下表为几种限制酶的识别切割位点。图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。回答下列与基因工程有关的问题：
（1）基因工程技术中，__________________ 是将目的基因导入植物细胞最常用的方法，其中的Ti质粒上的T—DNA是指____________________ 。
（2）获得的目的基因可利用PCR技术在体外反应体系中扩增，该过程利用的原理是____________________ ，需要加入的原料是____________________ 和引物，DNA解旋利用的是____________________ 原理。若用PCR扩增图2中的目的基因，所用的引物组成为图2中___________________ 。
（3）用图1质粒和目的基因构建重组质粒，应选用__________ 两种限制酶切割。若BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接，该连接部位__________ （填“都能”“都不能”或“只有一种能”）再被这两种酶切开。若用Sau3AⅠ切图1质粒最多可能获得__________ 种大小不同的DNA片段。为了扩增重组质粒，需将其转入处于_____ 态的大肠杆菌。为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加__________ 。
（4）基因工程中使用的载体，除质粒外，还有__________________ 和___________ 。该技术可以培育转基因抗病植物，也可用于动物的基因治疗。单克隆抗体也可用于诊断或携带药物治疗癌症，这是利用了它的__________________________ 优点 。
（1）基因工程技术中，
（2）获得的目的基因可利用PCR技术在体外反应体系中扩增，该过程利用的原理是
（3）用图1质粒和目的基因构建重组质粒，应选用
（4）基因工程中使用的载体，除质粒外，还有
更新时间：2021-02-24 00:07:54
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【知识点】 基因工程综合
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【推荐1】重组人血小板生成素（rhTPO)是一种新发现的造血生长因子，如图为通过乳腺生物发生器产生rhTPO的相关过程。请回答下列问题。
（1）构建重组质粒时选用的限制酶是____________ ，原因是__________________ 。重组质粒中的标记基因是___________ ，标记基因的作用是_________________________ 。
（2）通常采用__________ 技术将重组质粒导入受精卵，图中所示的过程与胚胎工程相关的有_________ (至少写出两个）。
（3）若检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，检测方法是___________ 技术，其次还需检测目的基因____________ ，这是检测目的基因是否发挥作用的第一步，最后检测目的基因是否翻译成蛋白质。
（1）构建重组质粒时选用的限制酶是
（2）通常采用
（3）若检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，检测方法是
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名校
【推荐2】先导编辑技术是利用经过改造的Cas9蛋白，在基因组中的特定位点切断DNA，随后逆转录酶在RNA链的引导下在切断处进行基因编辑，其能实现更精准地对DNA进行编辑，该过程流程如图所示。该技术可以实现基因的定点突变和整合，将修饰好的基因导入胚胎干细胞，治疗人类某些单基因遗传病。
（1）基因重组技术工具中的_______ 酶与先导编辑工具中Cas9蛋白作用相似，但二者的不同之处是前者____________________________________________________________ 。
（2）下图为由经过修饰的pku基因构建的重组载体，在转化胚胎干细胞时，只有重组载体中整合区域正确整合到胚胎干细胞染色体DNA上才表示转化成功，而重组载体的其他区域将被靶向分解。在转化中会出现错误整合，整合错误才会出现重组载体中的两个HSV-tk中至少会有一个与neor一起整合到染色体DNA上而不被分解。已知含有标记基因neor的细胞具有G418的抗性。HSV-tkl、HSV-tk2的产物都能把DHPG转化成有毒物质而使细胞死亡。
①题干中的胚胎干细胞可以来自_____________________________ ，利用胚胎干细胞为受体细胞是因为其功能上具有________________________ 。
②胚胎干细胞在体外培养时需要满足的条件除一定的气体环境、充足营养、适宜的温度和PH外，还应保证____________ 条件，气体环境中的CO2的作用是_____________________ 。
③转化后的各类胚胎干细胞要依次在含有G418和____________________ 的培养液中培养，在双重选择下存活并增殖的是正确整合的胚胎干细胞，原因是________________________________________ 。
（1）基因重组技术工具中的
（2）下图为由经过修饰的pku基因构建的重组载体，在转化胚胎干细胞时，只有重组载体中整合区域正确整合到胚胎干细胞染色体DNA上才表示转化成功，而重组载体的其他区域将被靶向分解。在转化中会出现错误整合，整合错误才会出现重组载体中的两个HSV-tk中至少会有一个与neor一起整合到染色体DNA上而不被分解。已知含有标记基因neor的细胞具有G418的抗性。HSV-tkl、HSV-tk2的产物都能把DHPG转化成有毒物质而使细胞死亡。
①题干中的胚胎干细胞可以来自
②胚胎干细胞在体外培养时需要满足的条件除一定的气体环境、充足营养、适宜的温度和PH外，还应保证
③转化后的各类胚胎干细胞要依次在含有G418和
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【推荐3】利用生物工程生产宫颈癌疫苗
人乳头瘤病毒（HPV）是一类DNA病毒，持续感染高危型HPV可能引发宫颈癌。感染HPV后，人体内发生的部分生理过程如图1所示，其中，Ⅰ~Ⅳ表示免疫细胞；L1为HPV病毒表面抗原，E6和E7皆为HPV病毒内部蛋白；p53蛋白和pRb蛋白皆为抑癌蛋白。
(1)人体感染HPV后，图1中细胞Ⅱ的功能是______ 。（多选）
A. 分泌免疫活性物质 B. 清除被病毒入侵的细胞I
C. 清除被病毒入侵的上皮细胞 D. 识别靶细胞抗原肽-MHC分子复合体
(2)图1中细胞Ⅲ参与的免疫应答属于______ 。（多选）
A. 非特异性免疫 B. 特异性免疫
C. 体液免疫 D. 细胞免疫
(3)据图1分析，长期感染高危型HPV诱发宫颈癌的原因可能是HPV的______ 。（多选）
A. E7蛋白降解pRb蛋白，促进上皮细胞DNA的复制
B. E7蛋白与pRb蛋白结合，促进上皮细胞由G1期进入S期
C. E6蛋白与p53蛋白结合，抑制上皮细胞DNA聚合酶的合成
D. E6蛋白激活p53蛋白，促进上皮细胞纺锤体相关蛋白的合成
注射HPV疫苗是预防宫颈癌的有效手段。制备预防型HPV疫苗的部分流程如图2所示，其中，Ⅰ~Ⅳ表示过程；kb表示1000碱基对；AbAr为真菌类抗生素（AbA）的抗性基因；α-半乳糖苷酶基因表达的酶蛋白可将一种无色化合物（X-α-gal）水解成蓝色产物；pMD上仅在α-半乳糖苷酶基因的两端存在BamHI和XhoI的酶切位点。
(4)据图2判断，基因工程生产预防型HPV疫苗所需要的工具酶有______ 。（编号选填）
① BamHI ② MboI ③ XhoI ④ DNA连接酶
(5)据图1、2推断，基因工程制备预防型HPV疫苗的目的基因是______ 。（编号选填）
① L1基因 ② E6基因 ③ E7基因 ④ MHC
(6)图2中过程Ⅳ所用的选择培养基需在通用液体培养基的基础上添加______ 。（编号选填）
① 琼脂 ② 生长因子 ③ 水
④ AbA ⑤ X-α-gal ⑥ 无机盐
(7)据图2判断，将______ （蓝色/白色）菌落中的pMD-HPV分子用过程Ⅱ中的限制性内切核酸酶完全酶切后，理论上凝胶电泳上出现的条带的长度为______ kb。
(8)为提高HPV疫苗对免疫系统的激活能力，据相关信息及已学知识推测，可采取的做法有______ 。（多选）
A. 利用定向进化技术获得新型抗原蛋白
B. 利用定点突变技术获得天然抗原蛋白
C. 避免接种期间使用免疫抑制剂类药物
D. 根据年龄、感染风险等制定接种方案
人乳头瘤病毒（HPV）是一类DNA病毒，持续感染高危型HPV可能引发宫颈癌。感染HPV后，人体内发生的部分生理过程如图1所示，其中，Ⅰ~Ⅳ表示免疫细胞；L1为HPV病毒表面抗原，E6和E7皆为HPV病毒内部蛋白；p53蛋白和pRb蛋白皆为抑癌蛋白。
(1)人体感染HPV后，图1中细胞Ⅱ的功能是
A. 分泌免疫活性物质 B. 清除被病毒入侵的细胞I
C. 清除被病毒入侵的上皮细胞 D. 识别靶细胞抗原肽-MHC分子复合体
(2)图1中细胞Ⅲ参与的免疫应答属于
A. 非特异性免疫 B. 特异性免疫
C. 体液免疫 D. 细胞免疫
(3)据图1分析，长期感染高危型HPV诱发宫颈癌的原因可能是HPV的
A. E7蛋白降解pRb蛋白，促进上皮细胞DNA的复制
B. E7蛋白与pRb蛋白结合，促进上皮细胞由G1期进入S期
C. E6蛋白与p53蛋白结合，抑制上皮细胞DNA聚合酶的合成
D. E6蛋白激活p53蛋白，促进上皮细胞纺锤体相关蛋白的合成
注射HPV疫苗是预防宫颈癌的有效手段。制备预防型HPV疫苗的部分流程如图2所示，其中，Ⅰ~Ⅳ表示过程；kb表示1000碱基对；AbAr为真菌类抗生素（AbA）的抗性基因；α-半乳糖苷酶基因表达的酶蛋白可将一种无色化合物（X-α-gal）水解成蓝色产物；pMD上仅在α-半乳糖苷酶基因的两端存在BamHI和XhoI的酶切位点。
(4)据图2判断，基因工程生产预防型HPV疫苗所需要的工具酶有
① BamHI ② MboI ③ XhoI ④ DNA连接酶
(5)据图1、2推断，基因工程制备预防型HPV疫苗的目的基因是
① L1基因 ② E6基因 ③ E7基因 ④ MHC
(6)图2中过程Ⅳ所用的选择培养基需在通用液体培养基的基础上添加
① 琼脂 ② 生长因子 ③ 水
④ AbA ⑤ X-α-gal ⑥ 无机盐
(7)据图2判断，将
(8)为提高HPV疫苗对免疫系统的激活能力，据相关信息及已学知识推测，可采取的做法有
A. 利用定向进化技术获得新型抗原蛋白
B. 利用定点突变技术获得天然抗原蛋白
C. 避免接种期间使用免疫抑制剂类药物
D. 根据年龄、感染风险等制定接种方案
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