回答下列（一）、（二）两个小题：
（一）回答微生物的培养和分离有关问题：
（1）某生物兴趣小组想对一坛泡菜进行乳酸菌计数：
①首先在无菌条件下取适量泡菜汁样品液待用；
②配制MRS培养基（适于乳酸菌生长的培养基），其中琼脂含量为0．3%～0．4%，从物理性质角度来看，该培养基属于________培养基。取100ml培养基装在250ml三角瓶中灭菌后备用。
③待培养基冷却至“适当温度”时，用10ml无菌吸管在每支无菌试管中灌9ml，然后放入“适当温度”的水浴中保温待用。此处的两个“适当温度”均约为__________。
A．25℃～30℃          B．35℃～40℃             C．45℃～50℃            D．60℃左右                 
④梯度稀释：用无菌吸管吸取1ml泡菜样品液至其中一支装有9mlMRS培养基试管中，再用_______（同一支吸管、另一支吸管）上下轻搅3～5次使充分混匀。轻搅的目的是防止_______。然后吸1ml至下一支试管中，如此逐级稀释至10^－4～10^－7为止。每个稀释度做3份重复。
⑤恒温培养：待稀释均匀后，各稀释度的试管垂直放在试管架上，置于37℃恒温培养24小时左右。
⑥观察和计数：经过培养后，在高层培养基试管内形成许多_________状的菌落，数出各试管中形成的乳酸菌的菌落数目，选择菌落分离度较好和数目合适的稀释度进行计数。假设稀释度为10^－5试管中形成的菌落数平均为90个，则该泡菜样品液中含乳酸菌_________个/ml。
（2）思考：本实验不采用涂布分离进行计数的最可能原因是_________。如果采用划线分离的方法分离微生物，按照划线先后顺序依次划A、B、C、D四个划线区，则四个划线区面积大小顺序应该是________（用“＜”连接）。   
（二）植物被野生型农杆菌感染后会产生瘤状结构（类似愈伤组织），主要原因是农杆菌的Ti质粒中含有生长素合成基因（A）、细胞分裂素合成基因（B）和冠瘿碱合成基因（C）。已知T－DNA上的基因在农杆菌中不表达，在植物细胞中可以表达。冠瘿碱是农杆菌生命活动必需的有机物质。黄萎病是危害棉花种植的常见疾病，科学家通过基因工程技术将抗黄萎病基因导入棉花，获得抗黄萎病棉花。下图为农杆菌Ti质粒的T－DNA区段结构示意图，据图回答问题：

（1）获得碱基序列未知的抗黄萎病基因，可通过____________方法。构建重组Ti质粒时，需要用两种不同的限制酶切割目的基因和Ti质粒，目的是__________。
（2）为防止农杆菌侵染植物细胞时大量繁殖，导致植物细胞死亡，抗黄萎病基因必须把T—DNA片段上的基因__________（用字母表示）替换掉。取CaCl₂处理过的农杆菌与重组质粒在离心管内，加入液体培养基，并置于摇床上__________振荡培养一段时间，从而完成转化实验。
（3）若棉花体细胞对农杆菌不敏感，还可以采用____________法，将目的基因导入受体细胞的细胞核。通常将重组细胞直接接种在适宜的培养基上进行组织培养，该培养基以MS培养基为基础，还需要加入适当种类和比例的植物生长调节剂、琼脂、水和____________。丛状苗分株培养后，为促使其生根，可通过____________无机物的浓度实现。