角蛋白酶(KerA)是降解角蛋白的酶类,在饲料工业中具有较大的应用前景,但天然菌株产酶量低限制了其推广应用。为了获得高效表达的KerA工程菌,研究者分别构建了大肠杆菌和毕赤酵母工程菌,并实现了异源表达。下图1为含KerA基因的外源DNA、质粒的有关信息,EcoR1、BamH1、Sal1、Xho1均为限制酶,Kanr、Tcr分别为卡那霉素抗性基因、四环素抗性基因。请回答下列相关问题:
(1)为了获取KerA基因,从天然菌株中提取相应的DNA片段,再通过PCR技术大量扩增,PCR技术的原理_____ ,前提是_____ 。
(2)为了形成合适的重组质粒,应该选用_____ 和_____ 限制酶切割外源DNA和质粒DNA.
(3)重组质粒导入受体细胞的成功率很低,需经筛选才能获得导入成功的受体细胞。结合图1所获得的重组质粒分析,应选择具有_____ 特点的细胞作为受体细胞,才有利于后续的筛选。
(4)将目的基因导入大肠杆菌时,常出现三种情况:未转化的细菌、含空载体(普通质粒)的细菌、含重组质粒的细菌。下图是KerA基因重组质粒的“工程菌”的筛选示意图:
下图2中的_____ 和_____ (选用“A/B/C/D/E”字母作答)菌落为含有目的基因的“工程菌”。
(5)KerA基因在大肠杆菌和毕赤酵母工程菌是否能实现异源表达,需要用_____ 技术检测,若在二者细胞中都能实现表达,从分子水平上分析原因是_____ ,并且它们体内转录和翻译的过程或机制相同。但经研究发现,只有毕赤酵母工程菌表达合成的KerA可直接投入使用,分析其原因是_____ 。
(6)KerA在60℃以上时热稳定性差,限制了该酶的应用范围,研究人员在KerA的末端插入半胱氨酸,这不仅对酶活性影响小,且大大提高了其热稳定性。其运用到的这种现代生物技术为_____ 。
(1)为了获取KerA基因,从天然菌株中提取相应的DNA片段,再通过PCR技术大量扩增,PCR技术的原理
(2)为了形成合适的重组质粒,应该选用
(3)重组质粒导入受体细胞的成功率很低,需经筛选才能获得导入成功的受体细胞。结合图1所获得的重组质粒分析,应选择具有
(4)将目的基因导入大肠杆菌时,常出现三种情况:未转化的细菌、含空载体(普通质粒)的细菌、含重组质粒的细菌。下图是KerA基因重组质粒的“工程菌”的筛选示意图:
下图2中的
(5)KerA基因在大肠杆菌和毕赤酵母工程菌是否能实现异源表达,需要用
(6)KerA在60℃以上时热稳定性差,限制了该酶的应用范围,研究人员在KerA的末端插入半胱氨酸,这不仅对酶活性影响小,且大大提高了其热稳定性。其运用到的这种现代生物技术为
更新时间:2022-04-09 07:22:04
|
相似题推荐
非选择题
|
适中
(0.65)
【推荐1】利用基因工程的方法可以生产大量的胰岛素,下图是利用这一方法生产胰岛素的过程。请回答下列问题:
(1)胰岛素mRNA只能从胰岛细胞中获得,而不能从其他细胞中获得,这是因为_______________________________________________________ 。
(2)完成过程②所需的酶是______ 。过程③所利用的技术是______ 。
(3)过程④是____________ ,所用的工具酶有____________ 。
(4)将A导入大肠杆菌之前需要使用____ 处理大肠杆菌,目的是使大肠杆菌处于______ 态。
(5)检测目的基因是否成功导入大肠杆菌,可以采用______ 的方法检测。
(1)胰岛素mRNA只能从胰岛细胞中获得,而不能从其他细胞中获得,这是因为
(2)完成过程②所需的酶是
(3)过程④是
(4)将A导入大肠杆菌之前需要使用
(5)检测目的基因是否成功导入大肠杆菌,可以采用
您最近一年使用:0次
非选择题-解答题
|
适中
(0.65)
名校
【推荐2】在互联网高度发达的今天,你一定知道什么是“关键词”。利用关键词,在互联网上你可以轻松地查找所需要的信息。关键词承载着所要表达的关键信息。
(1)请写出教材介绍基因工程的基本操作步骤中的五个“关键词”。__________
(2)简述将生长速度较快的奇努克三文鱼生长激素基因转入大西洋三文鱼基因组中,生产出转基因三文鱼的基本过程。___________________________
(3)分析(2)中获得转基因三文鱼对生态环境可能造成的影响。____________
(1)请写出教材介绍基因工程的基本操作步骤中的五个“关键词”。
(2)简述将生长速度较快的奇努克三文鱼生长激素基因转入大西洋三文鱼基因组中,生产出转基因三文鱼的基本过程。
(3)分析(2)中获得转基因三文鱼对生态环境可能造成的影响。
您最近一年使用:0次
非选择题
|
适中
(0.65)
【推荐3】质粒能成功转入植物细胞,并将质粒上的一部分外源DNA整合到植物细胞的DNA中。如图表示利用质粒进行转化获得抗除草剂大豆的过程。请据图分析回答:
(1)过程②将目的基因导入质粒后,需要经过_______________ 使质粒与目的基因切口黏合。
(2)整合了目的基因的重组质粒,在组成上还含有启动子、终止子和_______ 。
(3)过程③可以采用的方法是______________________________ 。
(4)过程④运用了细胞工程中的_________________ 技术,该技术的理论依据是_______________ ;在该技术应用的过程中,关键步骤是利用含有一定营养和激素的培养基诱导植物细胞进行__________ 和___________ 。
(5)为了检测通过④过程获得的幼苗是否具有抗除草剂的特性,可采用的方法是_______________ 。
(1)过程②将目的基因导入质粒后,需要经过
(2)整合了目的基因的重组质粒,在组成上还含有启动子、终止子和
(3)过程③可以采用的方法是
(4)过程④运用了细胞工程中的
(5)为了检测通过④过程获得的幼苗是否具有抗除草剂的特性,可采用的方法是
您最近一年使用:0次
非选择题-解答题
|
适中
(0.65)
【推荐1】镰刀型细胞贫血症是一种单基因遗传病,患者的血红蛋白β-肽链第6位氨基酸谷氨酸被缬氨酸代替,导致功能异常。请回答下列问题:
(1)异常血红蛋白的氨基酸序列改变的根本原因是编码血红蛋白基因的__________ 序列发生改变。
(2)将正常的血红蛋白基因导入患者的骨髓造血干细胞中,可以合成正常的血红蛋白达到治疗的目的,此操作________ (填“属于”或“不属于”)蛋白质工程。
(3)用基因工程方法制备血红蛋白时,可先提取早期红细胞中的_________ ,以其作为模板,在________ 酶的作用下反转录合成cDNA;cDNA与载体需在限制酶和_________ 酶的作用下,拼接构建基因表达载体,用_________ (方法)导入受体菌后进行表达。若要在体外获得大量反转录产物,常采用_________ 技术。
(4)检查受体菌是否已合成血红蛋白,可从受体菌中提取_________ ,用相应的抗体进行________ 杂交,若出现_________ ,则表明该受体菌已合成血红蛋白。
(1)异常血红蛋白的氨基酸序列改变的根本原因是编码血红蛋白基因的
(2)将正常的血红蛋白基因导入患者的骨髓造血干细胞中,可以合成正常的血红蛋白达到治疗的目的,此操作
(3)用基因工程方法制备血红蛋白时,可先提取早期红细胞中的
(4)检查受体菌是否已合成血红蛋白,可从受体菌中提取
您最近一年使用:0次
非选择题-实验题
|
适中
(0.65)
【推荐2】埃博拉病毒(EBoV)衣壳外有包膜,包膜上有多种棘突蛋白,其中GP蛋白最为关键,能被宿主细胞识别。如图为制备抗埃博拉病毒单克隆抗体的过程。回答下列问题:
(1)制备抗埃博拉病毒单克隆抗体过程中需要用灭活的EBoV对小鼠进行多次注射的目的是__________ 。
(2)细胞融合的原理是___________ 。通常将获得的杂交瘤细胞放置于__________ 的混合气体的CO2培养箱中进行培养。
(3)单克隆抗体制备过程中要经过两次筛选。第一次筛选出杂交瘤细胞,再对杂交瘤细胞进,经多次筛选后可获得足够数量的单克隆抗体。筛选后进行___________ 。杂交瘤细胞具备的特点是___________ 。
(4)体外培养杂交瘤细胞的培养液中营养物质种类要齐全,比例要合适,此外为补充细胞生长所需的未知营养物质还需要添加________ 等一些天然成分。获得的单克隆抗体最终可以从_________ 或___________ 中提取。
(5)为克服鼠源性单抗的异源性反应,科研人员通过人工改造,除抗原结合区域外,其他部分都替换为人抗体区段,获得了嵌合抗体。该嵌合抗体的研制属于________ 工程科技范畴。
(1)制备抗埃博拉病毒单克隆抗体过程中需要用灭活的EBoV对小鼠进行多次注射的目的是
(2)细胞融合的原理是
(3)单克隆抗体制备过程中要经过两次筛选。第一次筛选出杂交瘤细胞,再对杂交瘤细胞进,经多次筛选后可获得足够数量的单克隆抗体。筛选后进行
(4)体外培养杂交瘤细胞的培养液中营养物质种类要齐全,比例要合适,此外为补充细胞生长所需的未知营养物质还需要添加
(5)为克服鼠源性单抗的异源性反应,科研人员通过人工改造,除抗原结合区域外,其他部分都替换为人抗体区段,获得了嵌合抗体。该嵌合抗体的研制属于
您最近一年使用:0次
非选择题-解答题
|
适中
(0.65)
【推荐3】2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光,这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况,帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图,据图回答:
注:图中通过过程①、②形成重组质粒,需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—,限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点,在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
(1)在DNA连接酶的作用下,上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来_______ ,理由是:_________________________________ 。
(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时,采用最多的方法是_____________ 。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上,GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因,其作用是_________________ 。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白,黄色荧光蛋白等,采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是:_____________ (用数字表示)。①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)④表达出蓝色荧光蛋白。
注:图中通过过程①、②形成重组质粒,需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—,限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点,在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
(1)在DNA连接酶的作用下,上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来
(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时,采用最多的方法是
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上,GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因,其作用是
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白,黄色荧光蛋白等,采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是:
您最近一年使用:0次