【推荐1】玉米是重要的粮食类作物，其叶片细胞中的P蛋白是一种水通道蛋白，由P基因编码，在植物生长发育过程中对水分的吸收具有重要的功能。科研人员成功培育出超量表达的P蛋白转基因玉米，所用的DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图所示：
   
(1)强启动子是一段特殊的DNA片段，能被_____识别并结合，驱动基因持续转录。如果将强启动子插入到玉米的某个基因的内部，则会获得该基因的_____（选填“超量表达”或“沉默”）突变体。
(2)为使得P基因在玉米植株中超量表达，应选用_____酶组合酶切DNA片段和Ti质粒，构建基因表达载体。T-DNA在该过程中的具体作用是_____。
(3)将农杆菌浸泡过的玉米愈伤组织去菌后进行植物组织培养，为最终获得目标植株，培养基中应加入_____进行筛选，该物质属于氨基糖苷类抗生素，它能抑制蛋白质在叶绿体和线粒体中合成，使植物的光合作用和_____受到干扰，从而引起细胞死亡。
(4)玉米在世界谷物生产特别是饲料生产中占有重要地位。为实现玉米资源的高效利用，研究人员采用α-淀粉酶处理玉米来提取β-葡聚糖，欲探究提取β-葡聚糖的最适条件，测定了在不同条件下的β-葡聚糖的提取率。回答下列问题：
      
①酶的作用机理是_____。
②据图分析，水溶加热时间在1-5h内，β-葡聚糖提取率的变化为_____，温度影响β-葡聚糖提取率的原因最可能是_____。
③综合分析，若采用耐热α-淀粉酶提取β-葡聚糖，所需的最优化条件组合为
_____。

【推荐2】下图表示利用胚胎干细胞(简称ES细胞)所作的一系列研究，请据图分析回答下列问题：

（1）过程Ⅰ表示胚胎干细胞的体外培养，在培养液中需要加入水、无机盐、葡萄糖、氨基酸以及天然成分________等物质。
（2）过程Ⅱ表示将带有遗传标记的ES细胞注入早期胚胎的囊胚腔，通过组织化学染色，用于研究动物体器官形成的时间、发育过程以及影响的因素，这项研究利用了胚胎干细胞具有________的特点。在哺乳动物胚胎发育过程中，囊胚将进一步发育成________。
（3）过程Ⅲ中的褐毛基因转入胚胎干细胞前需构建________，需要的工具酶是________。
（4）克隆转基因小鼠常用的技术手段有________、细胞培养和________。

【推荐3】凝乳酶是食品生产中常用的凝结剂，科研人员从动物体内获得了凝乳酶mRNA，拟利用基因工程生产凝乳酶。据下图回答下列问题：

(1)利用凝乳酶mRNA，在______酶的作用下，可以得到凝乳酶的cDNA，进一步通过PCR扩增时需要引物，引物的作用是______。
(2)图1和图2是选用的质粒及其几种相关限制酶的识别位点，在构建基因表达载体时，最好选用的限制酶是______，这样选择的优点是______（答出两点）。
(3)若将构建的重组质粒导入大肠杆菌，需要用钙离子处理，使大肠杆菌处于________________。
(4)若利用转基因动物通过分泌的乳汁来生产所需要的药品， 将药用蛋白基因与__________________等调控组件重组在一起，通过___________的方法，导入哺乳动物的__________中，然后使其生长发育成转基因动物。

【推荐1】科学家从某细菌中提取抗盐基因，转入烟草并培育成转基因抗盐烟草，培育过程如图1所示，图2为相关限制酶识别序列及切割位点。请回答下列问题。

（1）利用PCR技术扩增抗盐基因前，需先获得细菌的______ ，在设计引物时需要在两种引物的一端分别加上_____________序列， 以便重组质粒的构建和筛选。
（2）若用Sau3A I不同程度的酶切过程①获得的重组质粒，最多可能获得____种大小不同的DNA片段。若Sau3AI酶切的DNA末端与BamHI酶切的DNA末端连接，对于该连接部位，能否被BamH I酶识别?_________ （填能、 不能或不一定能）。
（3）步骤①所使用的运载体中未标出的必需元件还有______；步骤②中需先用_______处理农杆菌以便将重组质粒导入农杆菌细胞；步骤③中通常需要添加酚类物质，其目的是________。
（4）将转入抗盐基因的烟草细胞在固体培养基上培育成完整的植株需要用______技术， 此过程除营养物质外还必须向培养基中添加_______．

（5）基因工程中的检测筛选是一个重 要的步骤。为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，图3表示运用影印培养法（使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的-种接种培养方法）检测基因表达载体是否导入了农杆菌。培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基B还含有________。 从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是______ 菌落中的细菌。

【推荐2】中国女科学家屠呦呦获2015年诺贝尔生理医学奖，她研制的抗疟药膏青蒿素挽救了数百万人的生命。但是青蒿中青蒿素的含量很低，且受地域性种植影响较大。研究人员已经弄清了青蒿细胞中青蒿素的合成途径（如图实线框内所示），并且发现酵母细胞也能够产生青蒿素合成的中间产物FPP（如图虚线框内所示）。请回答问题：

（1）在FPP合成酶基因表达过程中，完成过程①需要______酶催化，完成过程②需要的物质有___、___、
（2）根据图示代谢过程，科学家在设计培育能生产青蒿素的酵母细胞过程中，需要向酵母细 胞中导入___、 等基因。
（3）实验发现，酵母细胞导入相关基因后，这些基因能正常表达，但酵母合成的青蒿素仍很少，根据图解分析原因可能是______，为提高酵母菌合成的青蒿素的产量，请提出一个合理的思路_________。
（4）利用酵母细胞生产青蒿素与从植物体内直接提取相比较，明显的优势有_____、____ 、____ 等。

【推荐3】科学家尝试使用Cre/loxP位点特异性重组系统，在检测目的基因导入成功后，删除转基因烟草细胞内的抗除草剂基因。其技术过程如下（图中的■代表基因前的启动子），据图回答下列问题：

（1）loxP是一种只有34个碱基对构成的小型DNA片段，由两个13个碱基对反向重复序列和中间间隔的8个碱基对序列共同组成，自身不会表达，插入质粒后也不影响原有基因的表达，其碱基序列如下：

Cre酶能特异性地识别此序列并在箭头处切开loxP，其功能类似于基因工程中的_______酶。从遗传学角度分析，Cre酶改变质粒产生的结果相当于可遗传变异中的____________。
（2）将重组质粒导入到植物细胞中最常用的方法是___________。作为标记基因，抗除草剂基因用于检测目的基因是否导入成功的原理是___________。
（3）经检测成功后，抗除草剂基因已没有用途，继续留在植物体内可能会造成的安全问题是________。经Cre酶处理后，质粒中的两个loxP序列分别被切开后，可得到如上图右侧的这两个DNA分子。由于_____的原因，抗除草剂基因不再表达，之后会在培养过程中消失。
（4）有关质粒描述错误的是(     )
A.质粒是能够自我复制的环状DNA分子
B.质粒是唯一的载体
C.质粒上有多个酶切位点
D.质粒可在宿主外单独复制

【推荐1】下图是用治疗性克隆的方法治疗遗传性糖尿病的过程图解。请据图回答:

（1）过程①中，科学家常采用________消化处理，并应用液体培养基培养获得______。用于核移植的细胞，通常采用10代以内的细胞，原因是_________。
（2）过程②选取_______期的卵母细胞作为受体细胞，常采用显微操作去核法去除细胞核，除此以外还可以采用_________方法达到去除细胞核的目的。
（3）过程③需用物理或化学方法激活受体细胞，其目的是_______________。
（4）图中Ⅱ所示的细胞是从囊胚的内细胞团中分离出的__________细胞，其在形态上具有______________的特性。
（5）图中④将胰岛素基闪导入Ⅱ获得重组细胞B的最有效方法是_________。
（6）过程⑤应将重组细胞B放在添加_______的培养液中定向诱导分化，产生胰岛B细胞。
（7）图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是________，该种基因治疗所属类型为_______________。

【推荐2】研究人员将大麦细胞的LTP1基因导入啤酒酵母菌中，获得的啤酒酵母菌可产生LTP1蛋白，并酿出泡沫更加丰富的啤酒，下图为转基因啤酒酵母的生产过程。回答下列问题：
   
(1)已知DNA复制时子链的延伸方向是5'→3'，图1中A、B、C、D在不同情况下均可以作为引物，用PCR技术扩增LTP1基因时应该选用_______作为引物。
(2)_______是实施基因工程的核心。图2中的B为质粒，质粒和LTP1基因结合形成重组质粒C.重组质粒C在受体细胞中能够稳定存在并发挥作用，在LTP1基因的首端必须具有_______，尾端必须具有终止子，还必须含有标记基因和目的基因。
(3)为检测目的基因在受体细胞基因组中的整合情况，首先采用DNA分子杂交技术检测LTP1基因是否导入成功，需要从转基因啤酒酵母中提取DNA，用_______作探针与之杂交。
(4)为检测转基因啤酒酵母是否产生LTP1蛋白，除检测LTP1蛋白是否产生及含量外，还可观察转基因啤酒酵母所酿啤酒的_____进行判断，若能检测到LTP1蛋白，但效果差，可能的原因是____；若经检测确定细胞中无LTP1蛋白，可采用PCR技术检测细胞中的RNA，如果能检测到mRNA，则可能是_______；如果检测后确定细胞中无LTP1蛋白的mRNA，但之前能检测到LTP1基因，则LTP1基因未能正常转录的原因可能是_______。

【推荐3】 M 基因编码的M蛋白在动物A的肝细胞中特异性表达。现设计实验，将外源DNA片段F插入M 基因的特定位置，再通过核移植、胚胎培养和胚胎移植等技术获得M 基因失活的转基因克隆动物A，流程如图所示。回答下列问题：
   
(1)在构建含有片段F的重组质粒过程中，切割质粒DNA的工具酶是_________；常用_________方法将重组质粒导入成纤维细胞。
(2)在无菌、无毒等适宜环境中进行动物A成纤维细胞的原代和传代培养时，需要定期更换培养液，目的是_________，在培养过程中细胞往往会贴壁生长这种现象称为_________。
(3)胚胎移植时的早期胚胎一般选_________期的胚胎；移植后一般不会发生免疫排斥反应，原因是_________。
(4)以免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合，诱导融合的方法是_______（答出一点即可）。 筛选融合杂种细胞，制备M蛋白的单克隆抗体。简要写出利用此抗体确定克隆动物A中M 基因是否失活的实验思路_________。