基必须先经过灭菌，所用的方法是______________；采用__________的方法接种以获得单菌落后继续筛选。

【推荐2】Ⅰ、细胞融合又称体细胞杂交，是指两个或更多个相同或不同细胞融合形成单个细胞的过程。下图为细胞融合的一般过程，请据图回答：

（1）若A、B为植物细胞，在细胞融合之前已用__________处理，除去了细胞壁；A、B到C的过程中，常用的物理方法是_____________（至少写两个）。形成的D细胞还要应用植物组织培养技术把D培养成植株。
（2） 若A、B是动物细胞，一般取自动物胚胎或幼龄动物的器官或组织，原因是_________，然后用胰蛋白酶处理使其分散开来；从A、B到C的过程中，常用的诱导剂是____。
（3）若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠B淋巴细胞，在获得此细胞之前，小鼠已被注射了______；由D细胞连续分裂产生大量细胞的过程称为克隆，这种细胞的特点是_____________________。
Ⅱ、人的血清白蛋白（HAS）在临床上需求量很大，目前通常将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，利用牛的乳腺细胞生产血清白蛋白，基本步骤如下：
Ⅰ.采集良种供体奶牛的卵母细胞和精子，通过体外受精，形成受精卵；
Ⅱ.将人血清白蛋白基因导入奶牛受精卵，形成重组细胞；
Ⅲ.电脉冲刺激重组细胞，促使其形成早期胚胎；
Ⅳ.将胚胎移植到受体母牛的子宫中，最终发育成转基因小牛。
请回答下列问题：
（1）步骤Ⅰ中，卵母细胞与精子结合过程中防止多精入卵的生理反应包括_____________________。
（2）步骤Ⅱ中，将人的血清白蛋白基因导入牛受精卵最为有效的方法是________。导入基因前，需要将血清白蛋白基因与_____________________等调控组件重组在一起。
（3）步骤Ⅲ中，进行动物早期胚胎的体外培养时，培养液中除了含有各种无机盐和有机盐、____、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还需要添加_____和动物血清。一般情况下，通常在合成培养基中加入一定量的抗生素，其目的是_________。
（4）步骤Ⅳ中，应选择性别为______的奶牛胚胎进行移植。

【推荐3】2020年，2019-nCoV（新型冠状病毒）肆虐全球，直至今日，疫情在很多国家仍没有得到有效控制。下图1为2019-nCoV的结构示意图，其中蛋白S（刺突糖蛋白）通过与人体黏膜细胞表面的ACE2受体结合而进入细胞，蛋白M能刺激机体产生免疫反应;图2是科研人员研制新冠病毒疫苗的一条技术路线。请据图回答有关问题。

(1)2019-nCoV能通过蛋白S感染人的黏膜细胞，却不能感染人的皮肤细胞，其根本原因是________________________________________。
(2)图2中①过程为表示人工合成目的基因，下列结构中不会出现在反应体系中的有（       ）

A．	B．
C．	D．

(3)②过程中构建重组DNA需要的工具酶有___________。
(4)pVAX1是一种可以应用于人体的载体质粒，其化学本质是DNA，它在与目的基因一起构建疫苗Ⅱ时，一般需要使用两种限制性核酸内切酶切割目的基因和pVAX1，这样做的目的是：_____________________。
(5)疫苗Ⅰ和疫苗Ⅱ同为通过基因工程获得的疫苗，它们在人体内引起免疫效应的过程有何不同?____________________________________。

【推荐1】三氯生是一种抑苗物质，可以替代抗生素用于基因工程中筛选含目的基因的受体细胞。2021年某科研团队通过先筛选出一种对三氯生抵抗性较强的重组质粒，再将可以受温度调控 的基因插入该质粒上，构建了温度调控表达质粒。
   
(1)图1中，步骤1需要的工具酶是______________；步骤Ⅱ常用的方法是用____________处理使细菌成为感受态细胞；为达到步骤Ⅲ预期的筛选目的，所用物质X最可能为___________________。
(2)已知fabV基因（-A和-B代表从不同苗中获得）可以使大肠杆菌抵抗三氯生。在图中，fabV-A基因和 fabV-B基因是_____________（目的/标记）基因。
(3)利用从细菌中提取的DNA通过PCR技术获取fabV-A基因时，需要的特定酶是________。该酶只能从引物的________端延伸DNA链，而不能从头开始合成DNA，因此需要先根据_____设计两种特异性引物序列。
(4)为获得一种增强大肠杆菌对三氯生的抵抗作用效果较好的重组质粒，将含有不同质粒的大肠杆菌分别接种到相应培养基中。培养一段时间后，结果如图2，则适宜选作构建温度调控表达质粒的是_________。

   
(5)科学家对上述选出质粒进行改造，获得了图3所示质粒。其中P₁和P₂是启动子，可以启动转录；C基因在低温下会抑制P₁；R基因在高温下会抑制P₂；T₁和T₂是终止子，可以终止转录。如果将lacZ基因和GFP基因插入图质粒中，使得最后表现为高温下只表达GFP蛋白，而低温下只表达lacZ蛋白。则以下说法正确的有              。

A．GFP基因插在R基因和终止子T1之间

B．lacZ基因插在R基因和终止子T1之间

C．GFP基因插在启动子P2和终止子T2之间

D．lacZ基因插在启动子P2和终止子T2之间

【推荐2】人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：

(1)htPA基因与载体用_________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用_________技术。
(2)为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其__________。采集的精子需要经过________才具备受精能力。
(3)将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行__________。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，该过程的生殖方式是__________。
(4)若检测到转ht-PA基因母羊_________，说明目的基因成功表达。

【推荐3】β-1，3葡聚糖酶可以水解许多病原真菌细胞壁外层的β-1，3葡聚糖和几丁质，降解真菌细胞壁，从而抑制真菌的生长与繁殖。研究人员在植物中克隆到β-1，3葡聚糖酶基因（BG2）并转入苹果主栽品种，以减少苹果真菌病害、实现无公害生产。
   
(1)BG2的克隆可利用______技术，这需要一小段能与该基因碱基序列互补配对的短单链核酸作为引物，在体外对目的基因进行大量复制，常采用______来鉴定产物。
(2)下图为利用PATC940（经农杆菌Ti质粒改造获得）构建BG2抗病质粒的过程。图中右下处的酶为______，人工设计的复合启动子的作用是__________________，XbaI酶切后的末端与SpeI酶切后的末端能连接是因为________________________。
(3)研究人员将转入BG2抗病质粒的农杆菌与苹果外植体共培养，以进行遗传转化。目的基因BG2将随着______转移到被侵染的细胞而进入细胞，并随其整合到该细胞的______上。
(4)在完成遗传转化后，选择培养基中至少要加入两种抗生素，请推测其作用分别是：一种用于____________，另一种用于____________。
(5)需要不断观察和检测转基因苹果植株在田间的生长状态，以确定目的基因是否赋予了苹果植株_____________。

【推荐1】为使水稻获得抗除草剂性状，科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入水稻植株，获得抗草甘膦转基因水稻。回答下列问题：

(1)将草甘膦抗性基因作为目的基因，与Ti质粒构建基因表达载体。目的基因表达载体进入细胞后，Ti质粒上的___区段可转移到油菜细胞的基因组中。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是___。
①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点
②酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同
③酶切后，草甘膦抗性基因形成的两个黏性末端序列不相同
④草甘膦抗性基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
A.①③   B.①④   C.②③   D.②④
(2)农杆菌经处理后，将其与基因表达载体混合，完成___后，在添加___的培养基中，经筛选1得到含目的基因表达载体的农杆菌。
(3)利用PCR技术，可以鉴定被侵染的愈伤组织中是否含有草甘膦抗性基因。草甘膦抗性基因一条链的两端序列如下：

根据上述序列应选择引物___（填序号）进行PCR。若进行30轮循环，需引物___个。
①引物:5’-TCTGTTGAAT-3’
②引物:5’-GAACCTACTA-3’
③引物:5’-ATTCAACAGA-3’
④引物:5’-CTTGGATGAT-3’
(4)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。在PCR反应体系中含有耐高温的DNA聚合酶，右面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为___。

(5)除了鉴定愈伤组织中是否含有目的基因以外，还可以利用___方法来鉴定草甘膦抗性基因的表达产物，从而进行图中的筛选2，两次筛选后得到的转基因愈伤组织经过细胞的___过程，获得转基因水稻。

【推荐2】蛋白质A是一种重要的药用蛋白，具有抗凝血作用，利用基因工程技术，通过山羊乳腺生物反应器可获得蛋白质A。回答下列问题。
(1)蛋白质A在肝脏细胞内合成，提取肝脏细胞中的RNA，通过______过程可获得蛋白质A基因，在蛋白质A基因表达载体的构建过程中，除需要将蛋白质A基因和______、终止子等调控转录的元件重组在一起外，还需要连接______，用于初步筛选出接受了目的基因的受体细胞。
(2)通过体外受精技术获得受精卵前，对卵母细胞的处理是____________。目的基因导入受精卵常用的方法是____________。早期胚胎培养过程中需定期更换培养液的目的是__________________。早期胚胎需移植入受体母山羊体内，才可能进一步发育得到转基因山羊。
(3)经检测发现部分山羊乳腺分泌的乳汁中不含药用蛋白质A，其原因可能是______________（答出3点）。

【推荐1】某些机体可对环境中的花粉发生过敏反应。反应过程中产生的组织胺可与靶细胞膜上的受体相结合，最终导致人体出现皮肤红肿、哮喘、过敏性休克等症状。下图表示其中的部分过程，请据图分析回答：

(1)免疫系统三大基本功能是________________________，过敏反应是其中之一的异常表现。如图所示B细胞受到该种花粉刺激后增殖、分化产生的细胞称为_________，该细胞产生的抗体与肥大细胞膜上的特异性受体相结合后，机体进入致敏状态。
(2)当同种花粉再次侵入机体，可与肥大细胞表面的_________发生特异性结合，促使肥大细胞释放组织胺。组织胺可引起毛细血管通透性增大，血浆蛋白渗出，从而出现局部皮肤红肿等症状。抗过敏药物可以减轻过敏症状，其作用的机理可能是_________。
A. 与抗体结合，阻断抗原抗体反应        
B. 稳定肥大细胞，阻止其释放组织胺
C. 与组织胺竞争受体结合位点               
D．杀菌消炎，使过敏原失去活性
E.抑制中枢神经系统的兴奋性
(3)研究发现，新型冠状病毒COVID-19可通过飞沫、气溶胶和密切接触等方式在人群中传播，引起人体发热、肺部严重感染、呼吸困难等症状，对身体健康危害极大。新型冠状病毒COVID-19引起炎症反应，进一步刺激位于_________的体温调节中枢，通过促进甲状腺激素分泌使细胞呼吸增强等途径增加机体产热，通过_______________________等途径减少机体散热，进而使体温升高。
(4)艾滋病（AIDS），是由于机体感染人类免疫缺陷病毒（HIV）而引发的全身性疾病，男女均可发病。该病属于免疫失调中的_________。以下可能传播艾滋病的是：_____。
A．纹身纹眉时与别人共用器械 B．与艾滋病患者拥抱、接吻、共用同一个马桶C．哺乳D．叮咬过艾滋病患者的蚊蝇叮咬正常人E. 与艾滋病病人共用剃须刀F.   避免注射吸毒

【推荐2】新冠疫情出现后，疫苗接种在疫情防控中发挥了重要作用。下图1为一种疫苗的研发思路，图中①~⑦表示过程，质粒上的标记基因SUC2控制合成蔗糖酶，使P型酵母菌能利用培养基中的蔗糖生存。图2是一些志愿受试者完成接种后，体内产生的抗体对各种新冠病毒毒株中和作用的情况。请据图回答下列问题：

(1)图1中①过程需要使用________酶先得到cDNA，再设计一对_______，利用PCR技术，在优化反应条件后扩增得到S基因。PCR过程每次循环分为3步，其中温度最高的一步是________。
(2)图1中②过程通常要选用两种限制酶对S基因进行切割，其目的是________。
(3)图1中表示筛选的过程是_________（填编号），为达到利用标记基因筛选的目的，作为受体细胞的普通P型酵母菌应该满足的条件是_________。
(4)参加临床试验的志愿者需要满足的条件之一是______（选填“有”或“无”）新冠病毒感染史，理由是_________。
(5)据图2分析，当前能为个体提供更有效保护作用的疫苗接种措施是__________。

【推荐3】新型冠状病毒的检测主要包含核酸检测、抗体检测、抗原检测等几种方法。其中利用实时荧光RT-PCR技术检测新型冠状病毒特异性核酸序列是最常用的方法。RT-PCR是将逆转录(RT)、PCR以及荧光标记等相结合的技术。下图1为数字PCR技术的原理示意图。荧光的出现是荧光探针水解导致的,荧光探针将首先与模板DNA的相应区段结合(靶分子),随着DNA复制延伸至荧光探针部位,导致荧光探针的水解进而产生荧光,数字PCR技术有利于提高病原体检测的灵敏度。请回答下列问题:

(1)PCR依据的原理是________,每一循环包括__________三步。
(2)每个反应单位有无荧光取决于是否含有_____________。大规模核酸检测是将10个人的采集拭子放到一个采集管中,若检测结果为阳性,则重新采集单管拭子进行复核,再确定这10人中谁是阳性。采用“10∶1混采检测”模式的意义是_____________。
(3)下列有关新冠肺炎检测方法的说法正确的有　      　。

A．与抗体检测方法相比,核酸检测能够检测到早期患者和无症状感染者

B．利用上述技术检测新型冠状病毒时,PCR的模板实际上是逆转录得到的cDNA

C．利用上述技术检测新型冠状病毒时,逆转录酶在每次循环中都能够发挥作用

D．RT-PCR反应中需加入样品有核糖核苷酸、耐高温DNA聚合酶、引物、逆转录酶等

(4)新冠病毒蛋白有S、N、M、E等多种类型,为寻找有效的抗原来研发新冠疫苗,可分别用_________免疫小鼠,一段时间后提取免疫血清并注射给模型小鼠,而后用等量的新冠病毒感染模型小鼠,检测并比较肺部组织中______含量。
(5)制备S蛋白(新冠病毒侵染人体呼吸道细胞的关键蛋白)的mRNA疫苗时,体外制备的mRNA常用脂质分子包裹后才用于接种,原因之一是人体血液和组织中广泛存在________,极易将裸露的mRNA水解;二是外源mRNA分子不易进入人体细胞产生抗原。由图2可知,第一次接种疫苗后,人体内识别到S蛋白产生的初始抗体是________,之后抗体数量进入下降期,原因可能是_______。 
(6)有些新冠肺炎患者康复一段时间后再次转阳,其原因可能是_________。