【推荐1】乙烯具有促进果实成熟的作用，ACC 氧化酶和 ACC 合成酶是番茄细胞内合成乙烯的两个关键酶。利用反义 DNA 技术(原理如图 1)，可以抑制这两个基因的表达，从而使番茄具有耐储存、宜运输的优点。图2 为融合 ACC 氧化酶基因和 ACC 合成酶基因的反义基因表达载体的结构示意图。回答下列问题：

（1）从番茄细胞中提取 RNA，利用 RT-PCR 技术获取 ACC 氧化酶基因和 ACC 合成酶基因，即利用 RNA 和PCR 获取目的基因。该技术获取目的基因所需要的酶主要有___________。
（2）合成出的 ACC 氧化酶基因两端分别含限制酶 BamHⅠ和 EcoRⅠ的酶切位点，ACC 合成酶基因两端含KpnⅠ和 Sau3AⅠ的酶切位点，这四种限制酶及其识别序列和切割位点如下图：

限制性核酸内切酶	识别序列和切割位点	限制性核酸内切酶	识别序列和切割位点
BamHⅠ	G↓GATCC	KpnⅠ	GGTAC↓C
EcoRⅠ	G↓AATTC	Sau3AⅠ	↓GATC

先用限制酶___________分别对 ACC 氧化酶基因和 ACC 合成酶基因进行切割后，再将它们拼接成融合基因，相应的 Ti 质粒和融合基因均使用限制酶___________进行切割，以确保融合基因能够插入载体中。载体上卡那霉素抗性基因的作用是_________。
（3）为了获得耐运储存、宜储存的番茄，应将融合基因 ___________(填“正向”或“反向”)插入启动子 2A11 的下游，原因是___________。
（4）在检测番茄细胞中是否存在反义融合基因时，_________(填“能”或“不能”)用放射性物质标记的ACC 氧化(合成)酶基因片段作探针进行检测，理由是__________。

【推荐2】图1为胰岛素基因结构与引物位置示意图，图2为pBR322质粒结构示意图，图中 EcoR I、Sma I、BamH I和 HindⅢ为限制酶，箭头或线段所指位点为对应酶切位点，且四种限制酶识别的碱基序列不同。研究人员欲用此质粒构建胰岛素基因的表达载体，培养能产生人胰岛素的大肠杆菌。请回答下列相关问题：
      
(1)如果用PCR技术扩增图1中的目的基因，则需要图中的引物是_____,如果要将图1中的DNA片段完整地复制，则需要图中的引物是______。
(2)结合图1和图2可知，可以只选择EcoRI处理目的基因和质粒，但这种选择有一定的缺陷，该缺陷主要是_________________,因此最好选用_____处理目的基因和质粒。
(3)如果检测目的基因是否导入受体细胞，初步筛选可使用选择培养基对大肠杆菌进行培养，该培养基中应加入_____,但在培养基中能生存的大肠杆菌也不一定导入了目的基因，原因是______,所以需要进行分子水平的进一步检测。

【推荐3】在石油开采过程中，利用表面活性剂可提高采收率。但化学合成表面活性剂的生产和使用，也带来一定的环境污染。下图是从含油污水中筛选耐高温、高压的产生生物表面活性剂的菌株的流程图。

回答下面的问题：
(1)上述过程所用的培养液应以石油为______，固体培养基的制备过程包括：计算→称量→溶化→______→倒平板，图中A处应采用______法进行接种。
(2)通过上述分离过程，获得16个菌株。如何从这些菌株中进一步筛选耐高压、高温、产生生物表面活性剂的菌种？请写出基本思路_______________。
(3)菌种鉴定：根据菌种在平板上形成的______的特征，对菌种进行初步鉴定；16S rDNA基因存在于所有细菌中，该基因包含多个恒定区和可变区，恒定区序列基本保守，可变区序列具有种的特异性。利用16S rDNA基因的______（选填“恒定区”或“可变区”）序列设计引物，PCR扩增16S rDNA片段，然后测序，将测序结果与数据库中相关数据进行比较进而鉴定。
(4)产生物表面活性剂菌株在石油工业应用的生态学意义____________（写出两项）。

【推荐1】金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在于动植物中具有与重金属离子结合能力的蛋白质，决定该蛋白质合成的基因结构如图1所示，其中A链为编码链、B链为模板链。科研人员利用图2所示质粒构建枣树的MT基因重组DNA分子并导入大肠杆菌细胞，获得对重金属镉（Cd）具有吸附能力和耐受能力的MT工程菌。

（注：XhoI、KpnI、PstI为不同限制酶的识别位点：LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以催化无色物质X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色；amp^r基因为氨苄青霉素抗性基因。）
回答下列问题：
(1)获取目的基因
提取枣树细胞的_________，经逆转录获得cDNA：为了使PCR扩增后的产物按照正确的方向与已被酶切的载体连接，克隆MT基因时应选择的引物组合是_________，并在其______（填“5'”或“3'”）末端分别添加限制酶________和_______的识别序列。
(2)构建重组DNA分子
启动子是__________识别并结合的部位；基因工程中构建用于原核生物的表达载体时，常用的启动子不包括以下哪一项?________（A噬菌体基因启动子   B．乳酸菌基因启动子     C．大肠杆菌基因启动子   D．枣树MT基因启动子）
(3)导入、筛选和鉴定MT工程菌
①将得到的混合物导入到用________处理的大肠杆菌完成_________实验。
②将菌液稀释并涂布在含_________的培养基上进行培养后，随机挑取___________的单菌落可获得MT工程菌。
③欲进一步对MT工程菌进行鉴定，可将挑取出的MT工程菌与___________分别接种至含一定浓度的镉的LB液体培养基中，置于恒温培养箱中培养，适宜时间后检测菌种数量。
扩大菌种
将MT工程菌接种至发酵罐内进行扩增，培养过程中可定期取样并使用细菌计数板对菌体进行直接计数，以评估增殖情况。

【推荐2】图示方案为人们获得生物新品种的过程，请回答下列问题：
方案Ⅰ、抗冻蛋白质烟草细胞→抗冻烟草
方案Ⅱ、A基因免疫过的B细胞→体外培养→单克隆体
方案Ⅲ、人的生长激素基因牛的受精卵→早起胚胎受体母牛→转基因牛
（1）基因工程的核心步骤是__________。农杆菌转化法中，根据农杆菌的特点，如果将抗冻蛋白基因插入到______________上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞，并将其插入到植物细胞中_______________上。
（2）推测方案Ⅱ中A基因所起的作用是__________,请写出该方案获得的细胞中遗传信息传递时所遵循的法则__________________。
（3）方案Ⅲ中的转基因牛可以通过分泌乳汁来生产人的生长激素。这需要将人的生长激素基因与____的启动子等调控组件重组在一起。该方案中的早期胚胎在移植入受体母牛子宫之前，必须对胚胎进行性别鉴定。一般是取处于____________时期的____________细胞进行检测。

【推荐3】现代生物技术与应用
如图是利用两种不同生物技术将小鼠培育成大鼠的过程。

1．技术I中a细胞的名称是______，技术II中b细胞的名称是______。
2．技术II中，完成过程①需要的酶是______，c分子称为______。
3．若大鼠甲和大鼠乙体内均带有某种致病基因，则培育出的大鼠丙和大鼠丁携带致病基因的情况是（不考虑基因突变）_______。

A．只有大鼠丙携带	B．大鼠丙和大鼠丁均携带
C．只有大鼠丁携带	D．大鼠丙和大鼠丁均不携带

4．1996年，英国科学家威尔穆特成功培育出了“多利”羊，引起了社会广泛关注。多利 羊的培育采用的是______（技术I或技术II）。多利羊的培育成功意味着这项技术可能应用于人类，请就该技术的利弊阐述你的观点：________。