1 . T₄溶菌酶在温度较高时易失活。科学家对编码T₄溶菌酶的基因进行改造，使其表达的T₄溶菌酶第3位的异亮氨酸（Ile）变为半胱氨酸（Cys），进而提高了T₄溶菌酶的耐热性。下列叙述正确的是（       ）

A．Ile变为Cys是因为基因中碱基对的缺失

B．耐热T4溶菌酶是一种直接制造的新蛋白质

C．T4溶菌酶的改造属于蛋白质工程的范畴

D．该方法得到的T4溶菌酶无需功能鉴定即可投入生产

2 . 科学家利用蛋白质工程技术将水蛭素（一种可用于预防和治疗血栓的蛋白质）第47位的天冬酰胺替换为赖氨酸，显著提高了它的抗凝血活性，流程图如下。已知天冬酰胺对应的密码子为AAU、AAC，赖氨酸对应的密码子为AAA、GUA等。下列叙述错误的是（　　）

A．上图的操作流程是从预期的水蛭素功能出发的

B．在这项替换研究中目前可行的直接操作对象是基因

C．上图中大分子物质a和b的单体序列均是唯一的

D．用蛋白质工程可生产基因工程所不能生产的蛋白质

3 . 苏云金芽孢杆菌中的杀虫晶体蛋白Cry具有杀虫毒性，但Cry蛋白存在杀虫谱窄、毒力有限等问题，制约了其在农业生产中的进一步应用。科学家通过定点突变，将Cry蛋白第168位的组氨酸替换为精氨酸后，Cry蛋白对烟草天蛾的毒性提高了3倍；将Cry蛋白第282位、第283位的丙氨酸和亮氨酸分别替换成甘氨酸和丝氨酸后，Cry蛋白对舞毒蛾的毒性提高了7倍。下列叙述错误的是（       ）

A．对Cry蛋白改造需要重新合成新的基因

B．通过测定DNA的序列确定定点突变是否成功

C．根据Cry蛋白的氨基酸序列只能推测出一种相应的mRNA序列

D．经改造后的苏云金芽孢杆菌中的Cry蛋白毒性提高这一性状不可遗传

5 . 蛋白质工程是研究蛋白质结构和功能的重要手段，下列关于蛋白质工程的叙述，正确的是（       ）

A．蛋白质工程中可以不用构建基因表达载体

B．通过蛋白质工程改造后获得的性状不能遗传给后代

C．蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作

D．蛋白质工程可以通过增加酶内部二硫键数目提高酶的热稳定性

6 . 为快速准确判断病原体类型，医生通常选择用单克隆抗体制备的检测试纸进行病原体检测。下图是以病毒为抗原制备专一性单克隆抗体的过程，请回答下列问题：

(1)图中培养过程需要经过两步筛选。第一步是选出杂交瘤细胞，这一步筛选的原理是，在特定的HAT培养基上，只有杂交瘤细胞可以____。第二步筛选出的细胞的特点是____。
(2)获得的杂交瘤细胞可以进行体外培养，也可以进行体内培养。体外培养该杂交瘤细胞时，需要在合成培养基中添加____等天然成分，培养所需的气体环境是____。体内培养该杂交瘤细胞时，需要将其注入小鼠腹腔，最后从小鼠的____中提取单克隆抗体。
(3)单克隆抗体具有靶向作用是因为其具有____的特点。
(4)科学家发现，修改抗体蛋白中的一个特定氨基酸，可以大大延长单克隆抗体制品的保存时间，要生产这种抗体必须先修改相关的____，这种技术称为____。

8 . 从自然界中的生物体内分离得到的天然酶，在工业生产环境中催化效率往往较低。科研人员对酶的改造包括理性设计方法和非理性设计方法。理性设计方法通过定点诱变来改变蛋白质中的个别氨基酸，以产生更加理想的酶；非理性设计方法主要通过易错PCR技术实现（如图所示）。易错PCR的原理是利用低保真的TaqDNA聚合酶和改变PCR的反应条件，降低DNA复制的保真度，在新DNA链的合成过程中增加碱基错配，从而使扩增产物出现较多点突变。下列相关叙述正确的是（       ）

A．理性设计方法实现了基因的定向变异，属于蛋白质工程

B．构建重组质粒需要用到的工具有限制酶和DNA连接酶

C．步骤②应使受体菌处于感受态，可采用抗原—抗体杂交技术筛选突变酶

D．低保真的TaqDNA聚合酶会增加新DNA链合成过程中碱基的错配率

9 . T4溶菌酶（Ao）在温度较高时易失去活性。研究人员通过蛋白质工程将T4溶菌酶第3位上的异亮氨酸改成半胱氨酸，该处半胱氨酸可与第97位半胱氨酸之间形成一个二硫键，获得热稳定性高的T4溶菌酶（A₁）。下列说法正确的是（　　）

A．蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作

B．蛋白质工程与中心法则的流程方向一致，即DNA→mRNA→蛋白质

C．检测A1活性时可先将A1与底物混合，再置于高温环境中

D．A0和A1空间结构的差异是二者热稳定性不同的直接原因

10 . 人体内的t-PA蛋白能高效降解血栓，是心梗和脑血栓的急救药。然而，为心梗患者注射大剂量的基因工程t-PA会诱发颅内出血。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行序列改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该突变基因，可制造出性能优异的t-PA突变蛋白。下图是通过重叠延伸PCR技术获取t-PA改良基因和利用质粒pCLY11构建含t-PA改良基因的重组质粒示意图（图中重叠延伸PCR过程中引物a、b用来扩增突变位点的上游DNA序列，引物c、d用来扩增突变位点的下游DNA序列）。请回答下列问题。

   

(1)科学家将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，生产出性能优良的t-PA突变蛋白的生物技术手段属于______范畴。
(2)获得性能优良的t-PA突变蛋白的正确顺序是______（选择正确编号并排序）。
①t-PA蛋白功能分析和结构设计②借助定点突变改造t-PA基因序列③检验t-PA蛋白的结构和功能④设计t-PA蛋白氨基酸序列和基因序列⑤利用工程菌发酵合成t-PA蛋白
(3)已知t-PA蛋白第84位是半胱氨酸，相应的基因模板链（图中t-PA基因的上链）上的碱基序列是ACA，丝氨酸的密码子是UCU。重叠延申PCR示意图中的黑点便是突变部位的碱基，引物b中该突变位点的碱基是______，引物c中该突变位点的碱基是______。
(4)据图可知，重叠延伸时，需要的引物是______，引物的作用是______。若扩增图中序列时引物选择正确，PCR操作过程没有问题，但对产物进行电泳时，发现除了目标序列外还有很多非特异性条带，请分析出现此情况的原因______。
(5)若获得的t-PA突变基因如图所示，那么质粒pCLY11需用限制酶______切开，才能与t-PA突变基因高效连接。