【推荐1】风肉一般是以鲜肉为原料，用食盐腌制后，经风干和微生物后发酵而成。在后发酵期，风肉含有耐盐的微生物。某实验小组为研究耐盐微生物的耐盐基因，设计实验如下。回答下列问题。
(1)实验小组为获得耐盐纯培养物A，使用的培养基应是__________（选填“普通培养基”或“选择培养基”），使用的接种方法是__________。
(2)为获得纯培养物A的耐盐基因X，实验小组应用纯培养物提取了DNA。在一定温度下，用二苯胺试剂对DNA进行检测，二苯胺检测DNA的原理是__________。获得PCR产物后，用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行鉴定，影响DNA分子迁移速率的主要因素有__________（答出两点即可）。
(3)构建成功的表达载体将运用农杆菌介导技术转入某农作物，可获得耐盐转基因植株。与同种非转基因植株的染色体DNA序列相比，转基因植株的染色体DNA含有__________。
(4)为验证已获得的耐盐转基因植株具有耐盐性，需设计实验。写出实验思路_____。

【推荐3】猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）主要感染猪肺泡巨噬细胞（PAM），对养猪业造成巨大损失。体外病理实验中，PAM分离过程繁琐、不能连续传代，且数量有限。利用猪诱导多能干细胞（piPSCs）诱导分化为PAM可解决这一问题。已知CD163是PRRSV的重要受体，也是PAM的重要标记之一，但是piPSCs本身不表达CD163基因。回答下列问题：
(1)与PAM相比，piPSCs的特点是__________（答出2点）。
(2)体外培养piPSCs的培养液除细胞所需的各种营养物质外，还需加入__________；培养piPSCs的培养箱中应含有__________气体。
(3)已知CD163不易检测，为了实时监测piPSCs向PAM的转化情况，需要采用基因编辑的方法构建CD163报告载体，再将其导入piPSCs中。具体原理为把CD163基因的调控序列连接到报告基因（易被检测的蛋白质或酶的基因，如荧光素酶基因、绿色荧光蛋白基因等）上，通过检测报告基因的表达产物来“报告”CD163基因的表达。该技术具体的核心操作步骤是__________；所选报告基因应该具有的特点是__________（答出1点）。
(4)已知质粒载体上带有嘌呤霉素抗性标记，将CD163报告载体通过脂质体转染的方式导入piPSCs中，所依据的原理是__________；并在添加了__________的培养基上培养并收集piPSCs；CD163报告载体导入成功的标志是__________。

【推荐3】研究人员首次成功培育出生物学意义上的“双父无母”的小鼠，它们从完全成熟的雄性实验室小鼠的尾巴中提取皮肤细胞，这些小鼠含有一条X和一条Y染色体，引入特定基因诱导它们重新编程转化为诱导多能干细胞（iPS细胞）。iPS细胞在培养ES细胞的培养基上培养时，一些会自发地失去Y染色体，从而产生“XO”细胞。进一步培养XO细胞发现一些细胞由于细胞分裂错误而发育出两条X染色体（使它们成为雌性染色体）。研究人员发现，用一种叫做逆转素的化合物处理XO细胞会增加XX细胞的数量。随后，研究人员将XX细胞转化为原始生殖细胞，即卵子的前体，随后用信号对这些细胞进行编程，将它们变成卵细胞。一旦用精子受精并植入小鼠子宫，卵子就会产生活的后代。
(1)除上述方法外，制备iPS细胞的方法还有________ ，实验室内培养iPS细胞时，为了保证无毒环境，需要______
(2)该过程运用的生物技术有______，某些iPS细胞失去Y染色体后形成的XO细胞仍能存活，推测其原因是____。
(3)上述培育小鼠的过程提出了这样一种可能性，即同性伴侣可能会生下拥有双方基因的婴儿。如果成功，可能存在的伦理问题有___ （答一点即可）。

【推荐1】PUFAs是多种不饱和键的直链脂肪酸的统称。其中n-3PUFAs和n-6PUFAs是两种重要的不饱和键直链脂肪酸，对于人和动物体生长发育、体格健康有重要作用，但在猪肉等动物肌肉和脂肪组织中含量较少。研究人员从线虫基因组中分别克隆出fat1基因和fat2基因，它们分别是控制n-3PUFAs和n-6PUFAs生成的关键酶基因。研究人员拟培育转fat1和fat2融合基因的转基因猪。利用重叠延伸PCR技术可以实现将两个独立的基因连接获得融合基因，过程如图1所示。图2表示三种限制酶识别序列和切割位点，图3表示构建成功的基因表达载体（注：CMV是EGFP绿色荧光蛋白基因的启动子；CAG是融合基因启动子）。回答下列问题：

(1)从线虫体细胞中提取mRNA利用逆转录过程获取fat1和fat2基因，需要的酶和原料是______。利用重叠延伸PCR连接基因过程中PCR1体系与PCR2体系应分别独立进行，原因是______。
(2)为了将融合基因准确连接到质粒上，需要在构建的融合基因的两端添加特定的限制酶切割序列，若已知质粒中有EcoRⅠ、BamHⅠ和Bg1Ⅱ三种限制酶的切割位点，则可以在引物1和引物4的______（填“5’”或“3’”）端，分别添加限制酶______的识别序列。
(3)已构建图3所示的表达载体还缺少的组成部分是______。构建成功的表达载体利用______技术导入受精卵中，可以通过______方法检测目的基因是否成功表达。