【推荐1】透明质酸是一种应用广泛的粘性多糖，研究者欲改造枯草芽孢杆菌，通过添加诱导型启动子来协调菌体生长与产物生产之间的关系。回答下列问题：
(1)为通过外源添加诱导剂来控制基因的表达，研究者选择了含木糖诱导型启动子的p质粒。透明质酸合成酶基因H以a链为转录模板链，转录时mRNA自身的延伸方向为5′-3′。为了使图中酶切后的H基因按照正确的方向与p质粒连接，p质粒位点1和2所对应的酶分别是___________。酶切后加入___________酶使它们形成重组质粒。

(2)为协调菌体生长与产物生产之间的关系，将构建好的重组质粒转入经___________处理后的枯草芽孢杆菌（D菌），在含___________的培养基上筛选，得到枯草芽孢杆菌E（E菌）。进行工业培养时，培养基应选择___________（填字母）。
A.以木糖为唯一碳源的培养基
B.以蔗糖和木糖混合为碳源的培养基
C.以蔗糖为唯一碳源的培养基，接种2小时后添加木糖
D.以蔗糖为唯一碳源的培养基，培养结束后提取培养液，添加木糖
(3)经菌种的扩大培养后进行大型发酵得到的发酵产物浓度较低，发酵液中悬浮固形物主要是菌体和蛋白质的胶状物，故最后对发酵产物进行___________，可获得所需产品。

【推荐2】某种荧光蛋白（GFP）在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白（L₁）基因连接在GFP基因的末端，获得了L₁－GFP融合基因（简称为甲），并将其插入质粒P₀，构建了真核表达载体P₁，其部分结构和酶切位点的示意图如下，图中E₁～E₄四种限制酶产生的黏性末端各不相同。

回答下列问题：
（1）据图推断，该团队在将甲插入质粒P₀时，使用了两种限制酶，这两种酶是__________。使用这两种酶进行酶切是为了保证__________，也是为了保证__________。
（2）将P₁转入体外培养的牛皮肤细胞后，若在该细胞中观察到了绿色荧光，则说明L₁基因在牛的皮肤细胞中完成了__________和__________过程。
（3）为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中，某同学用PCR方法进行鉴定，在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的__________（填“mRNA”“总RNA”或“核DNA”）作为PCR模板。

【推荐3】某科研人员从苏云金芽孢杆菌中获取BT毒蛋白基因，并将其导入大豆叶肉细胞，培育出抗虫的转基因大豆，主要过程如下。回答下列问题：

(1)质粒上存在潮霉素抗性基因的目的是___________。
(2)过程①表示利用PCR获取BT毒蛋白基因，其前提是___________；在BT毒蛋白基因两侧分别添加HindⅢ和BamHI限制酶序列，其目的是____________。
(3)过程①中BT毒蛋白基因连续扩增5次，形成____________个BT毒蛋白基因片段，需要_____________个引物。
(4)过程②构建重组质粒时，将BT毒蛋白基因插入启动子和终止子之间的原因是_____________。
(5)将重组质粒导入农杆菌时，需要用____________处理农杆菌，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。过程③筛选具有抗虫能力的大豆，从分子水平上检测BT毒蛋白基因是否表达的方法是_____________。

【推荐1】多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果胶使细胞壁破损。番茄果实成熟过程中PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程的方法减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入到番茄细胞中，得到转基因番茄。请据图回答：

（1）基因工程的核心是_____________。若已获取PG的mRNA，可通过__________法获取PG基因。在该基因上游添加结构A可确保基因的反向转录，结构A上应具有_______________的识别和结合位点。
（2）构建PG反义质粒的过程中需要用到的工具酶有_____________、________________。
（3）用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有______________的培养基进行筛选，培养24～48h后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞______________现象来鉴别细胞壁是否再生。培养再生植株过程依据的原理是________________。
（4）导入的目的基因能转录反义RNA，且能与________________互补结合，抑制PG基因的正常表达。若转基因番茄的保质期比非转基因番茄________，则可确定转基因番茄成功。
（5）获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因，科研人员常采用_____________方法使子代保持转基因番茄的优良性状。若想培育出一种地上结番茄，地下长马铃薯的植株，可以利用__________技术。

【推荐2】红豆杉是濒危植物，其树皮产生的紫杉醇对癌症有一定的疗效。下图是红豆杉植株组织培养和细胞培养的流程图，请据图回答下列问题：

（1）图中②为愈伤组织，通过B过程可最终产生新的植株，通过C过程可产生大量细胞，则图中A、B、C分别表示的过程为_____________________________，其中B过程的实质是____________。
（2）对⑤的培养一般要采用_________________培养基，并要不断通入无菌空气并进行搅拌，其目的是___________________________________________________________________________________。
（3）对⑤的培养可获得代谢产物——紫杉醇，但培养后期紫杉醇产量下降，其原因包括_________________________________________________________________________________等。
（4）若①是红豆杉（基因型为DdTt）的花药，可选用_________（填编号）制成人工种子，该“种子”萌发的幼苗用_________处理，可快速获得纯种植株，该植株的基因型为______________________。

【推荐3】紫罗兰（2n=14）花色丰富、抗虫性强、种子油富含X-3-亚麻酸。为了让油菜（2n=38）具有紫罗兰的诸多优良性状，科研工作者进行了如图1所示实验，请分析回答：

(1)为了培养紫罗兰—油菜，科研工作者选取二者的下胚轴细胞，并用______________酶处理去除细胞壁，从而获得原生质体。再用PEG 诱导二者融合，所依据的生物学原理是细胞膜的_______________。
(2)科研工作者分别用4种浓度的PEG对两种原生质体进行了融合试验，结果如图2所示：

注：1.由两个原生质体进行的融合称为二源融合；大于两个原生质体进行的融合称为多源融合；2.紫罗兰—油菜是由一个紫罗兰原生质体和一个油菜原生质体融合后培养产生的。
①该实验的自变量是_______________根据实验结果,为提高紫罗兰—油菜的成功率,减少多源融合，应选用的最佳PEG浓度为_______________%。
②想确定二源融合原生质体是否为紫罗兰和油菜融合而成，需要借助显微镜观察染色体的形态和数目，紫罗兰—油菜的原生质体含有_______________条染色体（不考虑染色体丢失）。
(3)筛选出所需的杂种细胞后，还要采用_______________技术才能获得杂种植物。此技术先使杂种细胞_______________形成愈伤组织，继而再分化，并生长发育成完整植株。

【推荐1】2019年11月18日上午，中国诞生了第一块“人造肉”，即“细胞培养肉”。下图是“细胞培养肉”生物制造流程图，请结合所学知识回答下列问题：

（l）生物制造“细胞培养肉”的第一步，就是要获取肌肉干细胞，所谓的“干细胞”，是指动物和人体内仍保留着少数具有____能力的细胞。
（2）“细胞培养肉”生物制造的关键技术是动物细胞培养技术。
①进行动物细胞培养时，需要用____酶将从动物体内取出的组织块分散成单个细胞。在适宜环境中培养，细胞悬液中的细胞很快贴附在瓶壁上，称为______________。
②在适宜条件下，培养瓶中的细胞进行有丝分裂，数量不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的____。
（3）一般的动物细胞培养需要向培养基中添加一定量的血清，以保证____；还需要添加一定量的抗生素，以防____。但从食品安全的角度考虑，在生物制造“细胞培养肉”时，这两种成分均不能添加。
（4）“细胞培养肉”生物制造过程中，肌肉细胞培养需要利用合适的支架体系，请推测其原因：____。

【推荐2】肥胖已经严重危害人类健康。为研究发酵大麦提取物对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响，科研人员进行了相关实验。
(1)3T3-L1前脂肪细胞在胰岛素（INS）、地塞米松（DEX）和3-异丁基-1-甲基-黄嘌呤（IBMX）的诱导下，基因___________表达，分化为成熟脂肪细胞，因此经过三种物质诱导的3T3-L1前脂肪细胞是肥胖研究常用的细胞模型。
(2)3T3-L1前脂肪细胞培养液中除了具有基本的营养外，还需加入一定量的___________，并置于_______________ 中培养。
(3)将一定数目的植物乳杆菌接种到经过_________处理的粉碎过筛大麦和水的混合液中，制备发酵大麦提取物（LFBE）。除不接种植物乳杆菌外，其余操作方法相同，制备未发酵大麦提取物（RBE）。
(4)研究发酵大麦提取物对细胞分化的影响，实验处理及结果如下。（表格中+表示加入了该物质，-表示未加入）

组别 处理方法	模型组	空白组	对照组（提取物浓度ug/mL）			实验组（提取物浓度ug/mL）
			100	200	400	100	200	400
培养液	+	+	+	+	+	+	+	+
1____	+		-	-	-	-	-	-
2____	-	-	+	+	+	-	-	-
3____	-	-	-	-	-	+	+	+

①表格处理方法1、2、3分别是_____________、_____________、 ________________。
②分析实验结果，说明__________________________________________________。
(5)为进一步研究LFBE抑制3T3-L1前脂肪细胞分化的机理，科研人员提取各组细胞中总RNA，经___________过程获得cDNA，再利用PCR技术扩增出肥胖相关基因。在相同条件下，PCR产物的量可以间接反映细胞中 __________________的含量。若检测结果是______________，则说明LFBE抑制相关基因转录从而抑制3T3-L1前脂肪细胞分化。

【推荐3】胚胎干细胞（ES细胞）具有持续分裂和分化成各种组织细胞的能力。科学家利用已分化的细胞培养出的诱导性多功能干细胞（IPS），也具备胚胎干细胞的特点，诱导产生IPS细胞前两个阶段为：①分离和培养宿主细胞；②将相关转录因子基因导入宿主细胞（如图所示）。请回答下列问题：

（1）培养宿主细胞应在含有_____________的恒温培养箱中进行，所用的培养基需加入的天然成分为_____________，为及时清除代谢产物需_____________。
（2）要获得大量的转录因子基因可用_____________方法；据图可知，将基因导入宿主细胞所用的载体为_____________。
（3）IPS细胞或ES细胞在医学上的应用是_____________，其优点为_____________。
（4）ES细胞往往取自囊胚的内细胞团或早期性腺细胞，目前ES细胞应用存在部分争议，相比IPS细胞，请说出你认为的争议点是_____________。

【推荐2】回答下列（一）、（二）小题：
（一）关于分离以尿素为氮源的微生物实验，请分析回答以下问题：
（1）脲酶可以催化尿素分解为__________，其中碱性物质可以能使酚红指示剂变为__________。
（2）分离以尿素为氮源的微生物，培养基配制必须加凝固剂__________，培养基在__________g/cm²压力下灭菌30分钟，冷却至60℃，加入通过__________的尿素溶液，混合均匀待用。
（3）为了从土壤中分离得到以尿素为氮源的微生物，分离效果比较好的操作方法是采用__________，采用该方法分离，土壤溶液必须经过__________处理。
（二）下图是科学家培育能生产人血清白蛋白乳腺生物反应器的过程，请回答相关问题：

（1）要获取人血清白蛋白基因，可采用PCR技术进行大量扩增，前提是__________。
（2）过程①获得的产物是______________。过程②需对卵细胞供体母牛进行__________处理。过程③常采用______方法。过程④通常将受精卵培养至_________阶段。并在进行过程⑤之前对胚胎进行筛选，选择__________胚胎进行移植。
（3）若转基因母牛只有一条染色体上含有人血清白蛋白基因，该母牛与普通公牛杂交，产下转基因母牛的概率是_________________。

【推荐3】杜泊羊以其生长速度快、肉质好等优点，被称为“钻石级”肉用绵羊。科研工作者通过胚胎工程快速繁殖杜泊羊的流程如图所示，请据图回答问题：

(1)获取得到的卵（母）细胞，需要体外培养至____________时期。采集的精子需要经过________，才具备受精能力。判断卵细胞是否受精的重要标志是____________。
(2)在胚胎移植前要对提供胚胎的杜泊羊进行______________处理，接受胚胎的当地普通绵羊进行________处理。代孕母羊对置入子宫的早期胚胎基本上不发生______________，这就为早期胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。
(3)卵裂期进行的分裂方式为___________，胚胎总体积的变化情况为___________。采用胚胎分割技术能得到“同卵多胞胎”，对囊胚期的胚胎进行分割时，要特别注意将____________均等分割，否则会影响分割后的胚胎恢复和进一步发育。
(4)在繁育过程中，出现了一只体型特别大的良种奶牛，若要快速地大量繁殖出同样大体型的个体，可采用的技术是___________。