组卷网 > 高中生物综合库 > 生物技术与工程 > 基因工程 > 基因工程的基本操作程序 > 基因表达载体的构建
题型:非选择题-解答题 难度:0.4 引用次数:650 题号:15950043
蓝细菌中的ictB蛋白能高效转运和浓缩CO2从而提高细胞光合速率。我国科学家构建了叶片特异性启动子Cab(叶绿体捕光色素蛋白Cab基因启动子)驱动的蓝细菌ictB基因表达载体,并通过农杆菌转化法获得了转ictB基因水稻,大大提高了水稻的产量。在ictB基因载体的构建中,含Cab启动子和ictB基因的重组DNA分子和Ti质粒的酶切位点如图1所示。请回答下列问题:

(1)为使重组DNA分子能定向插入T-DNA中,可用PCR的方法在重组DNA分子两端添加限制酶识别序列,据图可知,M端添加的序列所对应的限制酶是_____,N端添加的序列所对应的限制酶是_____。经过酶切的重组DNA分子和Ti质粒进行连接时,可选用_____(填“E.coliDNA连接酶”或“T4 DNA连接酶”)。添加了限制酶识别序列的重组DNA分子与Ti质粒的重组过程共需要_____种酶。
(2)将农杆菌液浸泡过的水稻愈伤组织进行植物组织培养,培养基中需加入_____进行筛选,最终获得多个水稻株系a1、a2、a3、a4.对a1~a4四个水稻株系的ictB蛋白表达量进行测定,结果如图2,其中a4株系ictB蛋白表达量较低的原因可能是_____。检测应选用的植物器官是_____,原因是_____

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【推荐1】癌胚抗原(CEA)是一种位于肿瘤细胞膜表面的蛋白,白细胞介素(IL-2)是一种淋巴因子。研究人员利用质粒plRES-CEA基因、IL-2基因,分别构建了重组质粒plRES-CEA.plRES-IL-2和plRES-CEA-IL-2。将实验小鼠分成6组,每隔5天进行一次肌肉注射,共3次。最后一次注射完成7天后,检测小鼠体内CEA含量、NK细胞(即自然杀伤细胞,可杀伤肿瘤细胞,而不破坏自身组织细胞)活性等指标,结果如下表。请回答问题:

第1组

第2组

第3组

第4组

第5组

第6组

注射物

p1RES-CEA- IL-2

p1RES-CEA

p1RES- IL-2

plRES-IL-2与plRES-CEA混合

空载体plRES

空白

CEA含量

0.889

0.689

0.455

0.863

0.413

0.088

NK细胞活性

0.395.

0.389

0.397

0.397

0.387

0.091

淋巴细胞数量

3.04

1.77

1.15

2.18

1.07

0.97


(1)构建重组质粒需要用到的工具酶有________。要保证重组质粒能够在细菌中大小鼠体内产生的大量扩增,重组质粒必须具有______
(2)注射plRES-CEA-IL-2后,小鼠体内产生的大量CEA是重组质粒中的目的基因经过_________形成的。
(3)NK细胞的活性不依赖于抗原刺激,能自发地溶解多种肿瘤细胞和被病毒感染细胞,属于人体免疫的第________道防线。
(4)从实验结果看,第_______组具有最好的特异性免疫效果。对比第3组和第____________组结果可以说明IL-2有促进______的作用。
(5)第1,2,4组小鼠均可产生CEA抗体,各组之间无显著性差异,但与第3组、空载体及白对照组相比有显著性差异,说明__________________________
2020-03-24更新 | 89次组卷
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【推荐2】Bt基因即苏云金芽孢杆菌基因,因其表达产物Bt毒蛋白具有杀虫效果好、安全、高效等优点而成为应用最为广泛的转杀虫基因。下图为培育转Bt基因抗虫棉幼苗的基本操作过程,请分析回答:

(1)Bt基因可从构建的Bt基因组文库中获取,也可以从其cDNA文库中获取。从前者获取的Bt基因_______ ,(含有/不含有)启动子。
(2)若利用PCR技术从cDNA文库中获取Bt基因(基因序列未知),需根据Bt蛋白中的氨基酸序列设计引物,引物的序列可以有多种,原因是_____________________________ 。在PCR体系中需加入其中的_______(全部/任意1种/其中2种)引物。若Bt基因序列已知,则引物的序列通常为_______种。
(3)在构建基因表达载体的过程中,为了方便筛选含有目的基因的细胞,作为运载体的Ti质粒应含有_______,Ti质粒中能帮助目的基因整合到宿主细胞染色体上的序列称为_______
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【推荐3】科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图1所示,图2、图3分别表示了干扰素基因及质粒的相关信息。

(1)图1中步骤①的技术名称是_____________
(2)图1步骤③将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有_____________
(3)图1步骤③中,需要构建含有干扰素基因的_____________,据图2、图3,对干扰素基因片段和质粒进行酶切时,可选用的限制酶组合为_____________
(4)为了得到实验所需的大量干扰素基因,研究人员利用PCR技术进行扩增。由于DNA复制时,子链只能由5′向3′方向延伸,因此可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取_____________作为引物。若要将1个干扰素基因复制4次,则需要在缓冲液中至少加入_____________个引物。
(5)将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察,选择发_____________色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达,可以采用_____________方法进行检测。
2020-03-20更新 | 251次组卷
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