近段时间120万元一针的抗癌药物阿基仑赛注射液备受关注，其实质是一种特异性免疫治疗方法（CAR-T）。该方法首先提取患者的外周血T细胞，再通过对T细胞进行基因重组增强T细胞特异性识别肿瘤抗原的能力，通过将改造后的T细胞在体外大量增殖再输回到患者体内用于杀伤肿瘤细胞。因其为个性化的治疗方案，所以这种疗法价格昂贵。回答下列有关问题：
(1)通过基因工程改造T细胞时，目的基因体外扩增需要对两种引物进行设计，为了确保目的基因与运载体正确拼接，在设计引物时需添加_____ 位点；扩增过程包括_____ 三个阶段，至少经过_____ 轮复制才可以扩增出两条链等长的目的基因。
(2)T细胞的体外增殖需要配制培养基，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为_____ ，当细胞分裂生长到表面相互接触时就会出现_____ ，需要用_____ 处理，然后分瓶培养以获取大量T细胞。
(3)除上述疗法外，单克隆抗体治疗发展也很迅速，通过单抗与恶性肿瘤细胞表面表达的特异性抗原的结合以及后续的一系列反应使细胞凋亡。制备单抗过程中需要将_____ 和_____ 融合，然后还要进行抗体阳性筛选，最终获取融合细胞大量培养。
(1)通过基因工程改造T细胞时，目的基因体外扩增需要对两种引物进行设计，为了确保目的基因与运载体正确拼接，在设计引物时需添加
(2)T细胞的体外增殖需要配制培养基，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为
(3)除上述疗法外，单克隆抗体治疗发展也很迅速，通过单抗与恶性肿瘤细胞表面表达的特异性抗原的结合以及后续的一系列反应使细胞凋亡。制备单抗过程中需要将
更新时间：2023-06-18 15:34:08
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【推荐1】用基因工程技术将乙肝病毒的蛋白A基因导入酵母菌细胞，可以大规模的生产乙肝疫苗，请回答下列相关问题：
（1）利用PCR技术扩增蛋白A基因时，需要在一定的缓冲溶液中进行，目的是____________________ 。反应体系中除了含有蛋白A基因、脱氧核苷酸、耐热的DNA聚合酶、还必须含有分别与两条模板链相结含的____________ 。
（2）大规模培养工程酵母菌时，培养液中需含有水、无机盐、碳源、氮源等营养物质，培养过程中还需通入无菌空气，目的是_______________________ 。
（3）利用凝胶色谱法从工程酵母菌中分离蛋白A时，凝胶色谱柱装填完毕后需立即连接缓冲液洗脱瓶，一段时间后加入蛋白A粗提样品进行洗脱。立即连接缓冲液洗脱瓶的目的是____________ ，若蛋白A的分子量较小，则洗脱时间相对____________ （较短、较长）。
（4）以乙肝病毒蛋白A作为疫苗给人注射时，必须分多次进行，两次注射之间必须间隔一定的时间，目的是让人体____________ ；通过注射该疫苗无法预防流感病毒，原因是________________________ 。
（1）利用PCR技术扩增蛋白A基因时，需要在一定的缓冲溶液中进行，目的是
（2）大规模培养工程酵母菌时，培养液中需含有水、无机盐、碳源、氮源等营养物质，培养过程中还需通入无菌空气，目的是
（3）利用凝胶色谱法从工程酵母菌中分离蛋白A时，凝胶色谱柱装填完毕后需立即连接缓冲液洗脱瓶，一段时间后加入蛋白A粗提样品进行洗脱。立即连接缓冲液洗脱瓶的目的是
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【推荐2】采用PCR技术可快速、特异性地检测植物病原体。甘蔗白叶病是由植原体引起的甘蔗病害之一。研究人员根据甘蔗白叶病植原体的secA基因设计特异性引物secA-F/secA-R，利用PCR技术对3份甘蔗白叶病（SCWL）植株总DNA进行检测，结果如图1所示（图中M：DNA标样；S1~S3：SCWL阳性样品；NC：阴性对照；CK：水对照）。图2为PCR检测SecA基因的敏感性实验结果[图中M：DNA标样；1~8：模板DNA量分别为5×107fg，5×106fg，5×105fg，5×104fg、5×103fg、5×102fg、50fg、5fg；NC：阴性对照；CK：水对照；fg（飞克）是一种用于衡量物质重量的单位]。回答下列问题：______ bp；PCR扩增secA基因的过程中要加入引物的原因是________________________ 。若引物secA-F/secA-R过长，则会导致复性和延伸温度______ 。
(2)若secA基因中C—G碱基对所占比例较高，则PCR扩增时变性温度应______ ，原因是______________________________ ；若PCR反应体系中1个secA基因经过5次循环，则需消耗的引物数量为______ 对。
(3)据图2判断，在PCR过程中模板DNA量与PCR扩增结果间的关系是______ 。图2中结果表明PCR检测secA基因的灵敏度为______ fg模板DNA量。
(2)若secA基因中C—G碱基对所占比例较高，则PCR扩增时变性温度应
(3)据图2判断，在PCR过程中模板DNA量与PCR扩增结果间的关系是
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【推荐3】下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet表示四环素抗性基因，amp表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindⅢ、SmaΙ直线所示为三种限制酶的切割位点：
(1)科学家用PCR的方法对人乳铁蛋白基因进行体外扩增，加热至94℃ 的目的是使DNA样品的_______ 键断裂，如果人乳铁蛋白基因的部分序列是：
5’---ATGGCT………AGGAAC---3’
3’---TACCGA………TCCTTG---5’
根据上述序列应选择引物B和_______ （填字母）进行PCR。
(2)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用_______ 、______ 限制酶同时切割载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含_________ 的培养基上进行。
(3)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是______
(4)过程①可采用的操作方法是________ 技术。
(5)为检测人乳铁蛋白是否成功表达，通常可采用________ 技术。
(1)科学家用PCR的方法对人乳铁蛋白基因进行体外扩增，加热至94℃ 的目的是使DNA样品的
5’---ATGGCT………AGGAAC---3’
3’---TACCGA………TCCTTG---5’
根据上述序列应选择引物B和
| A．引物：5’-TACCGA-3’ | B．引物：5’-GTTCCT-3’ |
| C．引物：5’-AUGGCU-3’ | D．引物：5’-ATGGCT-3’ |
(3)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是
| A．启动子 | B．tetR | C．复制原点 | D．ampR |
| A．农杆菌转化 | B．大肠杆菌转化 | C．显微注射 | D．细胞融合 |
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【推荐1】单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）可引起水泡性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗HSV-1的单克隆抗体可快速检测HSV-1。回答下列问题：
（1）在制备抗HSV-1的单克隆抗体时，应先给小鼠注射一种纯化的HSV-1蛋白，再从免疫小鼠的_______ 中获取B淋巴细胞。
（2）将获取的B淋巴细胞与小鼠的骨髓瘤细胞融合，再用_______________ 进行筛选，选出的杂种细胞的特点是______________________________________ 。
（3）经上述过程选择的杂种细胞，还需要进行____________________________ ，经多次筛选，就可以获得足够数量的能分泌抗HSV抗体的细胞。
（4）单克隆抗体最主要的优点在于它的__________________________________ 。单克隆抗体最广泛的用途是_____________________ ，该用途依据的原理是_________________________ 。
（1）在制备抗HSV-1的单克隆抗体时，应先给小鼠注射一种纯化的HSV-1蛋白，再从免疫小鼠的
（2）将获取的B淋巴细胞与小鼠的骨髓瘤细胞融合，再用
（3）经上述过程选择的杂种细胞，还需要进行
（4）单克隆抗体最主要的优点在于它的
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【推荐2】完成下列题目：
（1）基因工程的核心步骤是_________________________ 。
（2）PCR扩增过程中，延伸阶段的实质是在_________________ 酶的作用下，合成子链。
（3）将目的基因导入大肠杆菌细胞中，常用_______ 处理细胞，使细胞处于感受态。
（4）单克隆抗体可制作诊断盒，用于准确、快速诊断H7N9病毒感染者，这种诊断运用了______________ 杂交技术。
（5）受精卵在体外培养时，培养液中除了加水、无机盐、维生素、葡萄糖、氨基酸等分泌的营养成分外，往往需要特别加入__________ ，同时在含5%_______ 的无菌、恒温培养箱中进行培养。
（6）在胚胎移植前，通过__________ 技术可获得较多胚胎。在胚胎移植过程中，供体、受体动物选择好后，要用激素进行_____________ 处理，使供、受体的生理状态相同。
（7）动物细胞融合技术常用的诱导因素有PEG、电激、和___________________ ，培养液中共有_____ 种类型的融合细胞（只考虑两两融合）。
（1）基因工程的核心步骤是
（2）PCR扩增过程中，延伸阶段的实质是在
（3）将目的基因导入大肠杆菌细胞中，常用
（4）单克隆抗体可制作诊断盒，用于准确、快速诊断H7N9病毒感染者，这种诊断运用了
（5）受精卵在体外培养时，培养液中除了加水、无机盐、维生素、葡萄糖、氨基酸等分泌的营养成分外，往往需要特别加入
（6）在胚胎移植前，通过
（7）动物细胞融合技术常用的诱导因素有PEG、电激、和
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【推荐3】肿瘤相关成纤维细胞（CAF）存在于各种实体肿瘤中，是肿瘤微环境建立的基础，对肿瘤发生、发展和转移起促进作用。树突状细胞（DC）是一种抗原呈递细胞（下图）。通过细胞融合制备了DCICAF融合细胞疫苗，研究了靶向CAF的肿瘤免疫治疗。
(1)DC将抗原摄取、加工处理后，在其表面形成抗原－MHC复合物，复合物与T细胞表面的______________ 特异性结合，在CD80/CD86等分子的共同作用下，激活T细胞。活化的T细胞参与_____________ 免疫应答。DC/CAF融合疫苗的制备：分别从癌组织和骨髓中分离CAF和DC，诱导细胞融合后进行筛选，将得到的融合细胞加入动物细胞培养液中，并置于CO2培养箱中培养。收获融合细胞制备疫苗。
(2)DC/CAF融合疫苗的检测
①检测DCICAF融合细胞表面相关分子的表达量发现，未活化的DC与CAF融合后表现出活化DC的特性，推测其原因是______________ 。
②将DC/CAF融合细胞与T细胞共培养，以未融合细胞与T细胞共培养组为对照，一段时间后检测相关指标，结果表明融合细胞能更有效地活化T细胞。可供检测的指标有______________ 等（写出两项指标）。
(3)利用患者DC制备的DC/CAF融合疫苗可能具有的特点包括_____________。
(1)DC将抗原摄取、加工处理后，在其表面形成抗原－MHC复合物，复合物与T细胞表面的
(2)DC/CAF融合疫苗的检测
①检测DCICAF融合细胞表面相关分子的表达量发现，未活化的DC与CAF融合后表现出活化DC的特性，推测其原因是
②将DC/CAF融合细胞与T细胞共培养，以未融合细胞与T细胞共培养组为对照，一段时间后检测相关指标，结果表明融合细胞能更有效地活化T细胞。可供检测的指标有
(3)利用患者DC制备的DC/CAF融合疫苗可能具有的特点包括_____________。
| A．通过激活自身免疫系统特异性杀伤CAF而发挥作用 |
| B．融合细胞呈递的抗原种类比转特定CAF抗原基因的DC更多 |
| C．DC来自患者自身，不会引起免疫排斥 |
| D．由于肿瘤细胞具有特异性，该疫苗只对单一肿瘤有效 |
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【推荐1】华蟾素是我国经典抗肿瘤药物。研究人员为探寻华蟾素注射液抗肝癌细胞的作用机理，进行了一系列实验。请根据图中信息回答下列问题。
Ⅰ.肝癌细胞的培养
（1）培养肝癌细胞时，在培养基中加入适量的___________ 以补充合成培养基中缺乏的物质，为防止培养过程发生污染要加入___________ 。此外，每48h更换1次培养液，目的是___________ ；同时还要提供适宜的温度、___________ 、氧气和二氧化碳等环境条件。
Ⅱ.探究华蟾素药效作用机理的实验：
（2）DNA拓扑异构酶Ⅱ（简称TopoⅡ）为真核生物所必需，在DNA复制、转录等方面发挥重要作用，TopoⅡ在肿瘤细胞中含量明显高于正常细胞。华蟾素注射液处理细胞48h后，采用逆转录-聚合酶链式反应技术检测TopoⅡ基因的表达情况，结果如表。
①逆转录-聚合酶链反应的主要原理是：提取肝癌细胞中的总RNA，在___________ 酶的作用下合成cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增，为完成该反应还需要添加______________________________________ 。
②由上可知，华蟾素注射液在分子水平上影响肝癌细胞的机理是_______________________________ 。
Ⅰ.肝癌细胞的培养
（1）培养肝癌细胞时，在培养基中加入适量的
Ⅱ.探究华蟾素药效作用机理的实验：
（2）DNA拓扑异构酶Ⅱ（简称TopoⅡ）为真核生物所必需，在DNA复制、转录等方面发挥重要作用，TopoⅡ在肿瘤细胞中含量明显高于正常细胞。华蟾素注射液处理细胞48h后，采用逆转录-聚合酶链式反应技术检测TopoⅡ基因的表达情况，结果如表。
华蟾素浓度（μg/ml） | 0 | 0.105 | 0.21 | 0.42 |
TopoⅡ基因表达量 | +++++ | ++++ | ++ | + |
①逆转录-聚合酶链反应的主要原理是：提取肝癌细胞中的总RNA，在
②由上可知，华蟾素注射液在分子水平上影响肝癌细胞的机理是
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【推荐2】研究表明，骨质疏松症可由骨硬化蛋白引起。目前科学家通过生物工程技术制备出骨硬化蛋白单克隆抗体，该抗体通过与骨硬化蛋白特异性结合而间接促进骨形成、抑制骨吸收，在骨质疏松的治疗中有重大意义。下图为制备骨硬化蛋白单克隆抗体的部分流程图，请据图回答问题：
(1)图中抗原是指_____ ，通常从小鼠的_____ 中采集B淋巴细胞。
(2)诱导动物细胞融合常用的方法有_____ 。（至少写2个）
(3)在制备骨硬化蛋白单克隆抗体的过程中，先用_____ 筛选出杂交瘤细胞，然后再经过克隆化培养和_____ 才能筛选出符合要求的杂交瘤细胞，最终筛选出的杂交瘤细胞的特点是_____ 。
(4)单克隆抗体的特点：能准确地识别_____ ，与特定抗原发生特异性结合，并可大量制备。
(5)单克隆抗体制备过程中涉及的细胞工程技术有_____ 、_____ 。
(1)图中抗原是指
(2)诱导动物细胞融合常用的方法有
(3)在制备骨硬化蛋白单克隆抗体的过程中，先用
(4)单克隆抗体的特点：能准确地识别
(5)单克隆抗体制备过程中涉及的细胞工程技术有
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【推荐3】下面两幅图分别是单克隆抗体制备过程和克隆羊培育过程示意图，请据图回答 下列问题：________ 。
(2)图甲中②过程可用多种方法进行促融合操作，仅考虑细胞两两融合，促融合后可得到_______ 种细胞，③过程中至少涉及两次筛选：第一次是利用特定的选择性培养基进行初步筛选，第二次是利用____ 、_________ 的方法筛选出_____ 细胞。
(3)单克隆抗体结合上抗癌药物能定向攻击癌细胞，这一应用可形象地称为_______ 。
(4)图乙过程的技术具有多种用途，但是不能_______。
(5)若不考虑环境因素，多利羊的性状完全和白面绵羊相同吗？__________ （填“完全”或“不完全”），原因是____________________ 。
(6)细胞培养时培养液中除了氨基酸等营养物质外，通常还要加入_______________ 等天然成分，原因是________________ 。
(2)图甲中②过程可用多种方法进行促融合操作，仅考虑细胞两两融合，促融合后可得到
(3)单克隆抗体结合上抗癌药物能定向攻击癌细胞，这一应用可形象地称为
(4)图乙过程的技术具有多种用途，但是不能_______。
| A．有选择地繁殖某一性别的家畜 |
| B．繁殖家畜中的优良个体 |
| C．用于保存物种 |
| D．改变动物的核基因 |
(6)细胞培养时培养液中除了氨基酸等营养物质外，通常还要加入
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