【推荐1】图1为培育转AFPs基因（抗冻基因）番茄的示意图，外源DNA和质粒上均标出了酶切位点及相关抗性基因，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因。请分析并回答下列问题：

(1)据图分析，若需使用插入灭活法筛选并鉴定重组质粒，应优先选用限制酶____________对目的基因和质粒切割。在形成的重组质粒上，能被RNA聚合酶识别且结合的部位称为____________。
(2)图2中的A链和B链来自于AFPs基因。欲利用PCR技术对AFPs基因扩增4次循环，应选取的引物是____________，需要的引物数量是___________个。在这个过程中，还需要添加___________酶。

(3)为提高导入成功率，常利用____________处理农杆菌，Ti质粒含有的____________可将目的基因整合到番茄细胞的染色体DNA上，采用___________技术将番茄细胞培育成转基因番茄。若要获得抗冻能力更强的抗冻番茄，可以对AFPs基因进行改造，最终得到相应的蛋白质，该过程需用到__________工程。检测转基因番茄是否产生抗冻蛋白，所用的方法是__________。
(4)用插入灭活法筛选出的含重组质粒的农杆菌在含氨苄青霉素培养基和含四环素培养基上的存活情况分别是___________。

【推荐2】为使水稻获得抗除草剂性状，科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入水稻植株，获得抗草甘膦转基因水稻。回答下列问题：

(1)将草甘膦抗性基因作为目的基因，与Ti质粒构建基因表达载体。目的基因表达载体进入细胞后，Ti质粒上的___区段可转移到油菜细胞的基因组中。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是___。
①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点
②酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同
③酶切后，草甘膦抗性基因形成的两个黏性末端序列不相同
④草甘膦抗性基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
A.①③   B.①④   C.②③   D.②④
(2)农杆菌经处理后，将其与基因表达载体混合，完成___后，在添加___的培养基中，经筛选1得到含目的基因表达载体的农杆菌。
(3)利用PCR技术，可以鉴定被侵染的愈伤组织中是否含有草甘膦抗性基因。草甘膦抗性基因一条链的两端序列如下：

根据上述序列应选择引物___（填序号）进行PCR。若进行30轮循环，需引物___个。
①引物:5’-TCTGTTGAAT-3’
②引物:5’-GAACCTACTA-3’
③引物:5’-ATTCAACAGA-3’
④引物:5’-CTTGGATGAT-3’
(4)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。在PCR反应体系中含有耐高温的DNA聚合酶，右面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为___。

(5)除了鉴定愈伤组织中是否含有目的基因以外，还可以利用___方法来鉴定草甘膦抗性基因的表达产物，从而进行图中的筛选2，两次筛选后得到的转基因愈伤组织经过细胞的___过程，获得转基因水稻。

【推荐1】家鸽（ZW型性别决定）体内有一种蛋白质多聚体能识别外界磁场并自动顺应磁场方向排列实现磁场导航。该多聚体由蛋白质M和蛋白质R共同构成，对应的基因M和基因R均为显性，且独立遗传（不考虑位于W染色体上），在家鸽的视网膜细胞中共同表达。若某一基因失去功能，家鸽会出现飞行紊乱。现有三个纯种家鸽品系，甲品系能合成蛋白质M和蛋白质R，乙品系只能合成蛋白质M，丙品系只能合成蛋白质R，请回答以下问题：
(1)甲品系家鸽某个体的所有细胞是否都能表达M和R基因？______________。（填“是”或“不是”）。
(2)为进一步确定这两对基因（M/m、R/r）在染色体上的位置，请设计最简单的杂交实验思路并预测实验结果。
实验思路：______________。
预期结果：①若所有后代均能磁场导航，则两对基因（M/m、R/r）分别位于两对常染色体上；
②__________________。
③__________________。
(3)简单重复序列（SSR）也称微卫星DNA，它在家鸽个体间具有丰富的多样性，可用于亲缘关系鉴定，防止后代近亲交配而导致群体生活力下降。具体步骤和结果预测如下：
①提取家鸽基因组DNA，用______________处理DNA和pUC18（含有氨苄青霉素抗性基因）质粒，获得重组质粒后，将其与______________处理的对氨苄青霉素敏感的大肠杆菌悬液混合，完成转化。
②将完成转化的菌液接种于含氨苄青霉素的培养基上培养，氨苄青霉素的作用是______________。
③利用“影印培养法”得到导入了重组质粒的大肠杆菌菌落，筛选SSR位点，进行测序，并设计引物通过PCR扩增SSR位点。
④科学家利用PCR扩增的SSR位点对家鸽进行亲子鉴定，结果如图，由于基因突变的频率较低，因此，子代1和______________是母本与疑似父本2的后代。

【推荐2】马铃薯是全球第四大重要的粮食作物，仅次于小麦、水稻和玉米。近年来对马铃薯育种的研究越来越多。请回答下列问题。
（1）马铃薯在无性繁殖过程中感染的病毒易传播给后代，从而影响后代产量和品质。为了解决这一问题，可选取植物茎尖通过___________技术来脱除病毒，选择茎尖的原因是_____________________________。
（2）科学家常采用_______法将控制HPV-16病毒(人宫颈癌病毒)外壳蛋白合成的基因导入马铃薯细胞，培育出可生产的且抗该病毒的转基因马铃薯，人食用后可获得抗性。若要使目的基因在受体细胞中表达，需要构建________，而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是目的基因缺乏___________________。 科学家发现某些细菌的质粒上存在抗生素基因，该基因在基因工程中可作为_________________。
（3）实验发现，该转基因马铃薯经烹煮后抗病毒效果较差，分析其原因可能是________。若要确定某食品是不是转基因生物或是通过转基因技术加工而成的，可以从检测其是否含有外源基因或DNA、____________________等方面进行检测。

【推荐3】利用转基因的工程菌生产药用蛋白，近些年在我国制药行业中异军突起。下图1表示基因工程常用的一种质粒。

回答有关问题：
（1）SphⅠ和SacⅠ两种限制酶可识别并切割不同的DNA序列，将目的基因和质粒都通过SphⅠ和SacⅠ切割，可以避免________________________________________。拼接成重组质粒，需要加入_________酶才能完成。
（2）各限制酶在该质粒上分别只有一处识别序列，有关质粒和重组质粒的限制酶酶切片段长度如下表所示。已知质粒被切除的片段长度为0.5kb，则与质粒结合的目的基因长度为________kb。质粒上ClaⅠ与PstⅠ区域之间的长度为2.4kb（如图1所示），结合图2分析，目的基因上ClaⅠ、PstⅠ两种制酶的切割位点分别为_______（填“a和b”或“b和a”）

	质粒	重组质粒
BglⅡ	6.0kb	7.1kb
ClaⅠ	6.0kb	2.3kb，4.8kb
PstⅠ	6.0kb	1.5kb，5.6kb

（3）在筛选导入重组质粒的受体菌时，培养基中应加入适量的___________，使导入重组质粒和普通质粒的受体菌都能在该培养基上生长。

【推荐1】某科研团队利用“三父母婴儿”技术，使一对夫妇成功产下了一个健康男婴（婴儿母亲的线粒体携带有亚急性坏死性脑病基因，曾导致多次流产，婴儿夭折）。所谓“三父母婴儿”技术，是指利用线粒体基因缺陷的女性卵子中的健康细胞核和捐赠者去掉细胞核的卵子，“拼装”一个新的卵子，再通过一系列现代生物技术，最终培育出正常婴儿的技术。请回答有关问题：
（1）为重新“拼装”卵子，需要通过显微操作进行________。接下来他们又使用电脉冲方法来________ “拼装”的卵子。
（2）精子与卵子在体外受精后，应将其移入________中继续培养，以检查受精状况和受精卵的发育能力。当胚胎发育到适宜的阶段，可将其取出向受体移植或________。
（3）培育“三父母婴儿”的过程中利用到的现代生物科技技术有________（回答出两点即可）。
（4）科学家刻意设计让这对夫妇产生男婴，其依据是________。

【推荐2】某基因研究院培育出了转基因克隆绵羊，该绵羊能合成深海鱼体内富含的不饱和脂肪酸omega--3。
(1)在培育转基因克隆绵羊过程中，运用___________方法除去的卵母细胞的细胞核，通过化学试剂____________使该细胞与供体细胞融合，进而构建重组胚胎。
(2)为保证胚胎移植顺利进行，需要在合适的季节对供、受体母羊进行________处理，培育过程中，科研人员同时将omega-3合成酶的基因片段转移到了该羊的基因组中，使目的基因进入受体细胞并维持稳定和表达的过程，称为________。 该转基因羊通过分泌的乳汁来生产omega- -3，受体细胞通常是_______， 利用PCR技术进行扩增目的基因的前提是______。
(3)人们主要通过食用深海鱼肉摄取omega--3，人类过度捕杀深海鱼而使生态系统的三大功能_______下降。“十四五”规划中提及要制定2030年前碳达峰行动方案，争取2060年前实现碳中和。要实现这一目标不仅需要对破坏的生态环境进行恢复，还要考虑当地人的经济发展和生活需要，这主要遵循了生态工程的________________原理。

【推荐3】下图表示利用小鼠胚胎干细胞(ES细胞）做的研究，分析回答下列问题。

（1）a过程表示基因工程，则其核心步骤是___________。该过程所使用的工具酶有_______。
（2）b过程可增加ES细胞的数量，若想认早期胚胎中获得更多的ES细胞，可将早期胚胎培养至_____(时）期。d过程移入的胚胎能够存活，是因为代孕子宫不会对其发生_____________。同时能与受体子宫建立正常的___________联系。用肝癌细胞作抗原刺激B淋巴细胞，再将此淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后获得细胞代谢产物___________，该产物与抗癌药物结合制成“生物导弹”，从而定向杀死小鼠体内的肝癌细胞。
（3）上述研究过程中使用的技术有__________(至少3个）。若要培养试管动物，除以上技术外，还需要运用______________技术。

【推荐1】 科学家将绿色荧光蛋白(GFP)基因转入小鼠胚胎干细胞(ES)内，GFP基因若表达就会使细胞带有绿色荧光，继而利用带有绿色荧光的ES细胞培育出嵌合型的小鼠用于科学研究，流程如图所示。请回答：

（1）步骤③的生理过程称为_______，在哺乳动物体内发生的场所是__________。受精卵中的遗传物质的来源是____________________。
（2）步骤②的受体细胞是小鼠ES细胞，ES细胞是___________细胞的简称，由图可知一般从囊胚的___________分离得到，且ES细胞在功能上具有________________的特点。在培养ES细胞时，需要_______________________技术。
（3）图中重组囊胚在步骤⑤之前要先检测_________________，再通过___________技术移入代孕母鼠子宫内继续发育。

【推荐2】目前，人体移植器官短缺是一个世界性难题。现代生物技术为此问题的解决提供了方向。回答下列相关问题:
（1）治疗大面积烧伤的病人时，可通过动物细胞培养技术获得大量的自体健康皮肤。其基本过程为:先用胰蛋白酶处理取自病人的皮肤组织，制成____________，转到培养瓶后放入二氧化碳培养箱中培养。一段时间后，在培养瓶的底部能形成单层皮肤细胞的原因是________________________。
（2）由于人体移植器官短缺，科学家将目光集中在小型猪上寻求可替代的移植器官。这是因为除了猪的内脏构造、大小、血管分布与人极为相似外，还因为猪体内隐藏的可导致人类疾病的病毒要__________（填“多于”或“少于”）灵长类动物。科学家可将某种调节因子导入到猪的基因组中，以抑制___________基因的表达，从而培育出没有免疫排斥反应的转基因克隆猪器官。在此过程中应用到的技术手段有____________。
（3）通过体细胞核移植技术获得组织器官也是重要途径。大致过程如图所示:
①卵母细胞在去核前，一般在体外要培养到____________期，形成的新细胞用物理或化学方法激活，使其发育。
②图中胚胎干细胞一般由早期胚胎分离并培养而来，在形态上，表现为____________等胚胎细胞的特性。
③图中通过核移植技术获得患者新的胚胎，只是为了从胚胎中提取细胞，并不是以生殖为目的，这种技术称为____________克隆。

【推荐3】请依据你所学习的现代生物科技相关知识，回答下列问题：
(1)进行牛成纤维细胞的培养时，除对培养液和所有培养用具进行______处理外，通常还要在细胞培养液中添加一定量的______。而且需要定期更换培养液，目的是防止______'，并给细胞提供足够的营养。
(2)与胚胎细胞核移植技术相比，体细胞核移植技术的成功率更低，原因是动物胚胎细胞______，恢复其全能性相对容易。从早期胚胎中分离获得的胚胎干细胞，在形态上表现为______（答出两点即可）。
(3)转基因动物的鉴定：先进行相应的单克隆抗体制备。将免疫小鼠中相应的______淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合，然后利用特定的选择培养基筛选出融合的杂种细胞，再进行______，经过多次筛选得到所需的特定杂交瘤细胞，并获得相应的单克隆抗体；然后取转基因动物的肝组织细胞进行鉴定，提取肝组织细胞中的蛋白质，并与刚刚制备的相应单克隆抗体进行______。