组卷网 > 高中生物综合库 > 生物技术与工程 > 基因工程 > 基因工程的基本操作程序 > 目的基因的获取 > PCR扩增的原理与过程
题型:非选择题-解答题 难度:0.4 引用次数:490 题号:19033131
野生茄子具有耐盐基因StP5CS。研究人员扩增StP5CS 基因并双酶切该基因和改造后的中间载体pCAMBIA1301 ,经DNA 连接酶连接酶切产物,最终得到下图1所示的植物表达载体pCAMBIA1301—StP5CS。将该植物表达载体导入植物细胞进而获得了耐盐植株。回答下列问题:
       
(1)提取茄子幼嫩叶片的总RNA,在 _____________ 的催化下合成cDNA,再通过PCR技术扩增StP5CS基因。PCR利用   ____________ 的原理。
(2)扩增StP5CS 基因的上游引物为 ZHPs: 5'-CACATTTCTGCTCCTACATT-3',下游引物为ZHPa :5'-CTTCCTAAATACACAACTGGAT-3',   两种引物中C+G 的比例保持一致主要是为了保证 _____________ 。StP5CS基因PCR扩增的每次循环分为3步,在循环前常要进行一次94℃、5min预变性,其目的是 ______________
(3)构建耐盐基因StP5CS 表达载体时,用限制酶BamH I和SmaI切割质粒pCAMBIA1301,15 min 后需将温度从36℃升高至65℃左右并保温20 min,目的是___________ ,从而终止酶切反应。mRNA合成方向是 图2是StP5CS基因示意图,为使其能正确插入表达载体并成功表达,则图中P处的碱基序列应为 5'-______     -3'。
(4)若将该表达载体导入柑橘细胞中,常用_______________法,表达载体上的 Ori 可以保证其在柑橘细胞中能____________

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名校
【推荐1】回答下列有关胚胎问题:
(1)对高产奶牛胚胎移植前需要进行性别鉴定,最常用的方法是_______________________法,通常取___________________细胞提取DNA,然后用位于_____________染色体上的性别决定基因的一段碱基做引物,以______________为原料进行扩增,至少经过___________次复制可能得到所需要的产物。
(2)在胚胎干细胞培养液中加入_________________,能够维持不分化的状态。相同的胚胎干细胞,“克隆”的结果各种各样,如有的是神经细胞,有的是血细胞,有的是肌肉细胞,原因是_________________,这为揭示______________________的机理提供了有效手段。
2017-05-11更新 | 240次组卷
非选择题-解答题 | 较难 (0.4)
【推荐2】研究人员利用小鼠的单倍体 ES 细胞(只有一个染色体组),成功培育出转基因小鼠。 其主要技术流程如图所示,请分析回答下列问题:

注:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ代表四种限制酶。箭头指向的位置为限制酶的切割位点:Ampr 是氨苄青 霉素抗性基因,Neor 是 G418 抗性基因。
(1)图中细胞乙与_____类似,图中桑椹胚需通过_______技术移入代孕小鼠子宫内继 续发育,进行该操作前需对受体小鼠进行同期发情处理,目的是_____
(2)在基因工程操作步骤中,过程①②称为_____。已知氨苄青霉素不能有效杀 死小鼠细胞,而一定浓度的 G418 能有效杀死不具有 Neor 的小鼠细胞。结合上图推测,过程①选用的 2 种限制酶是_____(填图中的编号),③处的培养液应添加______(填“氨苄青 霉素”或“G418”)。
(3)基因工程对 DNA 的需求量较大,利用 PCR 技术可以大量扩增目的基因。PCR 反应体系 中除含缓冲液、模板 DNA、dNTP(包含 dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、引物外,还应含有__________;引物应选用下图中的______(填图中字母)。
2021-07-17更新 | 495次组卷
非选择题-实验题 | 较难 (0.4)
【推荐3】稻瘟病和褐飞虱是严重影响水稻生产的两大病虫害。稻瘟病病菌种类繁多,为培育抗病虫害的水稻新品种,育种工作者进行了下列相关研究。
(1)现有纯合水稻品系甲和乙,甲对稻瘟病病菌X表现为抗病,对稻瘟病病菌Y感病;乙对病菌Y抗病,对病菌X感病。对病菌X的抗病与感病由一对基因M、m控制;对病菌Y的抗病与感病由一对基因H、h控制。
①育种工作者将甲和乙作为亲本进行杂交,得到F1,F1自交得F2。F1对病菌X和Y均表现为抗病,检测F2统计结果如下表所示。

对病菌Y

对病菌X

抗病

感病

抗病

150株

53株

感病

52株

17株

据表推测这两对抗病基因在染色体上的位置关系为______。甲和乙的基因型分别为___________。同时对病菌X和Y具有抗性的F2植株中纯合子所占比例为___________
②育种工作者根据M/m、H/h的基因序列设计特异性引物,分别对F2部分植株的DNA进行PCR扩增。已知M比m片段短,h比H片段短,扩增结果如图所示。据图判断符合选有目标的植株编号为___________,依据是_______

(2)研究发现,甲和乙对稻瘟病病菌Z均表现为抗病性。为研究甲和乙中对病菌Z抗病基因的位置,育种工作者用两种水稻杂交,F1均对病菌Z表现为抗病性,统计F1自交后代F2的性状分离比。
①若F2对病菌Z的表型及比例为___________,则甲和乙对病菌Z的抗性基因可能位于同一个位点。
②若F2对病菌Z的表型及比例为___________,则甲和乙对病菌Z的抗病基因位于两对同源染色体上。
(3)通过筛选获得具有上述抗病基因且品质优良的纯合品系丙,欲将抗褐飞虱性状(由一对等位基因控制)与品系丙的抗病及各种优良性状整合在同一植株上,可采用的正确有种步骤是___________(按正确顺序选填下列字母)。
a.抗褐飞虱品系与野生型进行杂交
b.抗褐飞虱品系与品系丙进行杂交
c.品系丙与野生型进行杂交
d.杂交后代自交筛选抗褐飞虱个体,使其与品系丙杂交
e.杂交后代自交筛选抗稻瘟病个体,使其与抗褐飞虱品系杂交
f.多次重复d,筛选抗褐飞虱个体
g.多次重复e,筛选抗稻瘟病个体
自交,后代中选取目的基因纯合的植株,进行稻瘟病抗性和褐飞虱抗性田间实验鉴定。
2024-04-15更新 | 106次组卷
共计 平均难度:一般