下列关于基因工程的叙述，正确的是（ ）
| A．若受体大肠杆菌含有构建重组质粒时用到的限制性核酸内切酶，则一定有利于该重组质粒进入受体并保持结构稳定 |
| B．抗除草剂基因转入某抗盐植物获得2个稳定遗传转基因品系，抗性鉴定为抗除草剂抗盐和抗除草剂不抗盐。表明一定是抗盐性的改变与抗除草剂基因的转入无关 |
| C．抗除草剂基因转入某植物获得转基因植株，其DNA检测均含目的基因，抗性鉴定为抗除草剂和不抗除草剂。表明一定是前者表达了抗性蛋白而后者只表达抗性基因RNA |
| D．已知不同分子量DNA可分开成不同条带，相同分子量的为一条带。用某种限制性核酸内切酶完全酶切环状质粒后，出现3条带。表明该质粒上一定至少有3个被该酶切开的位置 |
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更新时间：2020-07-11 11:09:10
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【推荐1】CBF基因控制合成的转录因子能够特异性结合抗冻基因的启动子区，从而激活抗冻基因的表达，以提高植物的抗寒性。现需要将CBF基因与抗冻基因表达载体连接后导入植物细胞，已知Klenow酶具有DNA聚合酶活性，可以将黏性末端补平。CBF基因和抗冻基因表达载体上的酶切位点以及相关限制酶识别序列及切割位点如图所示，则在载体构建过程中需要的酶的种类至少有（ ）
| A．3种 | B．4种 | C．5种 | D．6种 |
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解题方法
【推荐2】我国科学家研究发现，真核细胞的核基因表达调节机制——内含子miRNA通过下调转录因子来调控基因的表达，图甲和图乙是发生在细胞核内的正向和反向调节机制模式图。请据所学知识分析，下列叙述错误的是（ ）
| A．内含子miRNA是在转录水平来调控基因的表达 |
| B．内含子miRNA调控基因的表达存在反馈调节机制 |
| C．形成主基因mRNA和成熟miRNA需解旋酶和限制酶的作用 |
| D．该研究为某些疾病如肿瘤提供多个靶点联合治疗 |
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【推荐3】图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性内切核酸酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。下列说法正确的是（ ）
| A．图1的一条脱氧核苷酸链中相邻碱基通过氢键相连 |
| B．限制性内切核酸酶SmaⅠ切割图1中DNA片段后，产生的黏性末端长度分别537bp、790bp、661bp |
| C．若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d；用限制性内切核酸酶SmaI完全切割D和d，产物中共有4种不同DNA片段 |
| D．若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制性内切核酸酶处理后进行连接，形成重组质粒，可选择BamHⅠ或MboⅠ |
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【推荐1】下列有关科学实验及其研究方法的叙述，正确的是
①植物组织培养过程中，容易获得突变体的主要原因是培养的细胞一直处于分裂状态
②“细胞膜流动镶嵌模型”和“DNA双螺旋结构模型”都是物理模型
③孟德尔的测交后代性状比为1∶1，可以从细胞水平上说明基因分离定律的实质
④设计对照实验时，实验组与对照组中的无关变量要相同且适宜是为了遵循对照原则
⑤基因工程中为检测抗虫棉是否培育成功，最方便的方法是检测棉花植株是否有相应性状
| A．②③⑤ | B．①②⑤ | C．②④⑤ | D．①④⑤ |
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【推荐2】人类是乙肝病毒的唯一宿主，接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。下图为乙肝病毒基因工程疫苗的生产和使用流程，质粒中LacZ基因可使细菌能够利用加入培养基的物质X-gal，从而使菌落显现出蓝色，若无该基因，菌落则呈白色。下列有关叙述正确的是（ ）
| A．过程①最好的限制酶选择方案是BamHI和EcoRV |
| B．质粒用限制酶BamHI和EcoRV切割后产生4个游离的磷酸基团 |
| C．过程②需要在培养基中加青霉素和X-gal以筛选蓝色的大肠杆菌菌落 |
| D．基因工程疫苗不会出现病毒的增殖和感染，安全性高 |
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【推荐1】阅读下列材料，完成下面小题。
产肠毒素大肠杆(ETEC)能引起幼畜发生急性严重腹泻，其直接致病因子为肠毒素，包括热不稳定肠毒素(LT)和热稳定肠毒素(ST)两种。LT由两类功能性亚单位(LTA、LTB)组成，其中LTB具有免疫原性；ST包括ST1、ST2两个亚型，均为小分子多肽，免疫原性弱，构建ST1基因与LTB基因的融合表达质粒，使其表达的ST1具有免疫原性，为研制抗毒素疫苗做好上游工作。
1．从ETEC中扩增得到LTB和ST1两个基因片段，并设计引物：P1、P2为扩增LTB基因序列的引物，P3、P4为扩增ST1基因序列的引物。其中P2、P3中的部分是人工合成能互补的Linker(连接基团)。制备LTB-ST1融合基因的过程如下图所示。
下列叙述错误的是（ ）
2．下列有关“表达LTB-ST1融合蛋白基因工程菌的构建与表达”的叙述错误的是（ ）
产肠毒素大肠杆(ETEC)能引起幼畜发生急性严重腹泻，其直接致病因子为肠毒素，包括热不稳定肠毒素(LT)和热稳定肠毒素(ST)两种。LT由两类功能性亚单位(LTA、LTB)组成，其中LTB具有免疫原性；ST包括ST1、ST2两个亚型，均为小分子多肽，免疫原性弱，构建ST1基因与LTB基因的融合表达质粒，使其表达的ST1具有免疫原性，为研制抗毒素疫苗做好上游工作。
1．从ETEC中扩增得到LTB和ST1两个基因片段，并设计引物：P1、P2为扩增LTB基因序列的引物，P3、P4为扩增ST1基因序列的引物。其中P2、P3中的部分是人工合成能互补的Linker(连接基团)。制备LTB-ST1融合基因的过程如下图所示。
下列叙述错误的是（ ）
| A．PCR1和PCR2通常在一个反应体系中同时进行 |
| B．设计引物时，应该将Linker添加在P2、P3的5'端 |
| C．获得①中的两条链至少经过2轮PCR1和PCR2 |
| D．①→②过程利用Linker获得的融合基因不需要DNA连接酶 |
| A．选用的质粒载体中需包含复制原点、多种限制酶的识别位点和标记基因等 |
| B．构建重组质粒表达载体时，LTB-ST1融合基因两端需要包含启动子和终止子 |
| C．在筛选重组菌时，通常应设置未经转化的菌株作为阴性对照 |
| D．检测到重组菌能表达融合抗原时，即可作为重组工程菌株用于发酵制备抗毒素疫苗 |
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【推荐2】CRISPR/Cas9是一种生物学工具，能够通过“剪切和粘贴”脱氧核糖核酸（DNA）序列的机制来编辑基因组。CRISPR-Cas9基因组编辑系统由向导RNA（也叫sgRNA）和Cas9蛋白组成，向导RNA识别并结合靶基因DNA，Cas9蛋白切断双链DNA形成两个末端。这两个末端通过“断裂修复”重新连接时通常会有个别碱基对的插入或缺失，从而实现基因敲除，如图所示。CRISPR-Cas9基因组编辑技术有时存在编辑出错而造成脱靶。下列叙述正确的是（ ）
| A．Cas9蛋白的功能与限制酶类似，能作用于脱氧核糖和碱基之间的化学键 |
| B．设计sgRNA时只需要考虑识别区域的碱基序列不需要考虑sgRNA的长度 |
| C．其他DNA序列含有与sgRNA互补配对的序列，造成sgRNA错误结合而脱靶 |
| D．对不同目标DNA进行编辑时，使用Cas9蛋白和相同的sgRNA进行基因编辑 |
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(0.4)
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【推荐3】无融合生殖是不通过受精作用而产生种子的生殖方式。研究表明，参与水稻减数分裂的PAIR1、REC8和OSD1三个基因同时突变后，植株的减数分裂将转变成类似有丝分裂的过程。我国科学家利用基因编辑技术，从杂交稻春优84中同时敲除PAIR1、REC8、OSD1和MTL四个基因，获得了可以发生无融合生殖的水稻材料，这意味着水稻杂交种未来或可留种。下列分析错误的是（ ）
| A．无融合生殖属于无性繁殖方式，可以将水稻的杂种优势保留下来 |
| B．基因突变具有低频性，诱导PAIR1、REC8和OSD1基因同时突变的难度较大 |
| C．水稻细胞中，MTL基因可能与减数分裂的正常进行有关 |
| D．从杂交稻春优84中敲除基因需要用到限制酶和DNA聚合酶 |
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